白纹伊蚊唾液腺34 ku-2基因克隆与原核表达 被引量：6

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作者 李方站 程金芝 +4 位作者 王涛 牟小会 颜凤 翟慧 吴家红 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第2期165-169,共5页

目的克隆并表达白纹伊蚊唾液腺Aalb_34ku-2蛋白。方法根据白纹伊蚊(罗马株)34ku-2开放读码框序列(Aalb_34ku-2)(GenBank:AY826118.1)设计特异引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊广州株雌蚊体内扩增获得Aalb_34ku-2基因。利用瑞士生物信息学... 目的克隆并表达白纹伊蚊唾液腺Aalb_34ku-2蛋白。方法根据白纹伊蚊(罗马株)34ku-2开放读码框序列(Aalb_34ku-2)(GenBank:AY826118.1)设计特异引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊广州株雌蚊体内扩增获得Aalb_34ku-2基因。利用瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,分析预测该蛋白质的结构功能;将该基因克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,重组质粒在大肠埃希菌BL21/DE3中经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用SDS-PAGE电泳鉴定。结果 RT-PCR扩增获得Aalb_34ku-2 2个转录本。Aalb_34ku-2_1序列长度为954bp,编码318个氨基酸,等电点为5.84;Aalb_34ku-2_2的ORF为882bp,编码294个氨基酸,等电点为6.09。两者相差24个氨基酸;构建Pet28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组表达载体并转入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导后得到的重组蛋白与目的蛋白分子质量(34ku)相符,经鉴定为包涵体蛋白。结论成功构建pET28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组原核表达质粒并表达出融合蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 唾液腺 34ku-2 原核表达 序列分析

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登革2型病毒在RAW264.7细胞和THP-1细胞中复制能力及免疫激活能力的比较

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作者 牟小会 吴家红 +1 位作者 张海龙 匡贵榕 《医学理论与实践》 2024年第17期2897-2901,共5页

目的:比较登革2型病毒(DENV2)在RAW264.7细胞和THP-1细胞中的复制能力及DENV2对这两种靶细胞的免疫激活作用。方法:将DENV2病毒液与靶细胞(RAW264.7细胞和THP-1细胞)分别孵育6h、12h、24h,孵育结束后收集细胞,Trizol法提取不同时间的细... 目的:比较登革2型病毒(DENV2)在RAW264.7细胞和THP-1细胞中的复制能力及DENV2对这两种靶细胞的免疫激活作用。方法:将DENV2病毒液与靶细胞(RAW264.7细胞和THP-1细胞)分别孵育6h、12h、24h,孵育结束后收集细胞,Trizol法提取不同时间的细胞总RNA,检测RNA纯度和浓度后逆转录为cDNA,使用qRT-PCR检测样本中病毒目的基因DENV2 E及细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-β、ISG15、CCL2的mRNA相对表达量。结果:DENV2感染RAW264.7细胞和THP-1细胞后,DENV2 E基因的表达量均显著上调(P<0.05),且呈现逐渐增加的趋势。6h、12h时,DENV2 E基因在两个靶细胞中的相对表达量一致;24h时,DENV2 E基因在RAW264.7细胞中的相对表达量显著高于THP-1细胞。与未感染DENV2组相比,DENV2感染RAW264.7细胞和THP-1细胞6h、12h、24h后,IL-1β、IL-6、TNF-α、ISG15、IFN-β、CCL2基因的相对表达量均显著升高(P<0.05),且在RAW264.7细胞中的相对表达量显著高于THP-1细胞。结论:DENV2在RAW264.7细胞中的复制能力强于THP-1细胞的复制能力,且DENV2在RAW264.7细胞中具有更强的免疫激活能力。 展开更多

关键词 DENV2 RAW264.7细胞 THP-1细胞 复制能力 免疫激活

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临床护士预防住院患者跌倒的现况调查及相关因素分析 被引量：3

