目的观察Cre重组酶能否敲除N甲基D天门冬氨酸受体(N methyl D aspartatereceptor,NMDAR)转基因成熟小鼠海马CA1区域的局部基因。方法利用立体定位微量注射技术将含有Cre重组酶的病毒载体注射到NMDAR转基因成熟小鼠海马CA1区域,利用地高...目的观察Cre重组酶能否敲除N甲基D天门冬氨酸受体(N methyl D aspartatereceptor,NMDAR)转基因成熟小鼠海马CA1区域的局部基因。方法利用立体定位微量注射技术将含有Cre重组酶的病毒载体注射到NMDAR转基因成熟小鼠海马CA1区域,利用地高辛精UTP作标记,以线性NMDAR质粒作模板,产生带有标记的核糖探针并用其对小鼠脑冷冻切片进行荧光原位杂交,之后立即作PicoGreen对照染色,在Confocal显微镜下观察NMDARmRNA表达。结果所获得与NMDARmRNA特异结合的RNA探针大小为446bp,在注射Cre重组酶病毒载体海马CA1区域无NMDARmRNA表达,而且PicoGreen对照染色提示在无NMDARmRNA表达的区域几乎无细胞损害。结论Cre重组酶成功地敲除了NMDAR转基因成熟小鼠海马CA1区域的NMDAR基因。展开更多
文摘目的观察Cre重组酶能否敲除N甲基D天门冬氨酸受体(N methyl D aspartatereceptor,NMDAR)转基因成熟小鼠海马CA1区域的局部基因。方法利用立体定位微量注射技术将含有Cre重组酶的病毒载体注射到NMDAR转基因成熟小鼠海马CA1区域,利用地高辛精UTP作标记,以线性NMDAR质粒作模板,产生带有标记的核糖探针并用其对小鼠脑冷冻切片进行荧光原位杂交,之后立即作PicoGreen对照染色,在Confocal显微镜下观察NMDARmRNA表达。结果所获得与NMDARmRNA特异结合的RNA探针大小为446bp,在注射Cre重组酶病毒载体海马CA1区域无NMDARmRNA表达,而且PicoGreen对照染色提示在无NMDARmRNA表达的区域几乎无细胞损害。结论Cre重组酶成功地敲除了NMDAR转基因成熟小鼠海马CA1区域的NMDAR基因。