目的运用网络药理学和分子对接方法探讨六味地黄丸治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制。方法通过检索多个数据库及查阅文献筛选出六味地黄丸活性成分和对应靶点,借助Genecard、OMIM和Drugbank数据库收集DN作用靶点并通...目的运用网络药理学和分子对接方法探讨六味地黄丸治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制。方法通过检索多个数据库及查阅文献筛选出六味地黄丸活性成分和对应靶点,借助Genecard、OMIM和Drugbank数据库收集DN作用靶点并通过Venny 2.1软件筛选出药物-疾病共同作用靶点。随后,利用STRING和Cytoscape软件分析和构建蛋白质-蛋白质相互作用网络并使用CytoNCA插件进行拓扑分析刷选出核心靶点。然后,利用ClueGO插件进行GO(GO Ontology)功能富集分析和KEGG-(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析。最后,使用AutoDock软件通过分子对接验证活性化合物与核心靶点的结合能力。结果六味地黄丸40个活性成分通过调控128个DN相关靶点,尤其是通过调控28个核心靶点,参与调控体内基因转录、细胞凋亡和增殖、信号转导、炎症反应及蛋白质磷酸化等生物学过程,干预肿瘤、AGE-RAGE、IL-17、MAPK、HIF-1、Toll样受体等信号通路发挥治疗DN的作用。分子对接验证了5种活性化合物与其作用的关键靶点具有可靠的亲和力。结论推测六味地黄丸治疗DN具有多成分-多靶点-多途径的特点,为进一步研究六味地黄丸治疗DN的分子机制提供了新思路和新方向。展开更多
目的观察不同压力CO_2气腹处理对结肠癌HT-29细胞体内外增殖与侵袭能力的影响。方法以HT-29细胞暴露于5 mm Hg、10 mm Hg及15 mm Hg CO_2压力下1h建立体外模拟气腹模型为三个实验组,另以常规培养HT-29细胞为对照组。处理1 h后,立即取各...目的观察不同压力CO_2气腹处理对结肠癌HT-29细胞体内外增殖与侵袭能力的影响。方法以HT-29细胞暴露于5 mm Hg、10 mm Hg及15 mm Hg CO_2压力下1h建立体外模拟气腹模型为三个实验组,另以常规培养HT-29细胞为对照组。处理1 h后,立即取各组细胞培养液检测pH值。常规培养24 h后将各组细胞接种裸鼠腹腔建立体内模型(每组对应6只裸鼠),同时体外以四唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolim,MTT)检测各组细胞粘附率,免疫细胞化学法检测E-钙粘蛋白的表达。继续常规培养5 d,绘制细胞生长曲线。3 w后开腹检查裸鼠腹腔肿瘤种植转移情况并测量肿瘤平均质量,以免疫组化法检测肿瘤组织中E-钙粘蛋白的表达。结果气腹处理1 h后,实验组细胞培养液即时p H值显著低于对照组(均P<0.05)。10 mm Hg组和15mm Hg组与对照组相比,细胞粘附率下降、裸鼠腹腔内肿瘤平均质量减小、E-钙粘蛋白表达水平降低(均P<0.05),5 mm Hg组上述指标与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。各实验组细胞增殖速度随气腹处理压力的升高呈下降趋势。结论模拟10 mm Hg及15 mm Hg CO_2气腹处理,可降低结肠癌HT-29细胞的体内外的增殖能力,不增加在腹腔的侵袭能力。5 mm Hg CO_2气腹处理对HT-29细胞没有显著影响。展开更多
文摘目的运用网络药理学和分子对接方法探讨六味地黄丸治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制。方法通过检索多个数据库及查阅文献筛选出六味地黄丸活性成分和对应靶点,借助Genecard、OMIM和Drugbank数据库收集DN作用靶点并通过Venny 2.1软件筛选出药物-疾病共同作用靶点。随后,利用STRING和Cytoscape软件分析和构建蛋白质-蛋白质相互作用网络并使用CytoNCA插件进行拓扑分析刷选出核心靶点。然后,利用ClueGO插件进行GO(GO Ontology)功能富集分析和KEGG-(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析。最后,使用AutoDock软件通过分子对接验证活性化合物与核心靶点的结合能力。结果六味地黄丸40个活性成分通过调控128个DN相关靶点,尤其是通过调控28个核心靶点,参与调控体内基因转录、细胞凋亡和增殖、信号转导、炎症反应及蛋白质磷酸化等生物学过程,干预肿瘤、AGE-RAGE、IL-17、MAPK、HIF-1、Toll样受体等信号通路发挥治疗DN的作用。分子对接验证了5种活性化合物与其作用的关键靶点具有可靠的亲和力。结论推测六味地黄丸治疗DN具有多成分-多靶点-多途径的特点,为进一步研究六味地黄丸治疗DN的分子机制提供了新思路和新方向。
