鸡毒支原体热休克蛋白GrpE粘附特性的鉴定 被引量：5

1

作者 周长平 陈莹 +5 位作者 李媛 高利萍 王显兵 王莉莉 于艳超 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期28-33,共6页

鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株gr... 鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株grp E基因,并利用表达纯化的重组蛋白GrpE(rGrpE)免疫BALB/c小鼠。制备抗GrpE的单克隆抗体(MAb)。通过亚细胞定位,结果显示GrpE定位于细胞表面。通过激光共聚焦显微镜观察到rGrpE对DF-1细胞具有明显的粘附作用,而且利用抗GrpE的MAb能够特异抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附。此外,夹心ELISA和流式细胞术试验结果也表明制备的MAb能够显著抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附,并呈剂量依赖关系。上述结果表明热休克蛋白GrpE是MG的一种新的具有粘附特性的蛋白。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 热休克蛋白Grp E 粘附 鉴定

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牛支原体脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞差异表达的转录组学研究 被引量：3

2

作者 王显兵 汪洋 +8 位作者 李媛 邵家日 王琪 陈莹 周长平 于艳超 王莉莉 辛九庆 马红霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期267-271,共5页

为阐明牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞的免疫应答机制,本研究采用转录组测序(RNA-seq)技术结合生物信息学方法分析M.bovis LAMPs诱导EBL细胞产生的差异表达基因。本实验首先分别构建LAMP... 为阐明牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞的免疫应答机制,本研究采用转录组测序(RNA-seq)技术结合生物信息学方法分析M.bovis LAMPs诱导EBL细胞产生的差异表达基因。本实验首先分别构建LAMPs诱导组与对照组EBL细胞的c DNA文库并对其进行高通量测序,利用MAS3.0软件对差异表达基因进行筛选,结果显示共筛选得到706个差异表达基因,其中上调和下调差异基因分别为364个和342个;GO注释显示,差异表达基因编码蛋白主要与细胞黏附、免疫应答以及细胞增殖等相关;利用荧光定量PCR对部分差异表达基因(PIM2、F2RL1以及PTPN2)的表达情况进行验证,结果与RNA-seq测序结果相符。本研究为进一步阐述M.bovis的致病机制及宿主的免疫应答机制提供依据。 展开更多

关键词 牛支原体脂质相关膜蛋白 胎牛肺细胞细胞 转录组测序

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一株血清5型副猪嗜血杆菌的分离鉴定及致病性分析 被引量：4

3

作者 吕茂杰 王显兵 +4 位作者 孙晨 张英 车艳杰 丁壮 鲍恩东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期65-71,76,154,共9页

为了对一例疑似副猪嗜血杆菌感染发病猪进行确诊,试验对采集的病料组织进行细菌分离,对分离菌株采用形态学观察、培养特性、生化特性、PCR方法进行鉴定,同时对分离菌株进行琼脂扩散试验、基因分子分型鉴定、测序分析,以及仔猪致病力试... 为了对一例疑似副猪嗜血杆菌感染发病猪进行确诊,试验对采集的病料组织进行细菌分离,对分离菌株采用形态学观察、培养特性、生化特性、PCR方法进行鉴定,同时对分离菌株进行琼脂扩散试验、基因分子分型鉴定、测序分析,以及仔猪致病力试验。结果表明:所分离菌株为革兰氏阴性菌,呈多形性,菌落形态为圆形、光滑、灰白色、半透明、边缘整齐;具有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依懒性;呈现典型"卫星生长"现象,不产生溶血现象;生化试验结果符合副猪嗜血杆菌相关生化特性;PCR鉴定扩增出1090 bp大小的条带,经琼脂凝胶扩散试验确定其为血清5型。分子分型鉴定分离株仅扩增出468 bp大小片段,经测序比对再次证实其为血清5型。在仔猪致病力试验中,空白对照猪未出现异常,攻毒猪表现出由副猪嗜血杆菌感染引起的发热、关节炎、胸腹腔多脏器表面纤维素性渗出为主的典型症状。说明发病猪感染了副猪嗜血杆菌,且分离得到血清5型副猪嗜血杆菌。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 血清分型 分子分型 致病性

