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类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展 被引量:65
1
作者 张义浜 刘志敏 凌霜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期88-90,94,共4页
关键词 类风湿关节炎 发病机制 治疗方法
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外源蛋白在芽孢杆菌中分泌表达的研究进展 被引量:11
2
作者 邓兵兵 凌霜 《生物工程进展》 CSCD 2000年第5期62-66,共5页
芽孢杆菌是很有潜力的分泌型基因工程宿主菌。本文概述了利用芽孢杆菌分泌表达外源基因时 ,影响目的蛋白产率的一些主要因素 ,如蛋白酶水解作用、缺乏适宜的分子伴侣、信号肽的选择不当等 ,并讨论了相应的解决对策。
关键词 芽孢杆菌 分泌表达 外源蛋白 蛋白酶解 分子伴侣
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对IL-4两种测活方法的比较及MTT法最适条件确定 被引量:14
3
作者 唱韶红 凌霜 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期300-303,共4页
目的建立一种稳定、灵敏的方法用于检测 IL - 4生物活性。方法比较人外周血 T淋巴细胞与 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系对 rh IL - 4的增殖应答特点及 MTT法用于 rh IL - 4生物活性检测过程中的细胞浓度、细胞培养时间、MTT掺入浓度及时间... 目的建立一种稳定、灵敏的方法用于检测 IL - 4生物活性。方法比较人外周血 T淋巴细胞与 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系对 rh IL - 4的增殖应答特点及 MTT法用于 rh IL - 4生物活性检测过程中的细胞浓度、细胞培养时间、MTT掺入浓度及时间等条件。结果两者均能对 rh IL - 4呈规律性增殖应答。 IL - 4活性测定时 ,人外周血 T淋巴细胞检测最低限为 8U /ml,CTL L - 2 /IL - 4R细胞系为 0 .73U /ml。确定了 MTT法用于 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系检测 rh IL - 4生物活性时的最佳条件方案。结论就重复性和应答敏感性来说 ,CTL L - 2 /IL - 4R较之 T淋巴细胞更为优越 ,该细胞系可用于建立一种较灵敏而稳定的 IL -4测活方法。 展开更多
关键词 CTLL-2/IL-4R MTT法 白细胞介素4 生物活性
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人sTNFR II-IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母菌中的表达及其产物分析 被引量:7
4
作者 张义浜 施立楠 +3 位作者 唱韶红 巩新 凌霜 吴军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期515-519,共5页
目的: 在毕赤酵母菌中表达sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白.检测融合蛋白是否形成二聚体,并对其N-糖链进行分析.方法: 从人淋巴细胞中提取总RNA, 经RT-PCR扩增目的基因sTNFRⅡ与IgG Fc, 然后利用重叠延伸PCR得到嵌合体基因sTNFRⅡ-IgG F... 目的: 在毕赤酵母菌中表达sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白.检测融合蛋白是否形成二聚体,并对其N-糖链进行分析.方法: 从人淋巴细胞中提取总RNA, 经RT-PCR扩增目的基因sTNFRⅡ与IgG Fc, 然后利用重叠延伸PCR得到嵌合体基因sTNFRⅡ-IgG Fc, 并将其插入pPIC9载体中.以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行克隆与表达.采用ELISA筛选高表达sTNFRⅡ-IgG Fc融合蛋白的重组毕赤酵母菌株, 对融合蛋白通过还原和非还原SDS-PAGE分析其二聚体结构, 采用L929细胞检测融合蛋白抗TNF-α的生物学活性, 最后利用荧光辅助糖电泳(FACE)分析融合蛋白的N-糖链.结果: 成功地建立了可分泌表达sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白的重组酵母菌株, 摇瓶培养后融合蛋白的表达量为2 mg/L.SDS-PAGE和Western blot表明, 该融合蛋白能自然形成二聚体结构; 可抑制TNF-α对L929细胞的杀伤作用, 其中和5×10^4 U/L TNF-α的EC50为170 μg/L.FACE分析融合蛋白N-糖链的大小为11 ~13个糖残基.结论: 在毕赤酵母菌中成功地表达了sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白, 为在毕赤酵母菌中表达其他的Fc融合蛋白和抗体提供了参考. 展开更多
