不同类型牛血清对MDCK细胞培养效果研究 被引量：9

1

作者 李自良 王家敏 +4 位作者 赵彩红 王美皓 李倬 乔自林 马忠仁 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期21-25,共5页

为建立贴壁培养型细胞最适血清的快速筛选方法,在含10%不同类型牛血清的DMEM培养液中连续传代培养MDCK细胞,分别用传代稳定性观察、绘制生长曲线、分析生长动力学与贴壁率的方法评价不同类型牛血清对MDCK贴壁细胞促生长效果的影响,并进... 为建立贴壁培养型细胞最适血清的快速筛选方法,在含10%不同类型牛血清的DMEM培养液中连续传代培养MDCK细胞,分别用传代稳定性观察、绘制生长曲线、分析生长动力学与贴壁率的方法评价不同类型牛血清对MDCK贴壁细胞促生长效果的影响,并进一步在细胞工厂中扩大培养验证。结果显示,3种类型血清均能较好促进细胞的生长增殖且细胞生长曲线均呈"S"型;MDCK细胞生长动力学分析发现3种类型血清平均比生长速率差异不显著(P>0.05);最大增殖密度和倍增时间胎牛血清均优于新生牛血清;平均集落形成率分析发现,进口胎牛血清略高于国产胎牛血清(P=0.02)、国产新生牛血清低于国产和进口胎牛血清差异极显著(P<0.0001)。国产新生牛血清在1层和10层细胞工厂中连续传代培养MDCK细胞,细胞生长良好,传代过程中细胞生长稳定。通过研究不同类型的牛血清对MDCK细胞培养效果的影响,为疫苗生产中MDCK细胞扩大培养和短时间内成功筛选出培养MDCK细胞的最佳血清提供一定的科学依据。 展开更多

关键词 MDCK细胞 牛血清 贴壁培养 生长曲线 贴壁率

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MDCK悬浮细胞制备及流感病毒敏感性研究 被引量：5

2

作者 李自良 王家敏 +7 位作者 赵彩红 王美皓 李莉 张雪梅 李倬 靳冬武 马忠仁 乔自林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期981-988,共8页

目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞的方法,分析其传代、线性放大过程中的稳定性及增殖流感病毒的敏感性。方法运用逐步降血清悬浮驯化法将贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞;进一步分析其生长动力学特性、连续传代稳定... 目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞的方法,分析其传代、线性放大过程中的稳定性及增殖流感病毒的敏感性。方法运用逐步降血清悬浮驯化法将贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞;进一步分析其生长动力学特性、连续传代稳定性,在5L生物反应器中扩大培养;接种流感和禽流感病毒,测定不同时间HA效价、CCID50滴度,分析其病毒敏感性。结果成功将ATCC引进的贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞(命名为MDCK-XF02细胞)并冻存;不同接种密度培养MDCK-XF02细胞最大增殖密度均达13.0×10^6 cells/mL以上,且差异无统计学意义(P>0.05);连续传代培养过程中细胞形态和生长状况稳定,比生长速率差异无统计学意义(P>0.05);三个代次的MDCK-XF02细胞以2.0×10^6 cells/mL接种于5 L生物反应器,细胞生长状态良好,倍增时间小于21 h,在批培养中细胞浓度高达(14.57±0.47)×10^6 cells/mL,比生长速率分别为(0.027±0.012)h^-1、(0.028±0.013)h^-1、(0.027±0.013)h^-1(P>0.05);接种甲型流感病毒H1N1和H3N2,HA效价达到(6~7)log2HA/25μL、CCID50为(4.35~4.68)lgCCID50/mL;接种乙型流感病毒B/P和BX-35增殖效果更好,HA效价达到(9~10)log2HA/25μL,CCID50为(6.38~7.31)lgCCID50/mL。接种重组禽流感病毒H5亚型Re-5、Re-6、Re-10均能很好的增殖,HA效价达到(7~9)log2HA/25μL、CCID50为(6.21~6.96)lgCCID50/mL。结论本研究获得一株具有自主知识产权的流感/禽流感病毒敏感的无血清悬浮培养型MDCK-XF02细胞株,实现了生物反应器高密度放大培养,为我国开展流感疫苗研究和生产提供细胞基质,也为其他动物细胞悬浮驯化提供参考。 展开更多

