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包涵体蛋白复性的几种方法 被引量:25
1
作者 罗惠霞 李敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期96-98,共3页
外源基因在大肠杆菌中高水平表达时,通常会形成无活性的蛋白聚集体即包涵体。包涵体富含表达的重组蛋白,经分离、变性溶解后须再经过一个合适的复性过程实现变性蛋白的重折叠,才能够得到生物活性蛋白。
关键词 包涵体 复性
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枸杞黄酮提取方法的比较研究 被引量:21
2
作者 张自萍 黄文波 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2007年第1期60-62,共3页
以宁夏枸杞总黄酮提取率为指标,利用正交设计优化实验条件,比较研究了微波提取与常用提取方法(回流提取法、超声波提取法)所得枸杞总黄酮的提取率,优选了枸杞总黄酮的提取方法.与回流法相比,超声波和微波提取法都能明显缩短提取时间,有... 以宁夏枸杞总黄酮提取率为指标,利用正交设计优化实验条件,比较研究了微波提取与常用提取方法(回流提取法、超声波提取法)所得枸杞总黄酮的提取率,优选了枸杞总黄酮的提取方法.与回流法相比,超声波和微波提取法都能明显缩短提取时间,有效提高枸杞黄酮的提取率,特别是微波提取能显著提高枸杞黄酮的提取效率.微波提取的最佳实验条件为温度100℃,固液比1∶30,火力3,提取时间20 min.结果表明,用微波提取法提取宁夏枸杞总黄酮具有高效、省时的特点,值得在中药提取中推广应用. 展开更多
关键词 宁夏枸杞 总黄酮 超声波提取 微波提取 正交试验
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非洲猪瘟病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:18
3
作者 李维彬 蒋正军 +4 位作者 龚振华 许崇波 郭福生 郑增忍 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2007年第1期56-59,共4页
为建立一种快速、准确、特异的非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)定量检测方法,根据TaqMan探针荧光定量分析原理,对ASFV核酸进行了实时荧光定量PCR分析.借助计算机软件辅助,对ASFV基因序列及检测引物和探针进行了优化筛选,... 为建立一种快速、准确、特异的非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)定量检测方法,根据TaqMan探针荧光定量分析原理,对ASFV核酸进行了实时荧光定量PCR分析.借助计算机软件辅助,对ASFV基因序列及检测引物和探针进行了优化筛选,利用pET-ASFVP72质粒作为参比模板对PCR反应的Mg2+、引物、探针浓度等参数进行了优化,其最佳浓度分别为4.5 mmol/L,400 nmol/L和500 nmol/L.同时,对灵敏度、特异性、定量线性关系、精确度等进行了评估,最低检出量为102个拷贝数的质粒,特异性为100%,CT(Cycle Threshold)值的变异系数CV小于5%.对送检的15份(是否感染ASFV不确定)猪肉样品进行检测,结果全为阴性.试验表明,所建立的实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异、灵敏地对ASFV核酸进行定量分析,从而为非洲猪瘟的检测提供了一个新的、可靠的方法. 展开更多
关键词 非洲猪瘟 TagMan探针 实时荧光定量PCR
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枸杞子提取液抗氧化活性的研究 被引量:14
4
作者 张自萍 黄文波 +1 位作者 廖国玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期943-946,共4页
用Folin-Ciocalteu法、DPPH法和Fenton法分别对脱脂及未脱脂枸杞子的水和50%、80%、95%乙醇提取液的抗氧化活性进行测定。结果显示:3种方法所得结果具有一致的规律,相同提取条件下,未脱脂枸杞子的抗氧化活性大于脱脂枸杞子;随着乙醇浓... 用Folin-Ciocalteu法、DPPH法和Fenton法分别对脱脂及未脱脂枸杞子的水和50%、80%、95%乙醇提取液的抗氧化活性进行测定。结果显示:3种方法所得结果具有一致的规律,相同提取条件下,未脱脂枸杞子的抗氧化活性大于脱脂枸杞子;随着乙醇浓度增大,枸杞子提取液的抗氧化活性逐渐减小,即水>50%乙醇>80%乙醇>95%乙醇枸杞子提取液。表明枸杞子中水溶性提取物的抗氧化活性高于脂溶性提取物;不同提取液抗氧化能力的差异说明枸杞子的抗氧化能力是枸杞子中水溶性和脂溶性多种成分协同作用的结果。 展开更多
关键词 枸杞 DPPH FOLIN-CIOCALTEU 羟基自由基 抗氧化活性
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病原微生物快速检测方法及研究进展 被引量:16