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作者 牟小会 陆皓 +2 位作者 汉瑞娟 贾志花 曹丽 《中西医结合护理（中英文）》 2019年第3期91-95,共5页

目的调查并分析临床护士在跌倒预防教育、患者环境安全、生活用具、医院内部管理、评估评价方面护理措施落实的现况,为制定临床护士预防住院患者跌倒的培训策略提供参考依据。方法采用便利抽样的方法抽取兰州市某三甲医院的211名注册护... 目的调查并分析临床护士在跌倒预防教育、患者环境安全、生活用具、医院内部管理、评估评价方面护理措施落实的现况,为制定临床护士预防住院患者跌倒的培训策略提供参考依据。方法采用便利抽样的方法抽取兰州市某三甲医院的211名注册护士,采用住院患者跌倒预防之临床护士工作自评量表进行调查,并对调查结果进行分析。结果护士参与医院内部管理、与医生和患者及家属的沟通、对患者及其陪员的宣教、对患者安全的管理等方面得分低。不同工作年限、年龄、学历、职称、婚姻状况的护士对预防住院患者跌倒的自评得分比较差异有统计学意义(P<0.05),其中工作年限>3年、年龄>40岁、本科护士、高级职称者、未婚护士得分较高。多元线性回归分析显示,年龄、工作年限、学历、职称、婚姻状况是临床护士自评得分的影响因素(P<0.05)。结论护理管理人员应积极鼓励护士参与医院事务管理,加强护理人员对患者及陪员健康教育意识和能力的培训,提高护士对患者安全管理的意识和实践执行能力。 展开更多

关键词 护士 跌倒预防 护理管理 护理安全 培训

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中国大陆地区乙型脑炎病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

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作者 牟小会 吕清巧 +5 位作者 颜凤 程金芝 郑棉扬 商正玲 吴家红 韦艳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期158-160,共3页

流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）是黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒，三带喙库蚊是其主要的传播媒介，感染人体后可引起流行性乙型脑炎（乙脑）。人群对本病普遍易感，15岁以下儿童发病率较高。

关键词 流行性乙型脑炎病毒 PCR检测方法 TAQMAN 中国大陆地区 荧光定量 ENCEPHALITIS 一步法 单股正链RNA病毒

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埃及伊蚊yellow基因家族的鉴别和表达谱分析 被引量：1

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作者 颜凤 吕清巧 +5 位作者 程金芝 牟小会 翟慧 杨迅 商正玲 吴家红 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-8,共8页

目的筛选并鉴定埃及伊蚊（Aedes aegypti）全基因组中的yellow基因，分析其基因结构、基因进化以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法运用模式昆虫黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）Dm-yellow基因（GenBank登录号为AAF45497）... 目的筛选并鉴定埃及伊蚊（Aedes aegypti）全基因组中的yellow基因，分析其基因结构、基因进化以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法运用模式昆虫黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）Dm-yellow基因（GenBank登录号为AAF45497）王浆主蛋白（MRJP）结构域氨基酸序列，在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊yell0叫基因家族．采用ExPASy在线相关工具包分析其理化性质和结构域，运用SignalP4．1预测信号肽．结合使用DNAstar、MAGA6．0和GeneDoc软件包进行同源性比对、保守性分析和系统进化树构建。提取埃及伊蚊总RNA，合成cDNA，利用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）法对埃及伊蚊不同发育时期（卵、I～Ⅳ龄幼虫、蛹以及未吸血雌蚊和雄蚊）和未吸血雌蚊不同组织（唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢）的yellow基因表达谱进行相对定量分析。结果 从埃及伊蚊全基因组中筛选出12条yellow基因（Aa-一yellow、Aa一yellow—b、Aa一yellow—c、Aa一yellow—d、Aa-yellow—e、Aa一yellow-f2、Aa—yellow-fb、Aa一yellow-fc、Aa—yellow—g、Aa—yellow—g2、Aa—yellow—h和Aa一fellow—x）。生物信息学分析结果显示，12条yellow基因均具有MRJP结构域和信号肽序列。同源性比对结果显示．埃及伊蚊yellow基因家族成员间同源性较低，为15％～49％：但其保守域间同源性较高，可达60％。系统进化树分析结果显示．12个yellow蛋白分为5个亚家族，其中11个在黑腹果蝇中均有直系同源蛋白存在。ⅡRT．PCR结果显示，An—yellow-d和Aa-yelloW一Ⅳ在雄蚊中高表达（P〈0．01或P〈O．05），相对表达量分别为0．0189和0．0235；Aa一yelloW一尼在雌蚊和唾液腺中特异高表达（P〈0．01），相对表达量分别为0．0248和0．0349；Aa一yellow-f2在Ⅱ龄幼虫中特异高表达（P〈0．01），相对表达量为0．0934；Aa一yellow、Aa—yellow—e和Aa—yellow一� 展开更多

