前期研究结果表明,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)具有促进细胞增殖的作用.为了进一步阐明其分子机制,观察了HBXIP对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响.实验中通过基因共转染将NF-κB报告基...前期研究结果表明,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)具有促进细胞增殖的作用.为了进一步阐明其分子机制,观察了HBXIP对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响.实验中通过基因共转染将NF-κB报告基因质粒pNF-κB-Luc和HBXIP真核表达载体pcDNA3-hbxip导入人肝癌H7402细胞系中,进行荧光素酶活性分析.结果显示:H7402细胞过表达HBXIP后NF-κB的转录活性明显增强;此外,基因转染后经免疫印迹检测显示,与NF-κB二聚体结合的抑制亚基IκBα的磷酸化水平明显增加;同时,提取H7402细胞的核蛋白,然后应用免疫印迹检测细胞核中p65/NF-κB的水平.结果显示,H7402细胞中HBXIP过表达后细胞核中p65/NF-κB的水平明显增加.当应用RNA干扰技术抑制了细胞内源性的HBXIP基因表达后,则出现与上述结果相反的效果.上述结果提示,HBXIP可增加核内p65/NF-κB蛋白水平,进而发挥NF-κB促转录调控的作用.因此,HBXIP可通过调控NF-κB信号途径而促进细胞增殖.展开更多
目的:检测乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)对HepG2肝癌细胞迁移及β-catenin表达的影响,为深入研究HBXIP与肝细胞癌发生发展的相关性奠定基础。方法:以建立的稳定高表达HBXIP的HepG2细...目的:检测乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)对HepG2肝癌细胞迁移及β-catenin表达的影响,为深入研究HBXIP与肝细胞癌发生发展的相关性奠定基础。方法:以建立的稳定高表达HBXIP的HepG2细胞系为实验材料,Transwell实验观察HBXIP高表达对细胞迁移能力的影响;明胶酶谱分析法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性;免疫印迹实验检测MMP-9、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、β-catenin及p-β-catenin的表达。结果:Transwell实验结果表明,HBXIP能够促进HepG2细胞的迁移能力;高表达HBXIP的肝癌细胞中,MMP-9的活性及蛋白表达水平均升高;免疫印迹结果表明HBXIP促进了β-catenin的表达,并抑制β-catenin的磷酸化;同时促进GSK-3β(Ser9)的磷酸化。结论:HBXIP与肿瘤细胞的迁移密切相关,HBXIP高表达促进肝癌细胞的迁移可能是其调控GSK-3β/β-catenin表达的结果。展开更多
乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)可与乙肝病毒X蛋白(HBX)的C端结合,它具有抑制HBX活性的作用.为进一步阐明HBXIP对细胞增殖的作用及其分子机制,构建了HBXIP的真核表达载体,并将其稳定转染至...乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)可与乙肝病毒X蛋白(HBX)的C端结合,它具有抑制HBX活性的作用.为进一步阐明HBXIP对细胞增殖的作用及其分子机制,构建了HBXIP的真核表达载体,并将其稳定转染至正常人肝细胞系L-O2细胞中,建立了稳定表达HBXIP蛋白的肝细胞系,命名为L-O2-hbxip.然后,应用MTT、BrdU标记实验和流式细胞术等方法,发现HBXIP过表达后,L-O2细胞的生长速度明显加快,可促进细胞由G1期进入到S期,表明HBXIP具有促进L-O2-hbxip细胞增殖的作用.应用免疫印迹对有关细胞周期相关蛋白进行了检测.结果显示,HBXIP过表达时可上调细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E的表达,并下调p21和p27的表达,从而调节细胞周期,产生对细胞增殖的影响.展开更多
文摘前期研究结果表明,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)具有促进细胞增殖的作用.为了进一步阐明其分子机制,观察了HBXIP对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响.实验中通过基因共转染将NF-κB报告基因质粒pNF-κB-Luc和HBXIP真核表达载体pcDNA3-hbxip导入人肝癌H7402细胞系中,进行荧光素酶活性分析.结果显示:H7402细胞过表达HBXIP后NF-κB的转录活性明显增强;此外,基因转染后经免疫印迹检测显示,与NF-κB二聚体结合的抑制亚基IκBα的磷酸化水平明显增加;同时,提取H7402细胞的核蛋白,然后应用免疫印迹检测细胞核中p65/NF-κB的水平.结果显示,H7402细胞中HBXIP过表达后细胞核中p65/NF-κB的水平明显增加.当应用RNA干扰技术抑制了细胞内源性的HBXIP基因表达后,则出现与上述结果相反的效果.上述结果提示,HBXIP可增加核内p65/NF-κB蛋白水平,进而发挥NF-κB促转录调控的作用.因此,HBXIP可通过调控NF-κB信号途径而促进细胞增殖.
文摘目的:检测乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)对HepG2肝癌细胞迁移及β-catenin表达的影响,为深入研究HBXIP与肝细胞癌发生发展的相关性奠定基础。方法:以建立的稳定高表达HBXIP的HepG2细胞系为实验材料,Transwell实验观察HBXIP高表达对细胞迁移能力的影响;明胶酶谱分析法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性;免疫印迹实验检测MMP-9、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、β-catenin及p-β-catenin的表达。结果:Transwell实验结果表明,HBXIP能够促进HepG2细胞的迁移能力;高表达HBXIP的肝癌细胞中,MMP-9的活性及蛋白表达水平均升高;免疫印迹结果表明HBXIP促进了β-catenin的表达,并抑制β-catenin的磷酸化;同时促进GSK-3β(Ser9)的磷酸化。结论:HBXIP与肿瘤细胞的迁移密切相关,HBXIP高表达促进肝癌细胞的迁移可能是其调控GSK-3β/β-catenin表达的结果。
文摘乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)可与乙肝病毒X蛋白(HBX)的C端结合,它具有抑制HBX活性的作用.为进一步阐明HBXIP对细胞增殖的作用及其分子机制,构建了HBXIP的真核表达载体,并将其稳定转染至正常人肝细胞系L-O2细胞中,建立了稳定表达HBXIP蛋白的肝细胞系,命名为L-O2-hbxip.然后,应用MTT、BrdU标记实验和流式细胞术等方法,发现HBXIP过表达后,L-O2细胞的生长速度明显加快,可促进细胞由G1期进入到S期,表明HBXIP具有促进L-O2-hbxip细胞增殖的作用.应用免疫印迹对有关细胞周期相关蛋白进行了检测.结果显示,HBXIP过表达时可上调细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E的表达,并下调p21和p27的表达,从而调节细胞周期,产生对细胞增殖的影响.