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牛支原体脂质相关膜蛋白激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的研究 被引量：2

4

作者 邵家日 王显兵 +7 位作者 汪洋 李媛 刘素丽 王琪 陈莹 高丽萍 周长平 辛九庆 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期258-263,共6页

为研究牛支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的分子机制,用牛支原体脂质相关膜蛋白刺激EBL细胞,发现牛支原体LAMPs能够诱导IL-1β的表达。进一步研究表明,p38 MAPK,ERK MAPK和JNK MAPK信号通路在牛支原... 为研究牛支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的分子机制,用牛支原体脂质相关膜蛋白刺激EBL细胞,发现牛支原体LAMPs能够诱导IL-1β的表达。进一步研究表明,p38 MAPK,ERK MAPK和JNK MAPK信号通路在牛支原体LAMPs刺激EBL细胞诱导IL-1β表达中起重要作用。过表达TLR1、TLR2,LAMPs刺激EBL细胞,IL-1β的表达量增加。进一步研究表明,TLR接合体髓样化初级反应因子88(My D88)和IRAK4在LAMPs刺激IL-1β诱导中起重要作用。结果表明,牛支原体LAMPs刺激EBL由TLR2、TLR1、MyD88和IRAK4 MAPK信号通路细胞诱导IL-1β的表达。 展开更多

关键词 牛支原体 脂质相关膜蛋白 MAPK信号通路

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鸡毒支原体S6株P25蛋白粘附特性的研究 被引量：1

5

作者 高利萍 李媛 +6 位作者 周长平 刘素丽 邵家日 王琪 陈莹 王显兵 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期105-110,共6页

鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用。为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进行分析,选取了MG的一个假定膜蛋白基因,其大小为675 bp(编码... 鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用。为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进行分析,选取了MG的一个假定膜蛋白基因,其大小为675 bp(编码225个氨基酸,分子量约25 ku,将其命名为P25)。通过MG膜蛋白组分的提取及western blot鉴定,结果显示P25分布在MG膜的表面。利用PCR扩增MG p25基因并通过定点突变将其序列中TGA终止密码子突变为TGG(编码色氨酸),通过原核表达其编码的重组P25蛋白(r P25),并以r P25作为免疫原免疫兔子制备高免血清。激光共聚焦显微镜观察显示r P25和MG均对鸡胚成纤维细胞系(DF-1)具有明显的粘附作用,而ELISA和流式细胞仪检测结果则表明r P25和MG对DF-1细胞的粘附为特异性粘附,其中r P25抗血清可以明显抑制r P25和MG对DF-1细胞的粘附作用,从而证明P25为MG的一个粘附相关蛋白。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 DF-1细胞 激光共聚焦 ELISA 流式细胞仪

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TLR2介导鸡毒支原体脂质相关膜蛋白诱导DF-1细胞表达IL-1β的研究 被引量：1

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作者 陈莹 汪洋 +7 位作者 于颖 李媛 王琪 邵家日 王显兵 周长平 李继昌 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期111-114,共4页

Toll样受体2(TLR2)在鸡毒支原体(MG)诱导天然免疫反应机制中的作用尚未明确。为鉴定TLR2在MG脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导细胞表达IL-1β中的作用,本研究通过RT-PCR和ELISA方法检测LAMPs刺激后DF-1细胞中IL-1β的m RNA和蛋白水平,结果显示... Toll样受体2(TLR2)在鸡毒支原体(MG)诱导天然免疫反应机制中的作用尚未明确。为鉴定TLR2在MG脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导细胞表达IL-1β中的作用,本研究通过RT-PCR和ELISA方法检测LAMPs刺激后DF-1细胞中IL-1β的m RNA和蛋白水平,结果显示LAMPs可以诱导DF-1细胞分泌IL-1β,并确定最佳刺激时间为6 h,最佳刺激剂量为1μg/m L。此外,通过构建TLR2重组表达质粒p CMV-HA-TLR2,并将该质粒转染DF-1细胞进行过表达及通过抗体封闭TLR2的两种处理方式,处理后采用LAMPs刺激细胞。经检测显示:TLR2过表达处理组的IL-1βm RNA和蛋白水平显著升高,而抗体处理组的IL-1βm RNA和蛋白水平下调。结果表明,LAMPs能够与DF-1细胞膜上的TLR2受体结合,有效的诱导DF-1细胞表达并分泌IL-1β,而且IL-1β的释放可能与天然免疫系统的经典通路即NF-κB信号通路调控有关。本研究为阐述MG的致病机制提供相关实验依据。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 脂质相关膜蛋白（LAMPs） TLR2