关键词 人可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ FC融合蛋白 巴斯德毕赤酵母菌 荧光辅助糖电泳
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K_(88)抗原纯化中硫酸铵沉淀法的改进 被引量:5
5
作者 汪建华 唱韶红 凌霜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第4期310-311,共2页
硫酸铵沉淀法是一种用于蛋白质提纯的盐析方法 ,具有成本低、操作简单、对被分离物可保存其生物活性等优点而被广泛使用。我们在大肠杆菌菌毛蛋白K88纯化中采用硫酸铵沉淀法进行蛋白质粗提。
关键词 纯化 硫酸铵沉淀法 K88抗原 仔猪黄痢 蛋白质
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大肠杆菌生产的霍乱毒素B亚单位 被引量:6
6
作者 马清钧 刘传暄 +1 位作者 凌霜 于秀琴 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 1990年第7期726-730,共5页
应用遗传工程技术,获得一株高效表达霍乱毒素B亚单位的工程大肠杆菌菌株,该菌株在501发酵罐培养,B亚单位产量达20—40μg/ml,且能分泌至胞外。将工程菌产生的B亚单位经亲和层析纯化,获得了电泳纯制品,其分子量、N端氨基酰末端分析、抗... 应用遗传工程技术,获得一株高效表达霍乱毒素B亚单位的工程大肠杆菌菌株,该菌株在501发酵罐培养,B亚单位产量达20—40μg/ml,且能分泌至胞外。将工程菌产生的B亚单位经亲和层析纯化,获得了电泳纯制品,其分子量、N端氨基酰末端分析、抗原性、与天然的B亚单位完全相同。工程菌产生的B亚单位具有很好的免疫原性,可用于构建防治霍乱及毒源性大肠杆菌腹泻的制剂及半抗原的载体。 展开更多
关键词 大肠杆菌 霍乱毒素 B亚单位
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预防伤寒及霍乱二价口服疫苗的构建 被引量:5
7
作者 马清钧 于秀琴 +3 位作者 刘传暄 周建光 凌霜 黄翠芬 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 1989年第4期394-398,共5页
将含有产生无毒的霍乱毒素B亚单位基因之重组质粒pMM-CTB,转移至口服安全、有效的伤寒疫苗林Ty21a中。获得的Ty21a(pMM-CTB)这个菌株,能稳定地产生CT-B亚单位,分泌至胞外,具有与霍乱弧菌产生的CT-B亚单位有相同的抗原性,且它仍保持了伤... 将含有产生无毒的霍乱毒素B亚单位基因之重组质粒pMM-CTB,转移至口服安全、有效的伤寒疫苗林Ty21a中。获得的Ty21a(pMM-CTB)这个菌株,能稳定地产生CT-B亚单位,分泌至胞外,具有与霍乱弧菌产生的CT-B亚单位有相同的抗原性,且它仍保持了伤寒疫苗株Ty21a的抗原性,对半乳糖的敏感性及在体内存留时间的生物特性。应用它与杀死的霍乱弧菌全细胞构建成二价疫苗,具有对伤寒和霍乱很好的免疫原性。 展开更多
关键词 伤寒 霍乱 二价口服疫苗 预防
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组织型纤溶酶原激活剂cDNA在大肠杆菌中的表达研究 被引量:4
8
作者 凌霜 黄培堂 +2 位作者 董陆佳 罗素英 顾利群 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1994年第4期249-252,共4页
将去除信号肽编码序列的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)结构基因片段插入载体pBV220的EcoRI位点。目的基因受λP_LP_R启动子调控,通过温度调节诱导,t-PA基因获得表达。电镜观察可见表达产物以包含体形式存在... 将去除信号肽编码序列的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)结构基因片段插入载体pBV220的EcoRI位点。目的基因受λP_LP_R启动子调控,通过温度调节诱导,t-PA基因获得表达。电镜观察可见表达产物以包含体形式存在;表达量占非溶性菌体总蛋白的5%-8%。包含体产物经溶解及复性处理,可恢复活性;用溶纤维琼脂糖平板法、中和试验等方法证明了复性产物具有特异的t-PA溶纤活性. 展开更多
关键词 纤溶酶原激活剂 基因克隆表达 T-PA 大肠杆菌
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胸腺素α原的研究进展 被引量:3
9
作者 杨晓征 吴军 凌霜 《生物技术通讯》 CAS 2006年第3期443-446,共4页