关键词 MDCK细胞 无血清 悬浮驯化 流感病毒 禽流感病毒

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动物细胞培养基质片状载体的研究及应用进展

3

作者 马春英(综述) 王美皓(综述) +1 位作者 马忠仁(审校) 王家敏(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期731-736,741,共7页

以聚酯纤维为基质的片状载体具有良好的耐酸碱性、耐热性、生物相容性以及不可生物降解、促进细胞黏附和生长等优点。片状载体无动物源性成分,生物安全性高,是细胞培养基质的首选载体之一。近年来,随着生物技术的发展,广泛应用于细胞基... 以聚酯纤维为基质的片状载体具有良好的耐酸碱性、耐热性、生物相容性以及不可生物降解、促进细胞黏附和生长等优点。片状载体无动物源性成分,生物安全性高,是细胞培养基质的首选载体之一。近年来,随着生物技术的发展,广泛应用于细胞基质生物制品等研发及生产中。本文对片状载体的结构和细胞培养特点以及在疫苗生产、细胞治疗和组织工程等中的应用作一综述,为片状载体技术后续的进一步研发和应用提供理论依据。 展开更多

关键词 片状载体 纤维载体 生物反应器

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基于流感疫苗生产用MDCK细胞的安全性评价

4

作者 康碧静 马芳芳 +3 位作者 马春英 王美皓 乔自林 王家敏 《甘肃畜牧兽医》 2023年第1期34-37,共4页

随着流感疫苗产业升级,传统的鸡胚基质疫苗已经满足不了大众需求,世界卫生组织建议使用细胞来代替鸡胚生产流感疫苗,MDCK细胞被认为是最适合于流感疫苗生产的细胞系之一,但由于MDCK细胞会使免疫缺陷型小鼠形成肿瘤,因此其安全性存在争... 随着流感疫苗产业升级,传统的鸡胚基质疫苗已经满足不了大众需求,世界卫生组织建议使用细胞来代替鸡胚生产流感疫苗,MDCK细胞被认为是最适合于流感疫苗生产的细胞系之一,但由于MDCK细胞会使免疫缺陷型小鼠形成肿瘤,因此其安全性存在争议。本文阐述了MDCK细胞的安全性问题及生产中的应对策略,旨在为细胞基质流感疫苗的生产提供理论基础。 展开更多

关键词 MDCK细胞 安全性 流感疫苗

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无血清悬浮培养MDCK细胞系的建立及生物反应器高密度培养 被引量：4

5

作者 赵彩红 王美皓 +7 位作者 李自良 靳冬武 马花 马忠仁 乔自林 陈宏 张家友 王家敏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1362-1369,共8页

