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牛支原体抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用 被引量：6
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作者 田可昕 高鹏程 +5 位作者 陈胜利 郑福英 许健 付强 史慧君 储岳峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期831-836,共6页
本试验以牛支原体(Mycoplasma bovis)MilA基因重组蛋白P300为检测靶标抗原包被检测线(T线),山羊抗家兔IgG包被质控线(C线),金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)标记胶体金溶液,以建立牛支原体抗体胶体金免疫层析试纸条检测方法。通过检测牛布氏杆... 本试验以牛支原体(Mycoplasma bovis)MilA基因重组蛋白P300为检测靶标抗原包被检测线(T线),山羊抗家兔IgG包被质控线(C线),金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)标记胶体金溶液,以建立牛支原体抗体胶体金免疫层析试纸条检测方法。通过检测牛布氏杆菌、丝状支原体、牛病毒性腹泻病毒、牛巴氏杆菌和口蹄疫病毒5种病原的阳性血清以及实验室保存的牛支原体阳性血清和临床血清,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果显示,该方法检测牛布氏杆菌、丝状支原体、牛病毒性腹泻病毒、牛巴氏杆菌和口蹄疫病毒5种病原的阳性血清均为阴性;对已知牛支原体阳性血清的检测最高稀释梯度可达1∶2 048;对临床血清检测,与ELISA的检测结果符合率为94.04%。结果表明,牛支原体抗体胶体金免疫层析试纸条特异性好、敏感性高。可用于牛支原体感染的快速诊断,尤其适用于现场检测。 展开更多
关键词 牛支原体 P300重组蛋白 胶体金免疫层析
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基于可见光测定的山羊支原体山羊肺炎亚种抗原定量 被引量：1
2
作者 葛家振 高鹏程 +6 位作者 田彤彤 吴晓妮 李倩倩 田可昕 宋国栋 郑福英 储岳峰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4874-4886,共13页
山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)的病原,可用灭活疫苗和荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)间接血凝试剂进行预防和血... 山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)的病原,可用灭活疫苗和荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)间接血凝试剂进行预防和血清学检测,但高昂的培养成本和复杂的抗原定量一直困扰着生产人员。为解决生产实际中出现的这些问题,本研究基于Mccp代谢组学的前期理论基础,通过改变初始pH值的方法,初步筛选出初始p H值为7.8的可以同时提高2种抗原产量的糖发酵培养基。利用紫外可吸收光谱可识别酚红,以及十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)可与阴离子荚膜多糖结合的理论依据,建立了利用紫外光谱分析Mccp达到的培养阶段,以及利用CTAB沉淀法相对定量发酵液荚膜多糖抗原产量的方法。通过紫外图谱观察的方法可对应Mccp生长曲线进行指导生产,大大节省传统颜色变化单位(color change unit,CCU)法的监测时间,提高了原肉眼观察方法的精确度。建立的CTAB沉淀法可在5 h内完成对CPS含量的监测,与传统的差值法相比大大缩短了时间,并且其准确度得到苯酚-硫酸法的验证。本研究优化的一种培养基和建立的两种相关性比较方法,可有效降低Mccp生产成本,提高生产效率,这些方法已在本实验室的研究阶段得到应用,为进一步改进CCPP灭活疫苗和荚膜多糖的生产工艺以及快速定量提供了实验数据。 展开更多
关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 改良培养基 荚膜多糖 紫外图谱 CTAB沉淀法
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