胸腺素α原(ProTα)是一种在哺乳动物细胞中广泛分布、结构保守的酸性小分子蛋白,是胸腺素α1(Tα1)的前体蛋白。目前在细胞内和细胞外均已发现了ProTα。在胞内,ProTα作为一种核蛋白,参与对细胞周期的调节,促进细胞增殖;在胞外,ProT... 胸腺素α原(ProTα)是一种在哺乳动物细胞中广泛分布、结构保守的酸性小分子蛋白,是胸腺素α1(Tα1)的前体蛋白。目前在细胞内和细胞外均已发现了ProTα。在胞内,ProTα作为一种核蛋白,参与对细胞周期的调节,促进细胞增殖;在胞外,ProTα通过潜在的膜受体调节免疫应答,促进IFN-γ、TNF-α、IL-2等细胞因子的产生,进而增强细胞和体液免疫应答。但该蛋白的分泌机制、受体以及信号通路还有待研究。 展开更多
关键词 胸腺素Α原 胸腺素 免疫调节
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纯化重组霍乱毒素B亚单位与天然霍乱毒素B亚单位性质的对比研究 被引量:2
10
作者 刘传暄 马清钧 +2 位作者 张艳红 施维 凌霜 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期316-319,共4页
霍乱毒素B亚单位(BS)已用于新型口服霍乱疫苗、佐剂及蛋白质载体,但成本高,来源困难.用重组霍乱毒素B亚单位(rBS)代替BS可克服上述缺点.rBS用于上述目的前必须证实其在物理、化学及免疫学性质方面与天然同类产品的... 霍乱毒素B亚单位(BS)已用于新型口服霍乱疫苗、佐剂及蛋白质载体,但成本高,来源困难.用重组霍乱毒素B亚单位(rBS)代替BS可克服上述缺点.rBS用于上述目的前必须证实其在物理、化学及免疫学性质方面与天然同类产品的一致性.用亲和层析法从各批次大罐发酵所获工程菌E.coliMM2(pMM-CTB)培养物上清中制备得到了小批量rBS纯品,在同等条件下与BS(Sig-ma公司产品)进行理化、免疫学性质的对比研究,证实二者在SDS-PAGE中电泳带位置一致、分子量相同,纯度达99%;在反相HPLC中出峰行为一致,纯度达100%;在半干式聚焦电泳分析中电泳带分布相同,等电点为7.91.rBSN端起的20个氨基酸序列为TPQNITDLCAEYHNTQIHTL,与克隆基因来源株的毒素B亚单位同一段序列完全一致.氨基酸组成分析证实rBS与BS相近.在免疫学性质分析中,rBS与BS在免疫双扩散试验中与抗CT均出一条沉淀线且相互吻合;在免疫电泳试验中二者与抗CT在相应位置上产生一条沉淀弧;二者均能与神经节苷脂GM1结合且这种结合均可通过二者与抗CT的预保温处理而被阻断.对比研究结果揭示rBS与BS性质完全一致,可代替BS用于? 展开更多
关键词 重组 霍乱毒素B 亚单位 性质
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膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶家族的研究进展 被引量:2
11
作者 段德民 凌霜 吴军 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期277-280,共4页
膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶家族(E-NPPs)是哺乳动物体内一族结构相似的膜蛋白,目前共发现该家族的7个成员。该家族名称的由来是因为最初发现的NPP1、NPP2、NPP3均具有水解核苷酸及其衍生物的焦磷酸酯键/磷酸二酯键的活性,而进一... 膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶家族(E-NPPs)是哺乳动物体内一族结构相似的膜蛋白,目前共发现该家族的7个成员。该家族名称的由来是因为最初发现的NPP1、NPP2、NPP3均具有水解核苷酸及其衍生物的焦磷酸酯键/磷酸二酯键的活性,而进一步的研究表明,E-NPPs的一些成员还具有重要的磷脂酶活性。它们广泛参与核苷酸循环、骨矿化、磷脂信号调控、细胞运动、细胞增殖等多种生理过程,其表达异常时会导致肿瘤、骨矿化异常、Ⅱ型糖尿病等疾病的发生。 展开更多
关键词 膜外核苷酸焦磷酸酯酶/磷酸二酯酶 肿瘤 骨矿化异常 Ⅱ型糖尿病
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重组人Shiga-EGF工程菌发酵工艺研究 被引量:2
12
作者 汪建华 凌霜 +1 位作者 吴军 马清钧 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2001年第6期292-294,共3页
目的研究表达重组人Shiga EGF(rhShiga EGF)融合蛋白工程菌的发酵条件。方法通过摇瓶试验优选适合工程菌生长、表达的培养基配方、pH及以乳糖替代IPTG作诱导剂等 ,并在 5L发酵罐上进行试验。 结果采用A3配方的培养基 ,在pH 6 .8条件下 ... 目的研究表达重组人Shiga EGF(rhShiga EGF)融合蛋白工程菌的发酵条件。方法通过摇瓶试验优选适合工程菌生长、表达的培养基配方、pH及以乳糖替代IPTG作诱导剂等 ,并在 5L发酵罐上进行试验。 结果采用A3配方的培养基 ,在pH 6 .8条件下 ,以乳糖诱导表达 5h ,5L罐发酵工程菌菌密度 (A60 0nm)达到 15 ,菌体湿重 2 7g/L ,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的 15 %~ 2 0 %。 展开更多
关键词 发酵 表达 融合蛋白 表皮生长因子 Shiga