目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞系,分析该悬浮细胞的生长特性、病毒敏感性、代谢动力学特征及生物反应器线性放大的可行性。方法通过逐步降血清和无血清悬浮驯化的方式获得1株MDCK悬浮细胞,检测其病毒敏感性,在1.2 L四联平行生物反应... 目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞系,分析该悬浮细胞的生长特性、病毒敏感性、代谢动力学特征及生物反应器线性放大的可行性。方法通过逐步降血清和无血清悬浮驯化的方式获得1株MDCK悬浮细胞,检测其病毒敏感性,在1.2 L四联平行生物反应器中分析该悬浮细胞以不同初始接种密度(50×10^(4)、100×10^(4)、150×10^(4)、200×10^(4)个/mL)培养的细胞生长特性、代谢动力学特征和最佳传代时间,并进行5 L到75 L生物反应器的线性放大培养。结果贴壁培养型MDCK细胞以3%低血清稳定培养5代后,将该细胞直接适应无血清培养基获得1株MDCK悬浮细胞(命名为MDCK-XF03)并建库,复苏活力为96.8%;细胞接种不同型别的流感病毒均能较好增殖;以不同初始接种密度培养MDCK-XF03细胞,其最大增殖浓度均达1000×10^(4)个/mL以上,且差异无统计学意义(P>0.05),在培养前48 h均具有较大比生长速率,且差异有统计学意义(P<0.05),此时倍增时间也较短,且差异有统计学意义(P<0.05),MDCK-XF03细胞在84 h之前可充分利用葡萄糖。结论成功获得1株MDCK悬浮细胞MDCK-XF03,选择以200×10^(4)个/mL的初始接种密度进行生物反应器大规模培养,实现了从5 L到75 L的高密度线性放大培养,为流感疫苗的工业化生产提供了细胞基质。 展开更多

关键词 MDCK悬浮细胞 流感病毒 高密度增殖 放大培养

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动物细胞生物反应器研究进展 被引量：3

6

作者 李自良 赵彩红 +3 位作者 王美皓 王家敏 乔自林 李倬 《动物医学进展》 北大核心 2020年第6期103-108,共6页

细胞基质生物制品大规模生产工艺的选择首要考虑因素是该产品工艺所涉及的生物反应器系统。论文针对动物细胞培养的基本特点,就不同动物细胞生物反应器的结构和原理、优点与缺点、结构优化、传感器最新进展等进行了综述,其目的在于为生... 细胞基质生物制品大规模生产工艺的选择首要考虑因素是该产品工艺所涉及的生物反应器系统。论文针对动物细胞培养的基本特点,就不同动物细胞生物反应器的结构和原理、优点与缺点、结构优化、传感器最新进展等进行了综述,其目的在于为生物制品研发和生产实际应用中选择更加适合培养工艺的生物反应器,提高动物细胞大规模培养生产生物制品的效率,也为促进新型生物反应器的研究与开发提供一定的参考。 展开更多

关键词 动物细胞 生物反应器 生物制品

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悬浮培养型BHK-21细胞生长特性及成瘤性研究 被引量：3

7

作者 赵彩红 王美皓 +3 位作者 臧荣鑫 乔自林 马忠仁 王家敏 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2019年第4期53-59,共7页

目的:了解低血清驯化的悬浮培养型BHK-21细胞的生长特性及致裸鼠成瘤能力.方法:比较研究悬浮型和贴壁型BHK-21细胞的细胞形态、生长动力学和成瘤性.结果:驯化的悬浮培养型和贴壁培养型BHK-21细胞生长状态均良好,最大增殖浓度分别为517&#... 目的:了解低血清驯化的悬浮培养型BHK-21细胞的生长特性及致裸鼠成瘤能力.方法:比较研究悬浮型和贴壁型BHK-21细胞的细胞形态、生长动力学和成瘤性.结果:驯化的悬浮培养型和贴壁培养型BHK-21细胞生长状态均良好,最大增殖浓度分别为517×10^4/mL和39.67×10^4/mL,群体倍增时间分别为23.03 h和21.36 h,能显著提高细胞培养密度(P<0.05).背部皮下接种致裸鼠成瘤性实验表明,驯化的悬浮培养型组裸鼠的体重增长率均低于贴壁培养型BHK-21细胞、阳性细胞组(Hela)和阴性细胞组(KMB17)(P>0.05),裸鼠成瘤体积增长率均高于其他三组(P<0.05).结论:驯化的悬浮培养型BHK-21细胞能显著提高细胞密度,其成瘤性方面还需进一步改善. 展开更多

