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姜黄素联合顺铂对人肝癌细胞HepG2增殖、自噬和凋亡的影响 被引量:11
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作者 龚爱华 +2 位作者 金洁 邵根宝 彭琬昕 《江苏医药》 CAS 北大核心 2014年第1期1-4,共4页
目的探讨姜黄素联合顺铂对人肝癌细胞HepG2增殖、自噬和凋亡的影响。方法将不同浓度的姜黄素、顺铂单独或联合处理体外培养的人肝癌细胞HepG2。24h后,MTT法检测细胞活性,免疫荧光观察细胞内自噬泡形成情况,Western blot检测自噬、凋亡... 目的探讨姜黄素联合顺铂对人肝癌细胞HepG2增殖、自噬和凋亡的影响。方法将不同浓度的姜黄素、顺铂单独或联合处理体外培养的人肝癌细胞HepG2。24h后,MTT法检测细胞活性,免疫荧光观察细胞内自噬泡形成情况,Western blot检测自噬、凋亡相关蛋白表达。结果与姜黄素或顺铂单药给药组相比,姜黄素联合顺铂更能明显抑制HepG2细胞的增殖(P<0.05),促进微管相关蛋白LC3的点状分布,提高自噬相关蛋白Beclin1的表达和LC3Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05),降低凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的比值(P<0.05),并激活半胱天冬氨酸蛋白酶3(P<0.05)。结论姜黄素联合顺铂可诱导HepG2细胞的自噬和凋亡,显著提高HepG2细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 姜黄素 顺铂 肝细胞肝癌 细胞凋亡 细胞自噬
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SAHA诱导的p21表达致U251MG细胞抗凋亡效应 被引量:4
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作者 龚爱华 +5 位作者 张严 杜凤移 彭琬昕 邵根宝 金洁 程建军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1743-1747,共5页
目的探讨SAHA诱导的p21在脑胶质瘤细胞U251MG中的生物学作用。方法采用免疫印迹技术、RAN干扰技术和流式细胞技术分析了p21的表达水平与SAHA引起的U251MG细胞周期阻滞和细胞死亡的相关性。结果与对照组相比较,p21-ShRNA组明显提高了U25... 目的探讨SAHA诱导的p21在脑胶质瘤细胞U251MG中的生物学作用。方法采用免疫印迹技术、RAN干扰技术和流式细胞技术分析了p21的表达水平与SAHA引起的U251MG细胞周期阻滞和细胞死亡的相关性。结果与对照组相比较,p21-ShRNA组明显提高了U251MG细胞凋亡的比例,达到45%左右,活化的凋亡相关蛋白Caspase-3,-8,-9表达水平明显增加;p21-ShRNA组细胞周期调控蛋白cdc25c、cdc2的磷酸化水平和总蛋白质水平也明显上调,clycinB1和磷酸化的H3水平明显提高。结论在SAHA处理条件下,p21下调使U251MG细胞阻滞于细胞周期G2/M期,促进了细胞凋亡。 展开更多
关键词 SAHA 胶质瘤细胞 P21 凋亡 细胞周期 RNA干扰 组蛋白去乙酰化酶
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干扰乳酸脱氢酶A表达对肝癌HepG2细胞增殖与迁移的影响 被引量:1
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作者 司素华 +2 位作者 杜凤仪 彭琬昕 龚爱华 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2015年第6期487-490,共4页
目的:观察靶向乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase-A,LDHA)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肝癌Hep G2细胞系的干扰效率及其对细胞增殖与迁移的影响。方法:设计合成LDHA及对照e GFP shRNA序列,克隆至真核表达质粒p LKO.1-TRC,... 目的:观察靶向乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase-A,LDHA)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肝癌Hep G2细胞系的干扰效率及其对细胞增殖与迁移的影响。方法:设计合成LDHA及对照e GFP shRNA序列,克隆至真核表达质粒p LKO.1-TRC,质粒抽提纯化后测序鉴定。重组质粒用脂质体转染肝癌细胞系,采用反转录(RT)-PCR和免疫印迹检测LDHA的表达,验证shRNA的干扰效率。采用CCK-8和克隆形成实验检测干扰LDHA后细胞增殖的变化,划痕实验检测干扰LDHA对细胞迁移的影响。结果:成功构建针对LDHA和对照e GFP的shRNA表达质粒。与转染sh-e GFP组相比,转染sh-LDHA组Hep G2细胞中LDHA mRNA和蛋白表达水平明显降低(P均<0.05)。与sh-e GFP组相比,sh-LDHA组72,96 h细胞增殖明显降低,克隆形成数减少,细胞迁移距离短(P均<0.05)。结论:LDHA的干扰质粒能有效干扰LDHA在肝癌Hep G2细胞中的表达,明显抑制Hep G2细胞的增殖活力和迁移能力。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 乳酸脱氢酶A RNA干扰
