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RNAi干扰Shp2基因对K562细胞增殖的抑制效应 被引量：3
1
作者 王灿蔚 陶崑 +1 位作者 齐杰玉 邓一平 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期75-80,共6页
通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建重组质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化... 通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建重组质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化及细胞凋亡率,探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制作用。结果表明,该实验成功构建出能明显下调Shp2基因及其蛋白表达的重组质粒,转染K562细胞后,其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明显降低、K562细胞增殖活力被抑制(P<0.05)、细胞凋亡水平上升(P<0.05)。与对照组相比,其差异具有统计学意义。提示,重组质粒可显著降低bcr/abl基因及蛋白的表达,抑制K562细胞的生物学效应,表明在细胞水平沉默Shp2有可能成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病(CML) BCR ABL Shp2 K562细胞
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PCT、CRP、IL-6联合检测对提高早期胎膜早破绒毛膜羊膜炎诊断价值的影响 被引量：4
2
作者 林佩飞 张芳义 +4 位作者 林雪峰 钱林利 王灿蔚 马威锋 李双 《中国性科学》 2020年第5期35-39,共5页
目的研究血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白介素(IL-6)联合检测对提高早期胎膜早破(PROM)绒毛膜羊膜炎(CAM)诊断价值的影响。方法选取2016年1月至2017年6月浙江省乐清市人民医院妇产科住院分娩的100例胎膜早破孕妇作为研究对象。... 目的研究血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白介素(IL-6)联合检测对提高早期胎膜早破(PROM)绒毛膜羊膜炎(CAM)诊断价值的影响。方法选取2016年1月至2017年6月浙江省乐清市人民医院妇产科住院分娩的100例胎膜早破孕妇作为研究对象。将这100例孕妇设为观察组,随机选择同期住院分娩的100例正常孕妇作为对照组。分娩前,分别测定两组产妇的各项血清学指标水平,并对检测结果进行比较,于观察组孕妇成功分娩后,将胎盘送至病理检查,根据病理报告将其分为绒毛膜羊膜炎组(n=68)和非绒毛膜羊膜炎组(n=32),比较两组患者上述血清学指标水平,同时计算上述单项指标及联合指标对应的特异性、灵敏性,在此基础上,计算各项检测相应的阳性检测值及阴性检测值。结果观察组孕妇血清中PCT、CRP、IL-6的水平均高于对照组孕妇,差异具有统计学意义(P<0.05);绒毛膜羊膜炎组孕妇的PCT、CRP、IL-6的水平均高于非绒毛膜羊膜炎组孕妇,差异具有统计学意义(P<0.05);三组孕妇联合检测的特异性、灵敏性、阳性预测值及阴性预测值均高于单项检查,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在诊断早期胎膜早破绒毛膜羊膜炎中,PCT、CRP、IL-6等单项指标均表现出了一定价值,但单项检测均存在着不同程度的缺陷,而PCT、CRP、IL-6联合检测可显著提升早期胎膜早破绒毛膜羊膜炎的诊断价值,对改善母婴的分娩结局及预后情况也有着积极意义。 展开更多
关键词 降钙素 C反应蛋白 白细胞介素-6 胎膜早破 绒毛膜羊膜炎 诊断价值
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MicroRNA-193b对K562细胞bcr/abl表达的影响 被引量：1
3
作者 舒燕 齐杰玉 +2 位作者 王灿蔚 于淑静 陶崑 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第19期1955-1959,共5页
目的用Ad-pre-miRNA-193b重组腺病毒感染K562细胞,探讨miR-193b在细胞中过表达对bcr/abl表达的影响。方法将前期构建的Ad-pre-miRNA-193b重组腺病毒感染K562细胞后,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-193b的表达;qRT-PCR检测bcr/abl融合... 目的用Ad-pre-miRNA-193b重组腺病毒感染K562细胞,探讨miR-193b在细胞中过表达对bcr/abl表达的影响。方法将前期构建的Ad-pre-miRNA-193b重组腺病毒感染K562细胞后,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-193b的表达;qRT-PCR检测bcr/abl融合基因的表达;Western blot检测BCR/ABL融合蛋白的表达;CCK-8检测K562细胞的增殖情况,流式细胞术(FCM)检测K562细胞凋亡率。结果与对照比较,K562细胞感染Ad-pre-miRNA-193b重组腺病毒后,miR-193b表达明显升高;bcr/abl融合基因及BCR/ABL融合蛋白表达明显下调;K562细胞增殖能力明显降低(P<0.05),凋亡水平明显升高(P<0.05)。结论 miR-193b可下调bcr/abl表达,抑制K562细胞的生物学效应,过表达miR-193b能作为治疗CML的有效手段。 展开更多
关键词 miR-193b K562细胞 BCR/ABL
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含miR-193b前体基因的重组腺病毒感染K562细胞可抑制其增殖
4
作者 舒燕 齐杰玉 +2 位作者 王灿蔚 于淑静 陶崑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期452-455,共4页