5
作者 李维彬 郭辰虹 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第2期67-71,共5页
近年来,随着现代生物技术的快速发展,人类基因组计划的完成,尤其是生物化学、分子生物学、免疫学、生物仪器及计算机理论与技术的进步,新的诊断技术和方法不断涌现并被广泛应用于微生物检测,使得疾病诊断的水平有了很大的提高。根据目... 近年来,随着现代生物技术的快速发展,人类基因组计划的完成,尤其是生物化学、分子生物学、免疫学、生物仪器及计算机理论与技术的进步,新的诊断技术和方法不断涌现并被广泛应用于微生物检测,使得疾病诊断的水平有了很大的提高。根据目前国内外研究的动向,本文对一些常规及新型检测技术的原理、特点及应用做一综述。 展开更多
关键词 病原微生物 快速检测方法
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大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)的分子生物学研究进展 被引量:9
6
作者 许崇波 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 2001年第3期331-336,共6页
大肠杆菌的耐热性肠毒素 (ST)在产肠毒素性大肠杆菌引起的腹泻中扮演重要的角色 ,对人类和家畜的健康构成很大的威胁 .文章从ST的理化特性、致病机理等一般生物学特性到基因克隆、定点突变以及分子结构与功能的关系等分子生物学特征 ,... 大肠杆菌的耐热性肠毒素 (ST)在产肠毒素性大肠杆菌引起的腹泻中扮演重要的角色 ,对人类和家畜的健康构成很大的威胁 .文章从ST的理化特性、致病机理等一般生物学特性到基因克隆、定点突变以及分子结构与功能的关系等分子生物学特征 ,全面概述了ST的分子生物学研究进展 ,对于从分子水平全面了解ST的结构、性质、致病机理以及免疫原性等生物学性状具有重要意义 . 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐热性肠毒素 分子生物学 腹泻
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产气荚膜梭菌β-毒素研究进展 被引量:10
7
作者 《宁夏农学院学报》 1999年第3期74-78,共5页
关键词 产气荚膜梭菌 β-毒素 研究进展 分子生物学
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枸杞子中2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸抑制黑素合成的研究 被引量:12
8
作者 张自萍 李弘武 +2 位作者 廖国玲 李敏 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期689-692,共4页
目的:研究枸杞子中2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)对体外培养的B16黑素瘤细胞黑素合成的影响及作用机制。方法:不同浓度的AA-2βG作用于B16黑素瘤细胞,测定细胞的增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量,并以维生素C(Vc)作对照。结果:A... 目的:研究枸杞子中2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)对体外培养的B16黑素瘤细胞黑素合成的影响及作用机制。方法:不同浓度的AA-2βG作用于B16黑素瘤细胞,测定细胞的增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量,并以维生素C(Vc)作对照。结果:AA-2BG在浓度为2.96和4.44mmol·L^(-1)时,对B16细胞增殖抑制率可达75.99%和85.97%,对黑素合成的抑制率为32.29%和58.75%;AA-2βG对细胞生长中酪氨酸酶活性的半抑制率浓度(IC_(50))为1.84mmol·L^(-1),而Vc则为3.85mmol·L^(-1),表明AA-2βG对酪氨酸酶抑制效果优于Vc。结论:AA- 2βG具有明显的抑制细胞黑素合成作用。 展开更多
关键词 枸杞子 2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸 B16黑素瘤细胞
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产气荚膜梭菌的β_2毒素基因克隆及其核苷酸序列分析 被引量:9
9
作者 邓光存 +2 位作者 曾瑾 许崇波 李芳 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第1期63-65,共3页
利用PCR技术 ,从C型产气荚膜梭菌中国标准株C5 9— 4 4基因组DNA中扩增出了约 0 .7kb的基因 ,并将其克隆到pGEM T载体上 ,经酶切鉴定及核苷酸序列分析表明 ,该基因片段的核苷酸序列与国外报道的 β2 毒素基因序列一致 .