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企业内部控制制度研究 被引量：1

7

作者 王显兵 袁鹏 刘建美 《农场经济管理》 北大核心 2003年第4期35-36,共2页

内部控制制度(以下简称内控制度)是现代企业管理的一个重要组成部分,是企业内部各种管理控制的总称.内控制度产生的基础是管理生产和经营的需要.

关键词 内部控制制度 现代企业管理 授权 控制环境 财务会计

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加强企业财务管理的几项重点工作 被引量：1

8

作者 曹敏 肖秀丽 王显兵 《中国农业会计》 北大核心 2004年第5期47-48,共2页

关键词 企业 财务管理 资金管理 经济效益 财会人员 资金使用效益

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TRIM9基因调控牛支原体脂质相关膜蛋白诱导EBL细胞IL-1β表达的研究

9

作者 赵雅芝 潘巧 +4 位作者 王显兵 郝文君 刘桐 王秀梅 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期500-505,共6页

为探究宿主TRIM9基因通过调控牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β的相关机制,本研究通过M.bovis LAMPs刺激EBL细胞后,利用荧光定量PCR(qPCR)方法检测细胞中TRIM9和IL-... 为探究宿主TRIM9基因通过调控牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β的相关机制,本研究通过M.bovis LAMPs刺激EBL细胞后,利用荧光定量PCR(qPCR)方法检测细胞中TRIM9和IL-1β基因的转录水平,结果显示TRIM9基因转录水平上调2.9倍,IL-1β基因转录水平上调2.5倍。构建pEGFP-C1-TRIM9荧光报告质粒并转染EBL细胞,利用共聚焦显微镜观察TRIM9在EBL细胞中的定位,结果显示TRIM9蛋白能够瞬时表达于EBL细胞浆。通过将构建的pCMV-C-HA-TRIM9重组质粒和si-TRIM9干扰质粒共转染EBL细胞,经2μg/mL M.bovis LAMPs刺激12 h后,采用qPCR和ELISA检测IL-1β的转录水平和表达情况,结果显示,与M.bovis LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,过表达TRIM9组中IL-1β在转录水平和蛋白表达水平均无明显变化,而敲低TRIM9组中IL-1β转录水平和蛋白表达水平均显著上调(分别上调33倍和30倍)。同时利用western blot检测p65蛋白磷酸化水平,分析NF-κB信号通路激活情况,结果显示,与M.bovis LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,TRIM9蛋白过表达组NF-κB信号通路激活水平无明显变化,而敲低TRIM9组p65磷酸化水平提高,促进NF-κB信号通路激活。综上结果表明敲低TRIM9基因能够促进M.bovis LAMPs通过NF-κB信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β。本研究为进一步明确宿主蛋白参与抗牛支原体天然免疫应答的机制奠定基础。 展开更多

关键词 牛支原体脂质相关膜蛋白 TRIM9 NF-ΚB信号通路 IL-1Β

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某超期服役深大基坑加固工程设计与施工实例 被引量：1

10

作者 王显兵 《四川建材》 2021年第8期64-65,共2页

成都某深大基坑开挖后经历长时间的停工,支护结构变形逐渐增大,周边道路地表开裂,结合基坑现有状况,在原有支护结构的基础上采取了加固措施。通过增加预应力锚索的方式加固后,基坑变形得到有效控制,说明基坑支护结构加固补强方案是可行... 成都某深大基坑开挖后经历长时间的停工,支护结构变形逐渐增大,周边道路地表开裂,结合基坑现有状况,在原有支护结构的基础上采取了加固措施。通过增加预应力锚索的方式加固后,基坑变形得到有效控制,说明基坑支护结构加固补强方案是可行的,为后续类似工程提供一定的借鉴。 展开更多