关键词 驯化后悬浮培养型BHK-21细胞 贴壁培养型BHK-21细胞 生长特性 成瘤性

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不同批次新生牛血清对CHO细胞培养效果的研究 被引量：2

8

作者 马春英 王美皓 +4 位作者 马花 佛生福 乔自林 马忠仁 王家敏 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2021年第2期67-73,共7页

为建立静置及微载体悬浮培养中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)的最适血清的快速筛选方法,在含10%不同批次国产新生牛血清的F12培养液中培养CHO细胞,分别用传代稳定性观察、克隆形成率、绘制微载体培养生长曲线及生长... 为建立静置及微载体悬浮培养中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)的最适血清的快速筛选方法,在含10%不同批次国产新生牛血清的F12培养液中培养CHO细胞,分别用传代稳定性观察、克隆形成率、绘制微载体培养生长曲线及生长动力学分析的方法,评价不同批次国产新生牛血清对CHO细胞促生长效果的影响.结果显示:静置培养,6个批号新生牛血清均能较好促进CHO细胞增殖,平均集落形成率从高到低依次为D、F、B、E、C、A血清组,且D、F、B组显著高于E组,A组显著低于E组(P<0.05);微载体悬浮培养,6个批号新生牛血清均能实现CHO细胞的微载体悬浮培养,对比发现B、D、F明显优于A、C,E最差.生长动力学分析发现平均比生长速率、平均倍增时间和最大增殖浓度从高到低依次为D、F、B、E、C、A血清组,且D、F组显著高于E组(P<0.05).通过不同批次国产新生牛血清对CHO细胞培养效果影响的研究,旨在为生物制品生产中CHO细胞扩大培养和短时间内成功筛选出培养CHO细胞的最佳血清提供一定的参考依据. 展开更多

关键词 CHO细胞 牛血清 微载体 生长曲线 克隆率

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流式细胞术优化MDCK细胞基因转染效率的研究 被引量：2

9

作者 王家敏 王美皓 +5 位作者 马玉梅 靳冬武 赵彩红 李自良 乔自林 马忠仁 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2020年第1期16-20,共5页

为探究脂质体介导的MDCK细胞基因转染效率,并获得最佳的优化方案,本研究选取不同配比的质粒和脂质体浓度,将p-EGFP-C1质粒转入MDCK细胞.转染后36 h,利用台盼蓝染色法检测细胞活率,流式细胞术检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达... 为探究脂质体介导的MDCK细胞基因转染效率,并获得最佳的优化方案,本研究选取不同配比的质粒和脂质体浓度,将p-EGFP-C1质粒转入MDCK细胞.转染后36 h,利用台盼蓝染色法检测细胞活率,流式细胞术检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况和转染效率,获得优化的转染条件.结果发现,转染后MDCK细胞,实验组细胞活力与阴性对照组差异不显著(P>0.05).当质粒(μg)∶脂质体(μL)浓度配比为0.5∶1.0、0.5∶1.25、0.5∶1.5时,转染率达到了较高水平,分别为(23.4±3.4)%、(24.5±4.5)%、(25.2±3.7)%,从经济因素考虑,脂质体介导的MDCK细胞基因转染质粒(μg)与脂质体(μL)的最佳配比浓度为0.5∶1.0.这为MDCK细胞用于基因转染提供了一定的理论基础. 展开更多

关键词 MDCK细胞 基因转染 脂质体 流式细胞术

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不同传代比例对MDCK细胞培养效果的影响 被引量：1

10

作者 王美皓 李自良 +5 位作者 赵彩红 李倬 张雪梅 乔自林 马忠仁 王家敏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第11期1230-1234,1239,共6页