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工程菌产霍乱肠毒素B亚单位的纯化 被引量:2
13
作者 凌霜 马清钧 张艳红 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第1期27-31,共5页
本实验室使霍乱肠毒素(CT)B亚单位基因在大肠杆菌中获得表达,并能分泌到胞外。将该菌株培养物上清经过超滤浓缩后,用偶联上霍乱毒素IgG的CNBr-Sepharose 4B进行亲和层析,得到表达产物霍乱毒素B亚单位纯蛋白。经PA-GE、HPLC及琼脂免疫扩... 本实验室使霍乱肠毒素(CT)B亚单位基因在大肠杆菌中获得表达,并能分泌到胞外。将该菌株培养物上清经过超滤浓缩后,用偶联上霍乱毒素IgG的CNBr-Sepharose 4B进行亲和层析,得到表达产物霍乱毒素B亚单位纯蛋白。经PA-GE、HPLC及琼脂免疫扩散等方法鉴定证明该蛋白与天然霍乱肠毒素B亚单位完全相同。 展开更多
关键词 霍乱肠毒素 蛋白纯化 亲和层析
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MM3工程菌K88抗原的纯化 被引量:2
14
作者 唱韶红 汪建华 凌霜 《生物技术通讯》 CAS 2000年第1期32-33,共2页
将MM3工程菌表达的K88纤毛抗原通过脱毛、硫酸铵沉淀处理后 ,经SephacrylS 10 0一步柱色谱纯化 ,K88抗原纯度达 97%以上 。
关键词 K88纤毛蛋白 纯化 MM3工程菌 抗原性 幼畜腹泻
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大肠杆菌表达的重组hIL-4的分离纯化 被引量:1
15
作者 周艳荣 凌霜 +1 位作者 唱韶红 阎明凡 《生物技术通讯》 CAS 1999年第2期130-133,共4页
对大肠杆菌表达的重组人白细胞介素 4进行了分离纯化。人 IL- 4基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包含体形式存在 ,经过超声破菌、包含体抽提、洗涤处理 ,可使包含体纯度达 70 %以上 ,用 6mol/L盐酸胍变性溶解包含体沉淀后上清直接稀释... 对大肠杆菌表达的重组人白细胞介素 4进行了分离纯化。人 IL- 4基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包含体形式存在 ,经过超声破菌、包含体抽提、洗涤处理 ,可使包含体纯度达 70 %以上 ,用 6mol/L盐酸胍变性溶解包含体沉淀后上清直接稀释复性 ,再经浓缩、透析、离子交换色谱一系列纯化步骤终产物纯度达 95 %以上 ,回收率 1 0 %以上 ,比活性达 2 .5× 1 0 展开更多
关键词 重组人白细胞介素4 包含体 复性 纯化
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tPA K_2编码区mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响研究
16
作者 顾利群 刘士辉 +1 位作者 凌霜 黄培堂 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第1期64-69,共6页
序列分析中发现tPAK2编码区结构基因中存在一段反转重复序列,富含G、C。利用计算机预测tPAmRNA二级结构证明tPAmRNA在此处可以形成△Gm=-25.5KCal/mol的发夹结构。本研究利用定点突变技术消除了... 序列分析中发现tPAK2编码区结构基因中存在一段反转重复序列,富含G、C。利用计算机预测tPAmRNA二级结构证明tPAmRNA在此处可以形成△Gm=-25.5KCal/mol的发夹结构。本研究利用定点突变技术消除了这段反转重复序列,在大肠杆菌中进行了消除前后tPA转录和翻译水平的比较。结果表明消除之后,细菌总RNA中tPA特异mRNA含量减少,细菌表达产物中tPA蛋白占破菌沉淀物的百分比却基本不变。提示大肠杆菌中基因编码区mRNA二级结构一般不构成转录的终止,但有利于mRNA的稳定性,对翻译表达无影响。 展开更多
关键词 TPA 转录 翻译 纤溶酶原 激活剂
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重组人IL-4抗血清的制备及鉴定
17
作者 汪建华 凌霜 +2 位作者 王勇波 唱韶红 周涛 《生物技术通讯》 CAS 1998年第4期301-302,共2页
白细胞介素4(IL-4)是一种由TH2细胞分泌的具有多种生物学活性的细胞因子,是机体免疫系统的重要成员,在参与机体免疫调节方面有重要作用。据文献报道,IL-4在临床上与过敏性哮喘、皮炎等疾病有关,美国Genzyme公司已研制开发ELISA试剂盒检... 白细胞介素4(IL-4)是一种由TH2细胞分泌的具有多种生物学活性的细胞因子,是机体免疫系统的重要成员,在参与机体免疫调节方面有重要作用。据文献报道,IL-4在临床上与过敏性哮喘、皮炎等疾病有关,美国Genzyme公司已研制开发ELISA试剂盒检测IL-4水平,但价格昂贵。本实验制备rhIL-4抗血清以应用于IL-4的生物学活性研究及临床检测IL-4水平等方面。 展开更多
关键词 抗血清 白细胞介素4 IL-4 IL一4 生物学活性 医学科学院 重组人 过敏性哮喘 硝酸纤维素膜 弗氏完全佐剂