关键词 深大基坑 超期服役 加固设计 加固施工

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猪圆环病毒2型Cap蛋白、猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗的制备及安全性和有效性评价

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作者 吕茂杰 王显兵 +4 位作者 孙晨 张英 车艳杰 丁壮 鲍恩东 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1673-1681,共9页

猪圆环病毒2型(PCV2)病毒病、猪支原体肺炎以及猪格拉瑟氏病在我国猪群中广泛存在,常见三者的混合感染,给养猪业造成了重大经济损失。目前尚无用于3种疫病防控的联合疫苗,本研究以杆状病毒表达的PCV2 Cap蛋白、猪肺炎支原体(Mhp)抗原、... 猪圆环病毒2型(PCV2)病毒病、猪支原体肺炎以及猪格拉瑟氏病在我国猪群中广泛存在,常见三者的混合感染,给养猪业造成了重大经济损失。目前尚无用于3种疫病防控的联合疫苗,本研究以杆状病毒表达的PCV2 Cap蛋白、猪肺炎支原体(Mhp)抗原、副猪嗜血杆菌(HPS)4型和5型抗原,配合水溶性佐剂制备三联灭活疫苗,并进行安全性和有效性评价。结果显示,在安全性检验中,免疫猪精神、采食、呼吸、粪便和行为均未见异常,与对照猪无显著性差异;接种疫苗后猪体温有一过性升高,24 h后恢复正常,未见局部和全身不良反应。在血清抗体监测中,二免后14 d,免疫组PCV2 Cap蛋白ELISA抗体全部转阳,S/P值为1.291±0.091,对照组抗体为阴性(S/P值<0.4);免疫组Mhp ELISA抗体全部转阳,S/P值为1.133±0.150,对照组抗体为阴性(S/P值<0.4);免疫组HPS 4型和5型血清微量平板凝集试验(MAT)抗体效价均达到1∶16以上,对照组抗体为阴性(MAT抗体效价<1∶4)。在攻毒保护试验中,疫苗对PCV2强毒的保护率为4/5(80%);Mhp强毒攻击后免疫猪肺炎病变平均减少率为61.35%(>60%);疫苗对HPS 4型强毒的保护率为5/5(100%),对HPS 5型强毒的保护率为4/5(80%)。本研究试制的PCV2 Cap蛋白、Mhp、HPS三联灭活疫苗免疫仔猪产生了针对3种病原的特异性抗体,可提供对3种病原强毒攻毒的保护。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 猪肺炎支原体 副猪嗜血杆菌 三联灭活疫苗

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粉状食品生产过程的外源性污染物识别及控制

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作者 薛梅 郭玉波 王显兵 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第10期3300-3304,共5页

粉状食品中的外源性污染物,是肉眼可见、非产品正常组分的物质,在物料接收检验中属外观检查项目。尤其是食品为白色时,更容易被使用者检测发现,且能引起抱怨与投诉。因此,如何控制生产过程中产品免受污染,是食品加工企业重点管理的环节... 粉状食品中的外源性污染物,是肉眼可见、非产品正常组分的物质,在物料接收检验中属外观检查项目。尤其是食品为白色时,更容易被使用者检测发现,且能引起抱怨与投诉。因此,如何控制生产过程中产品免受污染,是食品加工企业重点管理的环节之一。本文通过绘制异物识别判断树,并对识别的异物进行了分类,最终确定了外源性污染物的控制措施。 展开更多

关键词 粉状食品 外源性污染物 判断树 预防措施

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实行综合治理 根治会计假账

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作者 王桂梅 王显兵 袁鹏 《中国农垦经济》 北大核心 2003年第7期55-55,共1页

关键词 会计假账 会计监管 会计委派制度 监督体系 经营管理权 财务监督权

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