目的探讨不同传代比例对MDCK细胞培养效果的影响。方法用含10%牛血清的DMEM培养液培养MDCK细胞,按不同传代比例(1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8)连续传5代,观察细胞形态、长势、致密程度,绘制生长曲线,并通过生长动力学方法评价不同传代... 目的探讨不同传代比例对MDCK细胞培养效果的影响。方法用含10%牛血清的DMEM培养液培养MDCK细胞,按不同传代比例(1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8)连续传5代,观察细胞形态、长势、致密程度,绘制生长曲线,并通过生长动力学方法评价不同传代比例对MDCK细胞培养效果的影响。同时按最佳传代比例于细胞工厂(1层、10层)中进行扩大培养。结果不同传代比例的MDCK细胞均可在48 h增殖至致密单层,细胞生长曲线均趋于"S"型,细胞最大增殖密度均达11×10^4个/cm^2以上。传代比例为1∶8的MDCK细胞平均最大比生长速率显著高于1∶4、1∶5、1∶6的比例(P<0.05),倍增时间显著短于1∶4、1∶5、1∶6、1∶7的比例(P<0.05)。按1∶8的比例在1层和10层细胞工厂中连续传代培养的MDCK细胞生长良好,且稳定。结论按1∶8比例传代的MDCK细胞培养效果最佳。 展开更多

关键词 MDCK细胞 传代培养 生长曲线

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一种血清替代物对MDCK细胞培养特性的研究 被引量：1

11

作者 王美皓 王家敏 +6 位作者 刘文凯 佛生福 靳冬武 马玉梅 马忠仁 乔自林 丁功涛 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2020年第2期67-72,共6页

为评估一种血清替代物(Billion cell)支持动物细胞体外培养的效果,分别在含10%Billion cell(3个储存温区37℃、4℃、-20℃)和10%FBS的DMEM培养液中连续传代培养MDCK细胞,利用传代稳定性观察、克隆形成率、绘制生长曲线及生长动力学分析... 为评估一种血清替代物(Billion cell)支持动物细胞体外培养的效果,分别在含10%Billion cell(3个储存温区37℃、4℃、-20℃)和10%FBS的DMEM培养液中连续传代培养MDCK细胞,利用传代稳定性观察、克隆形成率、绘制生长曲线及生长动力学分析的方法,评价Billion cell对MDCK细胞促生长效果的影响.结果显示:静置培养,-20℃、4℃储存温区的Billion cell和FBS能较好促进MDCK细胞增殖,平均集落形成率从高到低依次为-20℃Billion cell、FBS、4℃Billion cell、37℃Billion cell;生长动力学分析发现平均比生长速率、平均倍增时间和最大增殖浓度从高到低依次为-20℃Billion cell、FBS、4℃Billion cell、37℃Billion cell,故-20℃储存温区的Billion cell支持MDCK细胞培养效果最佳且优于FBS.通过Billion cell对MDCK细胞培养效果影响的研究,旨在开发替代牛血清支持动物细胞培养的有效血清替代物,为生物制品生产提供必要条件. 展开更多

关键词 血清替代物 MDCK细胞 生长动力学 克隆率

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不同培养基中MDCK细胞生长及代谢动力学研究 被引量：1