关键词 埃及伊蚊 yellow基因家族 qRT—PCR 表达谱

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用“扫雷游戏”原理标识新型冠状病毒核酸检测中的可能交叉污染孔

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作者 张海龙 牟小会 +1 位作者 王萍 滕敏 《检验医学与临床》 CAS 2023年第13期1954-1957,共4页

目的应用“扫雷游戏”原理分析新型冠状病毒核酸检测板中各孔与周边孔存在交叉污染的可能性,标识可能存在孔间交叉污染的孔位。方法利用Excel 2021模拟设计2块聚合酶链反应(PCR)反应板,其中1块用于显示反应孔所检测的ORF1ab和N基因的循... 目的应用“扫雷游戏”原理分析新型冠状病毒核酸检测板中各孔与周边孔存在交叉污染的可能性,标识可能存在孔间交叉污染的孔位。方法利用Excel 2021模拟设计2块聚合酶链反应(PCR)反应板,其中1块用于显示反应孔所检测的ORF1ab和N基因的循环数(Ct)值,另一块板则根据“被污染孔Ct值减去污染源孔Ct值≥5”的标准,计算显示可能被周边孔污染的孔位,并在实际新型冠状病毒核酸检测工作中,测试该表格的适用性。结果Excel模拟表格可准确反映PCR反应孔的基因检测值,同时显示可能存在污染的孔位。实际检测工作中,该表格成功预测了可能存在污染的孔位,该污染孔位对应的标本经双试剂2次复核均呈阴性。结论应用“扫雷游戏”原理评估新型冠状病毒核酸检测中的孔间污染,可准确、快速预测可能存在污染的孔位,避免多次复检。 展开更多

关键词 扫雷游戏 新型冠状病毒 核酸检测 循环数值 孔间交叉污染

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合理化培训的临床护士对PICC置管知识认知水平的调查分析

7

作者 牟小会 陆皓 +2 位作者 汉瑞娟 贾志花 曹丽 《中国科技期刊数据库 医药》 2019年第5期19-20,共2页

经过合理化培训后,了解护士培训后对于外周中心静脉导管(PICC)相关知识的掌握情况以及PICC的认知水平,为以后的培训策略提供一定的科学依据。方法:采用非随机抽样的方法,对兰州市某三甲医院的100名护士进行问卷调查,回收后对数据进行统... 经过合理化培训后,了解护士培训后对于外周中心静脉导管(PICC)相关知识的掌握情况以及PICC的认知水平,为以后的培训策略提供一定的科学依据。方法:采用非随机抽样的方法,对兰州市某三甲医院的100名护士进行问卷调查,回收后对数据进行统计学分析。结果:经培训后,临床护士对于PICC置管的相关理论和操作技术水平比培训前有了明显的提高。结论:培训有助于提升护士在PICC置管方面的知识水平和技能,为以后更好的开展该项目方面的培训提供科学的理论依据。 展开更多

关键词 现状调查 PICC 认知 培训

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腹腔镜Roux-en-Y分流胃旁路手术治疗病态肥胖症的研究进展

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作者 牟小会 陆皓 汉瑞娟 《甘肃科技纵横》 2018年第8期91-93,共3页

