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Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的接种反应及免疫效果观察 被引量：8
1
作者 周荔葆 赵新 +6 位作者 吴栩涛 王立刚 廖晖 刘苗苗 殷建文 万艾玲 甄祖刚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第8期809-811,共3页
目的观察Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的接种反应及免疫效果。方法选择乙脑低发区黑龙江省肇源县8月龄～10岁常住健康儿童为观察对象,按照免疫程序分别接种辽宁成大生物股份有限公司生产的Vero细胞乙脑灭活疫苗(A组∶水针剂型;B组:冻干剂型... 目的观察Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的接种反应及免疫效果。方法选择乙脑低发区黑龙江省肇源县8月龄～10岁常住健康儿童为观察对象,按照免疫程序分别接种辽宁成大生物股份有限公司生产的Vero细胞乙脑灭活疫苗(A组∶水针剂型;B组:冻干剂型)和市售乙脑灭活疫苗(对照组),观察接种后的不良反应,并采用蚀斑减少中和试验(PRNT)法检测血清乙脑中和抗体。结果A、B组疫苗的总不良反应率为2.81%,对照组为6.63%,3组均未出现严重不良反应,发热反应以轻度为主,局部不良反应较轻微,72h后全部消失。免疫后血清中和抗体阳转率A组为93.3%,B组为90.4%,对照组为81.8%;GMTA组为1∶24.0,B组为1∶21.8,对照组为1∶15.4。A组、B组的中和抗体阳转率和GMT均显著高于对照组,差异有统计学意义,3组之间中和抗体滴度的分布差异无统计学意义。结论辽宁成大生物股份有限公司生产的Vero细胞乙脑灭活疫苗不良反应率低,免疫效果良好。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎 Veto细胞 灭活疫苗 不良反应 免疫效果
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Vero细胞制备流感病毒疫苗 被引量：5
2
作者 殷建文 焦龙 +7 位作者 甄祖刚 刘苗苗 赵新 吴栩涛 王立刚 万艾玲 盖小群 周荔葆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第10期986-989,共4页
目的利用转瓶培养Vero细胞制备流感病毒疫苗。方法将流感病毒接种于Vero细胞上培养,优化培养条件,收获的病毒液经灭活、超滤浓缩和层析纯化,检测病毒的血凝素(HA)滴度及血凝素含量。按此工艺制备流感疫苗,根据血凝素含量稀释为不同浓度... 目的利用转瓶培养Vero细胞制备流感病毒疫苗。方法将流感病毒接种于Vero细胞上培养,优化培养条件,收获的病毒液经灭活、超滤浓缩和层析纯化,检测病毒的血凝素(HA)滴度及血凝素含量。按此工艺制备流感疫苗,根据血凝素含量稀释为不同浓度,免疫小鼠,观察不良反应,并通过血凝抑制(HI)试验检测抗体水平。结果Vero细胞培养流感病毒的最佳条件为:维持液中胰酶浓度12.5～15μg/ml,pH值7.4～7.6,Vero细胞经多次洗换后再接种病毒,病毒在细胞上培养72～96h收毒。所有免疫小鼠均未出现不良反应,小鼠抗体阳转率均为100%,HI抗体滴度均不低于同剂量的阳性对照组。结论Vero细胞可用于流感病毒的培养和制备疫苗。 展开更多
关键词 流感疫苗 VERO细胞 安全性 免疫原性
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狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上适应株的建立 被引量：3
3
作者 廖辉 吴琼 +3 位作者 焦龙 甄祖刚 杨文腰 周荔葆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期785-789,共5页
目的建立狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上的适应株,为狂犬病疫苗研究提供生产用毒株。方法将狂犬病病毒固定株PV2061接种于MRC-5细胞并进行连续性传代,通过对感染剂量(1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500)、收获天数(... 目的建立狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上的适应株,为狂犬病疫苗研究提供生产用毒株。方法将狂犬病病毒固定株PV2061接种于MRC-5细胞并进行连续性传代,通过对感染剂量(1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500)、收获天数(4、7、10、13、16 d)及感染方式(混种感染、吸附感染、带毒传代)的优化,确定在MRC-5细胞上的培养条件,并分析不同层析介质(Sepharose 4FF、Sepharose 6FF)对狂犬病病毒分离纯化效果的影响。结果狂犬病病毒固定株PV2061能较好地适应MRC-5细胞,通过连续性传代,在第4代病毒滴度可达6.0 lgLD_(50)/mL以上,11~19代病毒滴度稳定在6.5 lgLD_(50)/mL。