12

作者 赵彩红 王家敏 +4 位作者 李自良 王美皓 臧荣鑫 马忠仁 乔自林 《生物技术》 CAS 2019年第5期485-491,共7页

[目的]为筛选适应于MDCK细胞大规模培养的最佳培养基并揭示其代谢动力学规律。[方法]选取商业化的培养基DMEM(试验组A)、EMEM(试验组B)、MEM(试验组C)、M199(试验组D)、DMEM/F12(试验组E)及DMEM:EMEM复合培养基(试验组F)用于MDCK细胞传... [目的]为筛选适应于MDCK细胞大规模培养的最佳培养基并揭示其代谢动力学规律。[方法]选取商业化的培养基DMEM(试验组A)、EMEM(试验组B)、MEM(试验组C)、M199(试验组D)、DMEM/F12(试验组E)及DMEM:EMEM复合培养基(试验组F)用于MDCK细胞传代培养,研究不同培养基对MDCK细胞生长特性的影响,分析MDCK细胞生长过程中葡萄糖(Gluc)、乳酸(Lac)、谷氨酰胺(Gln)和氨(NH4+)的代谢情况,并进一步进行细胞工厂的培养验证。[结果]结果表明MDCK细胞均能在试验组A、B、E、F四种培养基中生长,其最大增殖浓度E> A> F> B,差异显著(P <0. 05);倍增时间B> F> A> E,差异显著(P <0. 05);细胞比生长速率E> A> F> B,差异不显著(P> 0. 05)。不同培养基培养MDCK细胞对数生长期平均葡萄糖比消耗速率、谷氨酰胺比消耗速率及氨比生成速率差异均不显著(P> 0. 05),乳酸比生成速率差异显著(P <0. 05)。在试验组A和E培养基中细胞能实现高密度增殖,再将其进行细胞工厂扩大培养验证,发现两种培养基在培养48 h时均能达到单层致密,且细胞密度均达到8. 0×10~8/cells以上,差异不显著(P> 0. 05)。[结论]综合研究结果及规模化生产成本因素,采用DMEM培养基(试验组A)培养MDCK细胞,其最大增殖浓度达到6. 4×10~5/m L,倍增时间为22. 835 h,比生长速率为0. 558,可进行大规模培养,为工业化生产提供依据。 展开更多

关键词 MDCK细胞 培养基 细胞工厂 生长特性 代谢动力学

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人用疫苗生产用细胞基质安全性评估现状 被引量：1

13

作者 王美皓 刘文凯(综述) +1 位作者 乔自林 王家敏(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期362-366,371,共6页

疫苗接种是保护机体免受疫病侵害的一种有效的防御机制。随着科技的进步以及疫苗需求量的日益上升,疫苗生产商通过不断探索,在疫苗生产工艺的上游融合细胞培养技术,利用细胞基质对病毒性疫苗进行大规模的生产。面对监管部门颁布的严格... 疫苗接种是保护机体免受疫病侵害的一种有效的防御机制。随着科技的进步以及疫苗需求量的日益上升,疫苗生产商通过不断探索,在疫苗生产工艺的上游融合细胞培养技术,利用细胞基质对病毒性疫苗进行大规模的生产。面对监管部门颁布的严格的安全生产条令,如何对细胞基质进行安全性评估已经成为疫苗生产商必须考虑的重点。本文将着重介绍疫苗生产用细胞基质的相关安全性问题,旨在为生产新型病毒性疫苗提供细胞基质安全性方面的相关参考。 展开更多

关键词 疫苗 生产工艺 细胞基质 生物反应器

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MDCK贴壁细胞中ZO-1蛋白的表达研究 被引量：1

14

作者 冶金 王美皓 +4 位作者 敖慧娟 杨琨 阿依木古丽 乔自林 柏家林 《甘肃畜牧兽医》 2019年第8期9-11,13,共4页

目的:本实验通过观察ZO-1蛋白在MDCK细胞的表达情况,为研究MDCK贴壁细胞内源性蛋白表达及功能作用提供数据支持。方法:本实验采用免疫组化及免疫荧光的方法对MDCK细胞进行染色,观察ZO-1蛋白的表达情况。结果:ZO-1蛋白在胞核及胞质中均... 目的:本实验通过观察ZO-1蛋白在MDCK细胞的表达情况,为研究MDCK贴壁细胞内源性蛋白表达及功能作用提供数据支持。方法:本实验采用免疫组化及免疫荧光的方法对MDCK细胞进行染色,观察ZO-1蛋白的表达情况。结果:ZO-1蛋白在胞核及胞质中均有表达,胞核为强阳性,胞质为弱阳性。结论:ZO-1蛋白于MDCK细胞中强表达,可能与其至瘤性存在相关作用。 展开更多

关键词 MDCK细胞 ZO-1蛋白 免疫组化 荧光染色

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