关键词 产气荚膜梭菌 β2毒素 基因克隆 核苷酸 序列分析
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产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆与核苷酸序列分析 被引量:11
10
作者 许崇波 +2 位作者 冯书章 朱平 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期541-544,共4页
为了给产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)β毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料,用聚合酶链式反应(PCR)技术,从B型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了930bp的β... 为了给产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)β毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料,用聚合酶链式反应(PCR)技术,从B型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了930bp的β-毒素基因。用限制性核酸内切酶BamHI和EcoRI对PCR产物进行双酶切处理,然后通过T4DNA连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒pET-28C(+)的多克隆位点,转化至受体菌BL21(DE3)中。经BamHI和EcoRI双酶切分析和PCR扩增检测,证明重组质粒pECB2中含有产气荚膜梭菌的β-毒素基因。经核苷酸序列分析,明确了克隆的β-毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 β-毒素基因 基因克隆 核苷酸序列
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大肠杆菌感受态细胞制备方法及应用的研究进展 被引量:9
11
作者 李芳 墙克信 《宁夏医学院学报》 2003年第5期372-374,共3页
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 制备方法 分子克隆 分子生物学 超高效法
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结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的筛选与亲和性分析 被引量:10
12
作者 马占忠 秦莲花 +1 位作者 胡忠义 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2007年第5期45-48,共4页
目的通过建立指数级富集配体的系统进化技术(SELEX),筛选结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的方法,获得ESAT-6的高亲和性适体,为结核病诊断和治疗试剂的开发奠定基础。方法体外构建一个长度为78个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,以微孔板为筛... 目的通过建立指数级富集配体的系统进化技术(SELEX),筛选结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的方法,获得ESAT-6的高亲和性适体,为结核病诊断和治疗试剂的开发奠定基础。方法体外构建一个长度为78个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,以微孔板为筛选介质,SELEX技术筛选获得ESAT-6的适体库,将适体库克隆、测序,用DNAMAN软件对其结构进行分析,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定亲和力,找出高亲和性适体。结果经过13轮筛选,ssDNA文库与ESAT-6亲和力从0.257提高到1.163,且12轮后A值趋于平衡,克隆、测序获得ESAT-6的高亲和性适体,其中适体A10亲和力最高,达到1.515,且与CFP10-ESAT6融合蛋白无交叉反应。二级结构显示,口袋和茎环结构可能是适体与ESAT-6结合的结构基础。结论成功建立了SELEX筛选技术,并初步获得了ESAT-6的高亲和性适体。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 ESAT-6 指数级富集配体的系统进化技术 适体
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C型产气荚膜梭菌β_1、β_2毒素基因的融合 被引量:11
13
作者 许崇波 曾瑾 +1 位作者 许崇利 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期205-208,共4页