腹腔镜Roux-en-Y是一种改变肠道结构与部分胃功能的手术。在治疗病态肥胖症众多术式中,成为在治疗病态肥胖症患者人群中最受欢迎,效果显著、恢复快、成功率高且危险性最小的一种治疗手段,腹腔镜Roux-en-Y式在国外发展比较成熟,并且有与... 腹腔镜Roux-en-Y是一种改变肠道结构与部分胃功能的手术。在治疗病态肥胖症众多术式中,成为在治疗病态肥胖症患者人群中最受欢迎,效果显著、恢复快、成功率高且危险性最小的一种治疗手段,腹腔镜Roux-en-Y式在国外发展比较成熟,并且有与之相匹配的护理常规,以至于受到了病态肥胖症患者的信赖,在国内,由于医疗技术水平的限制再加上人们受到传统减肥观念的影响等因素,导致腹腔Roux-en-Y式起步较晚,发展较为缓慢也缺乏相应护理措施。针对该手术在国内外治疗病态肥胖症中作用、优点、进展以及相应的护理常规做了综述和讨论,以期腹腔镜Roux-en-Y分流胃旁路术在国内更好的发展。 展开更多

关键词 腹腔镜Roux-en-Y 肥胖病 研究进展

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登革-2型病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法建立

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作者 牟小会 郑祎扬 +5 位作者 韦艳 颜凤 程金芝 吕清巧 商正玲 吴家红 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1074-1078,共5页

目的建立一种针对登革2型病毒(DENV-2)的快速、灵敏、特异的检测方法。方法从Gen Bank下载105株DENV-2病毒毒株全基因序列,应用生物软件Bioedit进行比对分析筛选出保守序列,在保守区域设计特异引物和探针,建立检测DENV-2的TaqMan荧光定... 目的建立一种针对登革2型病毒(DENV-2)的快速、灵敏、特异的检测方法。方法从Gen Bank下载105株DENV-2病毒毒株全基因序列,应用生物软件Bioedit进行比对分析筛选出保守序列,在保守区域设计特异引物和探针,建立检测DENV-2的TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。结果该方法检测灵敏度达到102copies/μL;特异性验证中除登革2型病毒有明显扩增外,与墨累谷脑炎病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、登革病毒1、3、4型、黄热病毒和科萨努尔森林病毒、乙型脑炎病毒均无交叉反应。重复性实验结果表明该方法的组间和组内的变异系数(CV)均<2%。对人工感染DENV-2的87只蚊虫标本进行比对实验,结果荧光定量RT-PCR检测出56份阳性,传统RT-PCR只检测出16份阳性,差异有统计学意义(χ~2=37.908,P=0.000)。结论 TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测DENV-2,特异性强、敏感性高。 展开更多

关键词 登革2型病毒(DENV-2) TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测 标准品

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白纹伊蚊唾液蛋白Alb-AG5-3的基因特征分析及真核表达

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作者 高敏 吴家红 +10 位作者 程金芝 张霞 牟小会 聂映 彭哲慧 李志强 赵久刚 商正玲 刘磊 蓝静 刘红美 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第9期1039-1046,共8页