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DAPT与K252a联用体外抑制人脑胶质瘤U251MG细胞的生长 被引量:1
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作者 陈普建 +1 位作者 张严 龚爱华 《江苏医药》 CAS 北大核心 2014年第15期1746-1749,I0001,共5页
目的探讨Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)与神经营养素受体高亲和力的酪氨酸激酶受体家族(Trks)阻断剂K252a联用对人脑胶质瘤U251MG细胞的抑制作用。方法应用DAPT和K252a单独或联用处理U25... 目的探讨Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)与神经营养素受体高亲和力的酪氨酸激酶受体家族(Trks)阻断剂K252a联用对人脑胶质瘤U251MG细胞的抑制作用。方法应用DAPT和K252a单独或联用处理U251MG细胞,噻唑蓝比色实验检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p-TrkA、JNK、p-JNK、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2和Bcl-xL等蛋白的表达。结果 DAPT和K252a均能呈时间与剂量依赖性抑制体外胶质瘤细胞的活性。K252a200、100和50nmol/L与DAPT 2.5μmol/L联合用药24、48和72h的细胞活力均低于单独使用K252a或DAPT(P<0.05)。两药联用可以增加sub-G1期细胞,即促进细胞凋亡。与K252a100nmol/L或DAPT 2.5μmol/L单用比较,K252a100nmol/L与DAPT 2.5μmol/L联用降低了p-TrkA的量,对于JNK的表达基本没影响,但可增加p-JNK的表达。可活化Caspase-3和Caspase-9,同时减少Bcl-xL的表达,但对Bax和Bcl-2的表达基本没影响。结论 DAPT能抑制U251MG的细胞活性。联合DAPT用药能增强K252a对人脑胶质瘤细胞U251MG的毒性。 展开更多
关键词 DAPT K252A 胶质瘤
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全反式维甲酸协同DAPT抑制胶质瘤干细胞的自我更新 被引量:1
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作者 龚爱华 +5 位作者 张严 杜凤移 彭琬昕 邵根宝 金洁 程建军 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1477-1484,共8页
前期研究脑表明,脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)是胶质瘤发生和发展的重要因素,探索靶向干预GSCs生长有可能成为脑胶质瘤治疗的有效途径之一。该研究旨在阐明两种药物ATRA和γ-分泌酶抑制剂DAPT协同抑制GSCs自我更新的生物学... 前期研究脑表明,脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)是胶质瘤发生和发展的重要因素,探索靶向干预GSCs生长有可能成为脑胶质瘤治疗的有效途径之一。该研究旨在阐明两种药物ATRA和γ-分泌酶抑制剂DAPT协同抑制GSCs自我更新的生物学效应。通过用台盼蓝排染法、克隆球形成试验和免疫印迹分析了两种药物的单独使用或联用对GSC样细胞PGC1和PGC2生长、成球能力和自我更新以及干细胞标志物表达的影响。结果发现,单独使用ATRA对PGC1生长有一定的抑制作用,而对PGC2生长几乎没有影响;DAPT对PGCs的生长抑制作用明显强于ATRA。高浓度ATRA(80μmol/L)能诱导PGCs的分化,降低PGCs成球大小,且成球效率降至5%~8%,而正常对照组为32%~35%;同样,DAPT(40μmol/L)也能降低PGCs成球大小,且成球效率降至2%~3%;低浓度ATRA(20μmol/L)和DAPT(5μmol/L)对PGCs自我更新能力和干性没有明显影响,而联合使用后其明显降低PGCs的成球大小,且成球效率降至3%~5%,促进细胞凋亡,并且明显抑制了干细胞标志物Nestin、CD133、Sox2、Oct4的表达,提高了分化标志物GFAP的表达。该研究证明了低浓度的ATRA和DAPT能协同抑制脑胶质瘤干细胞PGCs的自我更新。研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。 展开更多
关键词 ATRA DAPT 脑胶质瘤干细胞 自我更新
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敲低LDHA抑制脑胶质瘤细胞生长和EMT的研究 被引量:2
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作者 彭光泉 韩秀 +5 位作者 陈曦 唐宇 程洁 彭琬昕 龚爱华 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第10期1288-1295,共8页