利用PCR技术 ,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出 β1 和 β2 毒素基因 ,构建了含 β1 - β2 融合基因表达质粒的重组菌株BL2 1(DE3) (pETXB1_2 )。经酶切鉴定和序列测定证实 ,构建的重组质粒pETXB1_2含有 β1 - β2 融合基因 ,且基... 利用PCR技术 ,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出 β1 和 β2 毒素基因 ,构建了含 β1 - β2 融合基因表达质粒的重组菌株BL2 1(DE3) (pETXB1_2 )。经酶切鉴定和序列测定证实 ,构建的重组质粒pETXB1_2含有 β1 - β2 融合基因 ,且基因序列和阅读框架正确。经ELISA检测 ,重组菌株表达的 β1 - β2 融合蛋白能够被 β1 、β2 毒素抗体识别。免疫实验结果表明 ,用β1 - β2 融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗 1MLD的C型产气荚膜梭菌C5 9_4 4毒素攻击 ,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 β1毒素 β2毒素 融合基因 基因表达
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C型产气荚膜梭菌保护性抗原的免疫原性 被引量:10
14
作者 韩学波 曾瑾 +1 位作者 蔡琴 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期201-203,共3页
目的研究C型产气荚膜梭菌α-β2-β1融合基因重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1抗原的免疫原性。方法在对重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1进行优化表达的基础上,制备包涵体粗提物、全细胞培养物及全细胞乳糖诱导培养物3种抗原,对ICR小鼠进... 目的研究C型产气荚膜梭菌α-β2-β1融合基因重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1抗原的免疫原性。方法在对重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1进行优化表达的基础上,制备包涵体粗提物、全细胞培养物及全细胞乳糖诱导培养物3种抗原,对ICR小鼠进行攻毒保护试验。结果重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1能够表达α-β2-β1融合蛋白,该融合蛋白能够有效刺激免疫小鼠产生特异性抗体,达到保护的目的。结论已获得具有一定免疫原性的重组工程菌,可作为预防产气荚膜梭菌所引起疾病的候选菌株。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 保护性抗原 融合蛋白 免疫原性
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重组纤溶酶原激活剂及其突变体的表达研究 被引量:7
15
作者 李敏 扈荣良 +2 位作者 张守峰 赵君 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 2002年第1期71-75,共5页
利用PCR技术 ,获得了人体组织型纤溶酶原激活剂tPAcDNA的缺失突变体———rPA ;在此基础上 ,运用定点突变技术 ,得到rPA的定点突变体———rPA(KHRR2 96~ 2 99AAAA) ,rPA(A473S)和二者的复合突变体rPA(KHRR2 96~2 99AAAA A473S) ;将rP... 利用PCR技术 ,获得了人体组织型纤溶酶原激活剂tPAcDNA的缺失突变体———rPA ;在此基础上 ,运用定点突变技术 ,得到rPA的定点突变体———rPA(KHRR2 96~ 2 99AAAA) ,rPA(A473S)和二者的复合突变体rPA(KHRR2 96~2 99AAAA A473S) ;将rPA及其 3个突变体分别亚克隆至原核表达载体pET 2 8a(+)中 ,获得表达载体pErA ,pErA(K) ,pErA(A)和pErA(KA) .酶切鉴定和序列分析结果均表明实现了实验设计的氨基酸突变 .表达载体转化大肠杆菌 ,经IPTG诱导、菌体裂解及SDS PAGE电泳分析发现 ,只缺失而无突变的pErA和突变的pErA(A)都未表达目的蛋白 ,突变体pErA(K)与pErA(KA)则获高水平表达 ;蛋白产量分别占菌体总蛋白的 35 .97%与 37.71% ,分子量均为 39.6kD .Westernblotting显示 ,表达产物与抗tPA抗体呈特异性阳性反应 .该产物经初步纯化后进行复性与活性 (mFAPA)测定 ,结果表明其复性产物具有明显的体外纤溶活性 .以上结果为rPA突变体的进一步纯化。 展开更多
关键词 重组纤溶酶原激活剂 突变体 基因表达 PCR技术 纤溶活性 溶栓药物
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正交试验研究枸杞多糖的微波辅助提取 被引量:10
16
作者 张自萍 黄文波 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2006年第1期72-74,共3页
以枸杞多糖相对含量为考察指标,采用正交试验法考察微波火力、提取时间及提取温度对枸杞多糖提取效率的影响,并与常规热水回流提取法进行了比较.结果表明,微波辅助提取的最佳条件为提取温度120℃,微波火力为3,在此条件下提取2次,每次24 ... 以枸杞多糖相对含量为考察指标,采用正交试验法考察微波火力、提取时间及提取温度对枸杞多糖提取效率的影响,并与常规热水回流提取法进行了比较.结果表明,微波辅助提取的最佳条件为提取温度120℃,微波火力为3,在此条件下提取2次,每次24 min.与常规提取法相比,微波辅助提取技术具有提取时间短、提取率高等优点. 展开更多
