目的原核表达流感病毒(influenza virus,IV)球状头部结构域HA1基因,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化,以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白。方法将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F...目的原核表达流感病毒(influenza virus,IV)球状头部结构域HA1基因,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化,以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白。方法将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F076/2018(mixed)]和Influenza A virus[A/USA/LAN_(P5)_HA/2018(H1N1)]进行截短,取63~286头状结构域氨基酸序列,按照大肠埃希菌常用密码子进行优化,合成基因命名为17Sa、Hebei和USA,并对基因17Sa进行点突变命名为基因17Sa变。将4个基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒,将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,并利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白。结果成功插入长度为762 bp的目的基因,重组质粒经双酶切(NheⅠ/XhoⅠ)鉴定构建正确。表达的重组蛋白USA相对分子质量约为26000,17Sa、p17Sa和Hebei相对分子质量约为28000,均可与鼠抗His抗体特异性结合。重组蛋白均以包涵体形式表达,在诱导温度37℃,诱导8 h表达量最高。纯化的重组蛋白17Sa、17Sa变、Hebei和USA纯度分别为90%、85%、95%和80%。结论通过原核表达系统成功表达并纯化了目的蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础。展开更多
文摘目的原核表达流感病毒(influenza virus,IV)球状头部结构域HA1基因,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化,以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白。方法将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F076/2018(mixed)]和Influenza A virus[A/USA/LAN_(P5)_HA/2018(H1N1)]进行截短,取63~286头状结构域氨基酸序列,按照大肠埃希菌常用密码子进行优化,合成基因命名为17Sa、Hebei和USA,并对基因17Sa进行点突变命名为基因17Sa变。将4个基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒,将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,并利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白。结果成功插入长度为762 bp的目的基因,重组质粒经双酶切(NheⅠ/XhoⅠ)鉴定构建正确。表达的重组蛋白USA相对分子质量约为26000,17Sa、p17Sa和Hebei相对分子质量约为28000,均可与鼠抗His抗体特异性结合。重组蛋白均以包涵体形式表达,在诱导温度37℃,诱导8 h表达量最高。纯化的重组蛋白17Sa、17Sa变、Hebei和USA纯度分别为90%、85%、95%和80%。结论通过原核表达系统成功表达并纯化了目的蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础。
