目的探究微小RNA-124(miR-124)通过特异性β1糖蛋白(Sp1)控制人血管平滑肌细胞(HVSMC)表型转换影响颅内动脉瘤(IA)发展的机制。方法HVSMC进行原代培养,HVSMC在5%胎牛血清的生长培养基SmGM-2(Lonza)中于37℃在加湿的5%CO_(2)培养箱中培...目的探究微小RNA-124(miR-124)通过特异性β1糖蛋白(Sp1)控制人血管平滑肌细胞(HVSMC)表型转换影响颅内动脉瘤(IA)发展的机制。方法HVSMC进行原代培养,HVSMC在5%胎牛血清的生长培养基SmGM-2(Lonza)中于37℃在加湿的5%CO_(2)培养箱中培养。根据研究方案将HVSMC细胞分为对照组、miR-124模拟转染组和miR-124-pCMV-Sp1Mut共转染组。通过定量RT-PCR分析HVSMC在血小板源生长因子(PDGF-BB)刺激后miR-124表达。通过BrdU检测和刮擦试验检测HVSMC的增殖迁移。通过荧光素酶报告基因测定检测miR-124与Sp1的靶向关系。通过蛋白印迹分析HVSMC标记基因和Sp1的蛋白表达。结果与0 h相比,PDGF-BB(20 ng/mL)诱导后第6、12、24 h HVSMC中miR-124表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-124模拟转染组细胞增殖和细胞迁移能力较对照组增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-124模拟转染组与Sp1-WT3'-UTR融合的荧光素酶活性较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),而miR-124模拟转染组与Sp1-MUT的3'-UTR融合的荧光素酶活性与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-124模拟转染组α-SMA、SM22a、calponin和MYH11蛋白表达较对照组升高,miR-124-pCMV-Sp1Mut共转染组α-SMA、SM22a、calponin和MYH11蛋白表达较miR-124模拟转染组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-124模拟转染组Sp1蛋白表达较对照组降低,miR-124-pCMV-Sp1Mut共转染组Sp1蛋白表达较miR-124模拟转染组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-124通过Sp1调节HVSMC的表型并显著抑制IA发展,miR-124对Sp1表达的调节可能为miR-124的功能脑血管疾病的分子机制提供新的见解。展开更多
文摘目的探究微小RNA-124(miR-124)通过特异性β1糖蛋白(Sp1)控制人血管平滑肌细胞(HVSMC)表型转换影响颅内动脉瘤(IA)发展的机制。方法HVSMC进行原代培养,HVSMC在5%胎牛血清的生长培养基SmGM-2(Lonza)中于37℃在加湿的5%CO_(2)培养箱中培养。根据研究方案将HVSMC细胞分为对照组、miR-124模拟转染组和miR-124-pCMV-Sp1Mut共转染组。通过定量RT-PCR分析HVSMC在血小板源生长因子(PDGF-BB)刺激后miR-124表达。通过BrdU检测和刮擦试验检测HVSMC的增殖迁移。通过荧光素酶报告基因测定检测miR-124与Sp1的靶向关系。通过蛋白印迹分析HVSMC标记基因和Sp1的蛋白表达。结果与0 h相比,PDGF-BB(20 ng/mL)诱导后第6、12、24 h HVSMC中miR-124表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-124模拟转染组细胞增殖和细胞迁移能力较对照组增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-124模拟转染组与Sp1-WT3'-UTR融合的荧光素酶活性较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),而miR-124模拟转染组与Sp1-MUT的3'-UTR融合的荧光素酶活性与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-124模拟转染组α-SMA、SM22a、calponin和MYH11蛋白表达较对照组升高,miR-124-pCMV-Sp1Mut共转染组α-SMA、SM22a、calponin和MYH11蛋白表达较miR-124模拟转染组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-124模拟转染组Sp1蛋白表达较对照组降低,miR-124-pCMV-Sp1Mut共转染组Sp1蛋白表达较miR-124模拟转染组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-124通过Sp1调节HVSMC的表型并显著抑制IA发展,miR-124对Sp1表达的调节可能为miR-124的功能脑血管疾病的分子机制提供新的见解。
文摘目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的干预作用。方法健康Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组和CD147组,每组20只。所有大鼠10%水合氯醛(0.3 g/kg)腹腔注射麻醉,模型组和CD147组大鼠于双侧海马CA1区注入10μg的Aβ1~40,假手术组大鼠于同一部位注射等量的生理盐水。术后48 h,CD147组大鼠于双侧脑室注射CD147 c DNA,模型组和假手术组大鼠于同一部位注射等量生理盐水。采用Morris水迷宫实验对各组大鼠的学习记忆能力进行测试。采用蛋白印迹法检测β-淀粉样蛋白(Aβ)和γ-分泌酶表达。结果从第3天开始,模型组大鼠逃避潜伏期时间较假手术组延长,而CD147组较模型组减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠经过平台次数和经平台停留时间较假手术组减少,而CD147组较模型组均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠脑组织Aβ和γ-分泌酶表达较假手术组增加,而CD147组较模型组大鼠减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性CD147能够显著改善AD模型大鼠学习记忆能力,其具体机制可能与调节γ-分泌酶活性和下调Aβ的表达有关。
