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人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建
1
作者 王春红 李哲 +2 位作者 王明菡 邓丽丽 王欢 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第40期6060-6066,共7页
背景:多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量,进而影响多巴胺能神经递质的作用,导致相关疾病的发生。目的:通过克隆人DRD1基因的启动子区,构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性,为研究DRD1基... 背景:多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量,进而影响多巴胺能神经递质的作用,导致相关疾病的发生。目的:通过克隆人DRD1基因的启动子区,构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性,为研究DRD1基因的转录调控提供基础工具。方法:以人静脉血基因组DNA为模板,通过PCR扩增DRD1基因启动子序列并克隆至pG M-T载体,测序验证无误后酶切连接至萤火虫荧光素酶报告基因质粒pG L3-Basic,构建含有DRD1基因启动子的荧光素酶报告基因载体,采用阳离子脂质体法与内对照质粒pG L3-TK共转染HEK293细胞同时以不含启动子的pG L3-Basic载体与内对照质粒pG L3-TK共转染作为阴性对照组,化学发光仪检测相对荧光强度。结果与结论:(1)通过酶切和测序验证重组荧光素酶报告基因载体的DRD1基因启动子区序列正确;(2)与阴性对照组相比,该重组载体转染HEK293细胞后具有转录活性;(3)成功构建了含有DRD1基因启动子区的荧光素酶报告基因载体,为研究该基因的转录调控提供了基础工具。 展开更多
关键词 实验动物 基因病毒载体相关因子模型 多巴胺受体D1基因 双荧光素酶报告基因 启动子 克隆
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孕哺期邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯与双酚A联合染毒对母鼠糖代谢影响机制
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作者 王明菡 于海洋 +4 位作者 段晓旭 裴秀丛 马明月 张玉敏 段志文 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2020年第4期390-395,共6页
目的探讨孕哺期邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)和双酚A联合染毒对母鼠肝脏糖代谢的影响与可能机制。方法将24只受孕的无特定病原体级SD大鼠随机分为DEHP组、双酚A组、联合染毒组和对照组,每组6只。自妊娠第5天至仔鼠出生后第21天,3... 目的探讨孕哺期邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)和双酚A联合染毒对母鼠肝脏糖代谢的影响与可能机制。方法将24只受孕的无特定病原体级SD大鼠随机分为DEHP组、双酚A组、联合染毒组和对照组,每组6只。自妊娠第5天至仔鼠出生后第21天,3个染毒组母鼠分别予600 mg/kg体质量DEHP、80 mg/kg体质量双酚A、600 mg/kg体质量DEHP与80 mg/kg体质量双酚A混合液,对照组母鼠予等体积玉米油,灌胃染毒,每天1次。染毒结束后立即处死母鼠,检测其肝组织和血清中糖代谢相关指标水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法和免疫印迹法检测其肝组织中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/游因子蛋白激酶B(AKT)信号通路相关因子mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,除双酚A组磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活力外,3个染毒组母鼠肝组织中肝糖原和血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均下降(P<0.05),血清PEPCK活力和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均升高(P<0.05);联合染毒组母鼠肝组织中肝糖原和血清HDL-C水平均低于双酚A组(P<0.05),血清LDL-C水平分别低于DEHP组和双酚A组(P<0.05)。4组大鼠血清糖化血清蛋白、总胆固醇和甘油三酯水平分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,除DEHP组PI3K蛋白外,3个染毒组母鼠肝组织中PI3K、AKT、葡萄糖转运蛋白4的mRNA和蛋白的相对表达水平均下降(P<0.05);与对照组比较,3个染毒组母鼠肝组织中叉头框蛋白O1(Foxo1)mRNA相对表达水平下降(P<0.05),但FOXO1蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。结论孕哺期DEHP和双酚A染毒均可导致母鼠肝脏糖代谢紊乱,两者联合染毒具有一定的协同作用;该过程可能通过PI3K/AKT信号通路实现。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯 双酚A 孕哺期 糖代谢 联合作用 协同作用 大鼠
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