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体外重组双功能质粒及其性质的研究——(一)PMM-1的构建与功能表达
18
作者 黄培堂 凌霜 +1 位作者 马清钧 黄翠芬 《军事医学科学院院刊》 1982年第3期301-306,共6页
目前在遗传工程研究中,大多利用大肠杆菌作为分子无性繁殖的宿主。然而,近几年在开创新的无性繁殖宿主的研究中,枯草杆菌是颇有吸引力的。对枯草杆菌的遗传分析已有了较详细的研究,能转导和转化。它的recE突变株,是非缺失重组缺陷株.
关键词 质粒 基因载体 枯草杆菌 MM-1 转化子 酶切 体外重组 DNA 大肠杆菌 大肠埃希氏菌 埃希氏杆菌属 抗性基因 双功能 连接酶 合成酶 凝胶电泳 四环素
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THE EXPRESSION OF ENTEROTOXIN A^-B^+ GENE OF V. cholerae IN E. coli
19
作者 马清钧 周建光 +4 位作者 于秀琴 刘传暄 凌霜 徐永强 黄翠芬 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1989年第2期186-192,共7页
The cloning in E. coli of a cholerae toxin gene that is A^-B^+ has been successfully constructed by using DNA recombinant techniques. E. coli cells carrying the recombinant plasmid pMM-CTB have been shown to produce a... The cloning in E. coli of a cholerae toxin gene that is A^-B^+ has been successfully constructed by using DNA recombinant techniques. E. coli cells carrying the recombinant plasmid pMM-CTB have been shown to produce a large amount of CTB subunits which are secreted as extracellular proteins. 展开更多
关键词 V. CHOLERAE TOXIN GENE cloning and expressing.
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B SUBUNIT OF CHOLERA TOXIN PRODUCED IN Escherichia coli
20
作者 马清钧 刘传暄 +1 位作者 凌霜 于秀琴 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1991年第3期274-280,共7页
An engineered E. coli strain containing high expression level of CT-B subunits has beenobtained by the application of recombinant DNA techniques. The B subunit can be secretedinto the medium and reaches 20- 40 μg/ml ... An engineered E. coli strain containing high expression level of CT-B subunits has beenobtained by the application of recombinant DNA techniques. The B subunit can be secretedinto the medium and reaches 20- 40 μg/ml when this strain is incubated in a 50 1 fermenta-tion tank. The CT-B subunit purified with affinity chromatography in E. coli has the samecharacters as the natural CT- B subunit in molecular weight, N terminal amino acid analysisand antigenicity. The CT-B subunit has good immunogenicity and can be used as a preparation for protect-ing against diarrhea caused by V. cholera and enterotoxigenic E. coli. It can also be usedas a vector for hepatins. 展开更多
关键词 E.COLI CHOLERA TOXIN
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