文摘目的探讨积雪草酸(asiatic acid,AA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和自噬的影响。方法不同浓度AA作用于人肝癌SMMC-7721细胞24 h后,MTT法检测细胞活性并观察自噬抑制剂3-MA对40 μmol/L AA的干预作用;MDC染色检测自噬泡的形成,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、mTOR、p-mTOR及p53的表达。结果 MTT检测结果显示,不同AA浓度均可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并呈浓度依赖性(F=46.790,P=0.006),IC50 =37.313 μmol/L。与单独使用40 μmol/L AA相比,自噬抑制剂3-MA可部分逆转40 μmol/L AA对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用[(46.400±9.099)% vs (22.000±3.391)%,P<0.001]。MDC染色实验表明40 μmol/L AA干预可增加自噬泡形成。Western blot检测发现,与对照组比较,40 μmol/L AA可明显降低LC3-Ⅰ的蛋白表达,而提高LC3-Ⅱ表达(1.744±0.108 vs 1.529±0.065,t=2.928,P=0.043;0.113±0.031 vs 0.380±0.036,t=-9.754,P<0.001),降低p62蛋白表达(0.522±0.024 vs 0.123±0.019,t=22.565,P<0.001)和p-mTOR蛋白表达(1.252±0.039 vs 0.353±0.028,t=30.775,P<0.001),但对mTOR和p53的蛋白表达无影响(1.713±0.111 vs 1.556±0.076,t=1.555,P=0.190;0.671±0.040 vs 0.726±0.055,t=-1.555,P=0.210)。结论 AA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,可能与其通过非p53依赖方式负调控mTOR通路诱发自噬有关。
文摘目的观察不同压力CO_2气腹处理对结肠癌HT-29细胞体内外增殖与侵袭能力的影响。方法以HT-29细胞暴露于5 mm Hg、10 mm Hg及15 mm Hg CO_2压力下1h建立体外模拟气腹模型为三个实验组,另以常规培养HT-29细胞为对照组。处理1 h后,立即取各组细胞培养液检测pH值。常规培养24 h后将各组细胞接种裸鼠腹腔建立体内模型(每组对应6只裸鼠),同时体外以四唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolim,MTT)检测各组细胞粘附率,免疫细胞化学法检测E-钙粘蛋白的表达。继续常规培养5 d,绘制细胞生长曲线。3 w后开腹检查裸鼠腹腔肿瘤种植转移情况并测量肿瘤平均质量,以免疫组化法检测肿瘤组织中E-钙粘蛋白的表达。结果气腹处理1 h后,实验组细胞培养液即时p H值显著低于对照组(均P<0.05)。10 mm Hg组和15mm Hg组与对照组相比,细胞粘附率下降、裸鼠腹腔内肿瘤平均质量减小、E-钙粘蛋白表达水平降低(均P<0.05),5 mm Hg组上述指标与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。各实验组细胞增殖速度随气腹处理压力的升高呈下降趋势。结论模拟10 mm Hg及15 mm Hg CO_2气腹处理,可降低结肠癌HT-29细胞的体内外的增殖能力,不增加在腹腔的侵袭能力。5 mm Hg CO_2气腹处理对HT-29细胞没有显著影响。