感染剂量在1∶100~1∶500范围内,病毒滴度均能达6.0 lgLD_(50)/mL以上;病毒峰值主要集中在8~13 d;混种感染和带毒传代优于吸附感染,病毒滴度均在5.5 lgLD_(50)/mL以上。与Sepharose 6FF相比,Sepharose 4FF能有效去除总蛋白质,两种介质对抗原回收率均在85%~120%范围内,牛血清白蛋白残留量均低于50 ng/mL。结论建立了MRC-5细胞传代适应的狂犬病病毒适应株MPV2061,为后续人用狂犬病疫苗生产工艺的研究提供了数据支持。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 固定株 二倍体细胞 连续传代 病毒滴度 感染方式 层析纯化
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应用7.5 L生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗 被引量：2
4
作者 周荔葆 殷建文 +7 位作者 赵新 吴栩涛 廖辉 刘苗苗 曲格霆 甄祖刚 焦龙 吴琼 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第11期1414-1416,共3页
目的应用7.5 L生物反应器,培养Vero细胞和乙型脑炎病毒,规模化生产乙型脑炎灭活疫苗。方法应用7.5 L生物反应器,分别以5、10、15、20、25 g/L的微载体密度加装,采用灌流方式培养Vero细胞,分别将P3株乙型脑炎病毒按0.005 00、0.002 50、0... 目的应用7.5 L生物反应器,培养Vero细胞和乙型脑炎病毒,规模化生产乙型脑炎灭活疫苗。方法应用7.5 L生物反应器,分别以5、10、15、20、25 g/L的微载体密度加装,采用灌流方式培养Vero细胞,分别将P3株乙型脑炎病毒按0.005 00、0.002 50、0.001 60、0.001 25、0.001 00 MOI接种至生物反应器内,收获乙脑病毒液。经浓缩、灭活、纯化等工艺制备疫苗半成品,经疫苗灭活及纯化试验进行工艺验证,合格后分装为疫苗成品,按照《中国药典》三部(2010版)中《冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)》要求,进行疫苗全项检定。结果当微载体密度为20、25 g/L时,细胞密度可达1.2×107个/ml,病毒滴度平均达8.33～8.52 lgLD50/ml;当病毒接种量为0.001 25 MOI时,病毒最高滴度可达9.02 lgLD50/ml。经超滤浓缩后的病毒原液,使用1∶4 000β-丙内酯灭活72 h,可达到灭活效果;纯化后可去除90%以上杂蛋白。应用7.5 L生物反应器生产的6批乙型脑炎灭活疫苗,经检定各项指标均符合国家要求。结论应用7.5 L生物反应器培养Vero细胞和P3株乙型脑炎病毒,经连续灌流收获,可规模化生产Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗。 展开更多
关键词 生物反应器 微载体 VERO细胞 乙型脑炎灭活疫苗
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不同感染方式对狂犬病病毒在人二倍体细胞中增殖的影响
5
作者 甄祖刚 周荔葆 +2 位作者 王野 刘春雨 张怡轩 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第2期177-181,共5页
目的考察带毒传代感染、直接吸附感染、混种传代感染三种方式感染人二倍体细胞对狂犬病病毒增殖的影响。方法不同方式感染后,经过细胞工厂生产,获取狂犬病病毒收获液,经过滤澄清、浓缩、纯化、灭活制备疫苗原液。根据《中华人民共和国... 目的考察带毒传代感染、直接吸附感染、混种传代感染三种方式感染人二倍体细胞对狂犬病病毒增殖的影响。方法不同方式感染后,经过细胞工厂生产,获取狂犬病病毒收获液,经过滤澄清、浓缩、纯化、灭活制备疫苗原液。根据《中华人民共和国药典》(2020版)检测方法检测收获液病毒滴度及原液抗原含量。结果带毒传代组的收获液病毒滴度为(6.40±0.33)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(34.8±1.5)IU·mL^(-1);混种传代感染组的收获液病毒滴度为(6.35±0.18)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(34.3±2.1)IU·mL^(-1);直接吸附感染组收获液病毒滴度为(4.71±0.39)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(12.6±2.0)IU·mL^(-1)。结论试验证明狂犬病病毒PV株采用混种传代感染的方式感染人二倍体细胞MRC-5细胞,病毒增殖效果良好,毒种代次明确,工艺操作简单,更适合于狂犬疫苗的生产。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 人二倍体细胞 感染方式 抗原含量
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