目的 初探白纹伊蚊唾液蛋白Antigen5-3(Alb-AG5-3)的结构与功能特征,并采用果蝇S2真核表达体系表达Alb-AG5-3。方法 采取同源比对的方式,从NCBI数据库中钓取Antigen5-3序列,根据白纹伊蚊分泌蛋白Antigen5-3基因参考序列(GenBank:AY82610... 目的 初探白纹伊蚊唾液蛋白Antigen5-3(Alb-AG5-3)的结构与功能特征,并采用果蝇S2真核表达体系表达Alb-AG5-3。方法 采取同源比对的方式,从NCBI数据库中钓取Antigen5-3序列,根据白纹伊蚊分泌蛋白Antigen5-3基因参考序列(GenBank:AY826105.1)设计特异性引物,从白纹伊蚊安顺株中扩增基因全长。经序列比对后利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Expasy)以及生物信息学在线软件SignalP、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL、AlphaFold等对该蛋白进行生物信息学分析。Trizol法提取白纹伊蚊雌蚊与雄蚊整蚊以及吸血前后雌蚊唾液腺RNA,qRT-PCR检测Alb-AG5-3在RNA相对表达量;以白纹伊蚊整蚊cDNA为模板,特异性扩增除信号肽外的Alb-AG5-3编码区,PCR产物经切胶回收纯化后与昆虫真核表达载体pMT/BiP/V5连接,构建真核重组质粒pMT/BiP/V5-Alb-AG5-3。随后转入果蝇S2细胞中,500μmol/L CuSO4诱导重组蛋白Alb-AG5-3的表达。收集上清,采用Western blot鉴定V5表达标签,镍柱亲和层析纯化重组蛋白Alb-AG5-3。结果 生物信息学分析该基因CDS(Coding sequence)区扩增全长为768 bp,编码255个氨基酸,二、三级结构预测以无规则卷曲和a-螺旋为主,具CAP超家族经典的PR-1结构域,该基因编码的蛋白是一种强亲水性(GRAVY:-0.864)的富含半胱氨酸的分泌蛋白。Alb-AG5-3 mRNA在雌蚊中表达量高于雄蚊且吸血后的表达量显著下调。成功构建了白纹伊蚊唾液蛋白pMT/BiP/V5-Alb-AG5-3真核表达质粒并通过果蝇S2表达体系表达出真核蛋白,镍柱亲和纯化后的Alb-AG5-3经Western blot检测能被V5标签蛋白抗体识别。结论 成功构建白纹伊蚊Alb-AG5-3真核质粒并在果蝇S2细胞中表达真核蛋白Alb-AG5-3,镍柱亲和纯化后获得单一的Alb-AG5-3蛋白以备后续分析。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 唾液腺 Alb-AG5-3蛋白 真核表达

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埃及伊蚊黄蛋白c基因的克隆、表达及其体外抗凝血作用

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作者 张霞 颜凤 +5 位作者 牟小会 林紫敏 聂映 程金芝 商正玲 吴家红 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2022年第2期153-158,167,共7页

目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序... 目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序鉴定。0.1 mol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋白表达后,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。比浊法观察不同浓度rAael-yellow-c蛋白对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集活性影响。手工法检测不同浓度rAael-yellow-c蛋白对人血浆凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶时间(TT)的影响。采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析,组间差异比较采用t检验。结果Aael-yellow-c基因CDS区为1287 bp,含27个氨基酸组成的信号肽,成熟肽序列长1200 bp,编码399个氨基酸。RT-PCR扩增获得Aael-yellow-c基因片段,大小约为1200 bp。菌液PCR、双酶切和测序鉴定显示,pEASYE1-Aael-yellow-c质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白以包涵体形式表达;镍柱亲和层析纯化重组蛋白后获得单一条带。Western blotting结果显示,该蛋白可被His-tag抗体和抗rAael-yellow-c蛋白的兔血清多克隆抗体识别。血小板聚集抑制实验结果显示,2083.30、416.66、83.33、16.67和3.33 nmol/L rAael-yellow-c蛋白可抑制由ADP诱导的血小板聚集,差异具有统计学意义(t=7.09、10.39、5.39、10.54和8.93,P<0.01),其中3.33 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集抑制作用最强,抑制率为(59.27±11.90)%;0.67、0.13和0.02 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集作用无影响(t=2.10、1.33和0.00,P>0.05)。内外源凝血实验结果显示,与阴性对照组相比,0.12、1.20和12.00μmol/L rAael-yellow-c分别作用于人血浆时,PT分别为13.63~14.10、13.32~14.38和13.55~16.01 s,差异无统计学意义(t=1.33� 展开更多

关键词 埃及伊蚊 yellow-c基因 血小板聚集 抗凝血

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