目的构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。方法化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1... 目的构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。方法化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经PacI线性化后转入HEK293细胞包装、扩增。倍比稀释法测定病毒滴度。实时荧光定量PCR检测K562细胞中miR-193b表达水平,MTT法检测K562细胞增殖能力。结果pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经限制性内切酶鉴定和测序分析显示构建成功,并能够高效转染K562细胞;与对照组相比,荧光定量PCR检测显示重组腺病毒载体感染K562细胞后,miR-193b基因表达明显增加;同时高表达miR-193b基因的K562细胞增殖水平低于对照组。结论K562细胞高效表达的miR-193b可抑制K562细胞的增殖。 展开更多
关键词 腺病毒 微小RNA193前体 K562细胞
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Pre-miR-10a重组腺病毒载体对K562细胞增殖的抑制作用
5
作者 齐杰玉 陶崑 +2 位作者 王灿蔚 李秋红 邓一平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1033-1036,共4页
目的:观察在K562细胞高表达miR-10a对细胞增殖及凋亡的影响。方法:用pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体感染K562细胞,采用RT-PCR检测感染后K562细胞中miR-10a和bcr/abl融合基因的表达水平,Western blot法检测BCR/ABL融合蛋白表达水平,MTT... 目的:观察在K562细胞高表达miR-10a对细胞增殖及凋亡的影响。方法:用pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体感染K562细胞,采用RT-PCR检测感染后K562细胞中miR-10a和bcr/abl融合基因的表达水平,Western blot法检测BCR/ABL融合蛋白表达水平,MTT、流式细胞术(FCM)分别检测感染后K562细胞的增殖及凋亡。结果:与对照组相比,K562细胞在转染pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体后,其miR-10a表达水平明显升高、bcr/abl融合基因水平显著降低;BCR/ABL融合蛋白表达明显下调、K562细胞增殖活力被抑制、细胞凋亡增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体能明显抑制K562细胞的增殖、促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病(CML) BCR/ABL miR-10a K562细胞
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Pre-miR-10a重组腺病毒质粒的构建及其在K562细胞中的表达
6
作者 齐杰玉 陶崑 +2 位作者 王灿蔚 李秋红 邓一平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期657-660,共4页
目的构建pre-miR-10a(miR-10a前体)重组腺病毒表达质粒,感染K562细胞,并检测其基因表达水平。方法化学合成pre-miR-10a基因序列,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,将构建正确的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV pre-miR-10a与腺病毒骨... 目的构建pre-miR-10a(miR-10a前体)重组腺病毒表达质粒,感染K562细胞,并检测其基因表达水平。方法化学合成pre-miR-10a基因序列,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,将构建正确的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV pre-miR-10a与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183感受态细胞,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,经4轮扩增后检测病毒滴度。收集病毒后,以100 MOI感染K562细胞,RT-PCR法检测miR-10a基因的转录水平。结果重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a经PacⅠ酶切,证明带有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中,4轮扩增后腺病毒滴度为1.5×1011pfu/ml,可高效感染K562细胞,感染效率达90%以上;重组腺病毒Ad-pre-miR-10a感染的K562细胞中miR-10a基因转录水平明显升高,过表达率为150.82%。结论已成功构建重组腺病毒表达质粒pAd-pre-miR-10a,并可在K562细胞中高效表达,为进一步从体内和体外水平研究其抗白血病效应奠定了基础。 展开更多
关键词 pre-miR-10a 腺病毒科 K562细胞 基因表达
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21例CNM脑脊液新生隐球菌的实验检测分析 被引量：2
7
作者 葛国兴 冯一 王灿蔚 《医学研究杂志》 2012年第11期181-183,共3页
目的检测新生隐球菌性脑膜炎(CNM)患者脑脊液(CSF)中的新生隐球菌,探讨几个方法的形态特征。方法对21例CNM患者CSF应用细胞计数器直接观察、瑞氏染色、印度墨汁涂片、革兰染色及培养后等实验室方法检测,并比较其阳性率和形态特征。结果... 目的检测新生隐球菌性脑膜炎(CNM)患者脑脊液(CSF)中的新生隐球菌,探讨几个方法的形态特征。方法对21例CNM患者CSF应用细胞计数器直接观察、瑞氏染色、印度墨汁涂片、革兰染色及培养后等实验室方法检测,并比较其阳性率和形态特征。结果隐球菌检测阳性率分别为真菌培养90.5%,印度墨汁染色81.0%,瑞氏染色和细胞学计数各为61.9%,革兰染色42.9%;墨汁涂片检测可显示荚膜和出芽;瑞氏染色可发现其周围毛刺;革兰染色仅现菌体深染。结论在基层医院细胞镜检计数、瑞氏染色、革兰染色及墨汁涂片法与真菌培养的正确、灵活结合可提高CSF中隐球菌的阳性检出率。 展开更多
关键词 隐球菌性脑膜炎 隐球菌 墨汁染色 瑞氏染色 真菌培养
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