关键词 微波辅助提取 枸杞多糖 正交试验
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水稻半胱氨酸蛋白酶OsCP2的特征分析及其原核表达与纯化 被引量:9
17
作者 严秀蕊 张大生 +2 位作者 梁婉琪 张大兵 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2010年第2期140-146,共7页
半胱氨酸蛋白酶是植物体中重要的蛋白水解酶,广泛参与种子萌发、幼苗发育、胁迫响应和组织分化衰老等生理过程。我们对水稻中半胱氨酸蛋白酶基因OsCP2(Oryza sativa cysteine protease 2)序列进行分析。该基因cDNA全长2279bp,由2个外显... 半胱氨酸蛋白酶是植物体中重要的蛋白水解酶,广泛参与种子萌发、幼苗发育、胁迫响应和组织分化衰老等生理过程。我们对水稻中半胱氨酸蛋白酶基因OsCP2(Oryza sativa cysteine protease 2)序列进行分析。该基因cDNA全长2279bp,由2个外显子和1个内含子组成;包含1个1089bp的开放读码框,编码1个含362个氨基酸残基的蛋白,在蛋白氨基端有一36个氨基酸组成的信号肽。生物信息学分析表明,OsCP2与大麦半胱氨酸蛋白酶HvCP同源性最高,同属木瓜蛋白酶亚家族。另外,我们构建了pET32a/CP2原核表达载体,通过转化大肠杆菌BL21DE3,成功表达了OsCP2重组蛋白,分子量约为58kD;通过纯化包涵体获得了纯度高达90%以上的重组OsCP2蛋白,这为进一步研究该基因的功能提供了基础。 展开更多
关键词 水稻 OsCP2 原核表达 克隆
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毒力岛与细菌致病性 被引量:9
18
作者 曾瑾 邓光存 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期80-83,96,共5页
毒力岛作为细菌染色体上一段具有典型结构特征的基因簇,与多种致病菌毒力因子的产生和细菌的进化有密切的关系,研究毒力岛对于认识致病细菌的变异,阐述病原菌的致病机理,预测新病原菌的出现有着十分重要的意义。
关键词 细菌 毒力岛 致病性
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脑海绵状血管瘤的研究进展 被引量:9
19
作者 纪宝虎 《国外医学(遗传学分册)》 CAS 2004年第6期384-387,共4页
脑海绵状血管瘤是一种常见的多发病,在临床上可分为家族性遗传和散发性病例两大类。由于致病基因和发病机制尚未完全探明,治疗十分困难。但发病率高,拥有广阔的治疗前景,所以对脑海绵状血管瘤的研究已经成为医学和分子遗传学研究领域的... 脑海绵状血管瘤是一种常见的多发病,在临床上可分为家族性遗传和散发性病例两大类。由于致病基因和发病机制尚未完全探明,治疗十分困难。但发病率高,拥有广阔的治疗前景,所以对脑海绵状血管瘤的研究已经成为医学和分子遗传学研究领域的热点之一。现已取得了一些进展,主要包括:已经定位出一些致病座位(locus),克隆出一个致病基因,并在可能的发病机制方面通过多种方法进行了初步研究。本文将结合汉族人群中相关病例对该病的研究进展作一综述,以期为国内对脑海绵状血管瘤的研究提供参考资料。 展开更多
关键词 脑海绵状血管瘤 致病基因 治疗 研究进展 发病机制 常见 制方 克隆 汉族人群 初步研究
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C型产气荚膜梭菌α、β_1毒素基因的融合 被引量:8
20
作者 许崇波 许崇利 +3 位作者 刘庆平 朱永宁 曾瑾 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期71-74,84,共5页
利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出α和β1 毒素基因,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建了含αβ1 融合基因表达质粒重组菌株BL2 1 (DE3) (pETXAB1 )。经酶切鉴定和核苷酸序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1... 利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出α和β1 毒素基因,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建了含αβ1 融合基因表达质粒重组菌株BL2 1 (DE3) (pETXAB1 )。经酶切鉴定和核苷酸序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1含有αβ1 融合基因,且基因序列和阅读框架均正确。经ELISA检测,重组菌株表达的αβ1 融合蛋白能够被α、β1 毒素抗体识别。免疫实验结果表明,αβ1 融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的C型产气荚膜梭菌C5 9 44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株。 展开更多
关键词 C型产气荚膜梭菌 Α毒素 β1毒素 基因融合 PCR 仔猪 红痢 基因工程亚单位苗
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