该研究旨在探讨乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)基因对脑胶质瘤细胞上皮细胞–间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)以及细胞生长的影响。用sh-LDHA质粒转染脑胶质瘤细胞,比色法检测细胞内LDHA活性,流式细胞... 该研究旨在探讨乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)基因对脑胶质瘤细胞上皮细胞–间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)以及细胞生长的影响。用sh-LDHA质粒转染脑胶质瘤细胞,比色法检测细胞内LDHA活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,CCK-8法和克隆形成实验分析细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力,q-PCR检测LDHAm RNA水平,以及Western blot检测LDHA和EMT相关蛋白质水平。结果表明,转染sh-LDHA质粒能显著降低LDHA m RNA和蛋白质水平。同时,敲低LDHA诱导U87MG细胞发生凋亡,LDHA活性降至原来水平的50%U87MG细胞的增殖和迁移能力低于sh-EGFP组(P<0.05)。另外,敲低LDHA抑制U87MG细胞的EMT过程。而在LDHA表达水平相对较低的U251MG和SW1783细胞中,干扰LDHA对细胞生长和EMT没有显著影响。该研究结果说明,LDHA在脑胶质瘤细胞的EMT过程和生长中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 乳酸脱氢酶A EMT
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干扰Hmgb3表达对肺腺癌A549细胞增殖的影响
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作者 罗贤琴 唐华容 +5 位作者 王洁 金洁 邵根宝 龚爱华 吴朝阳 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1059-1063,共5页
目的构建针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,检测诱导稳定感染细胞株干扰序列的干扰效率及其对A549细胞增殖的影响。方法设计Hmgb3及对照GFP shRNA序列,装入Tet-pLKO-puro质粒,进行慢病毒包装,感染A549细胞,嘌呤霉素筛选稳定株,筛选最佳诱... 目的构建针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,检测诱导稳定感染细胞株干扰序列的干扰效率及其对A549细胞增殖的影响。方法设计Hmgb3及对照GFP shRNA序列,装入Tet-pLKO-puro质粒,进行慢病毒包装,感染A549细胞,嘌呤霉素筛选稳定株,筛选最佳诱导浓度并诱导干扰序列表达,Western blot检测干扰效率,MTT实验检测其对A549细胞增殖的影响。结果构建的Hmgb3shRNA慢病毒稳定细胞株诱导后可显著抑制Hmgb3的表达,干扰效率达73%(P<0.05),而对照组无明显干扰效果(P=0.721),对照组的增殖率为94%,实验组的增殖率下降为46%(P<0.05)。结论成功构建了针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,并有效沉默A549细胞靶基因,干扰Hmgb3对肺癌细胞的增殖有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 RNA干扰 Hmgb3 慢病毒 A549细胞
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ADAM17调控Hippo信号转导通路对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响
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作者 张春利 韩秀 +4 位作者 彭琬昕 杜凤仪 周海浪 龚爱华 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第1期17-23,共7页
为探讨去整合素-金属蛋白酶17(disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)对人胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其调控机制,该研究用ADAM17 sh RNA质粒转染ADAM17高表达的胶质瘤细胞U87MG、U251MG,用过表达ADAM17载体转染ADAM17低表达... 为探讨去整合素-金属蛋白酶17(disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)对人胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其调控机制,该研究用ADAM17 sh RNA质粒转染ADAM17高表达的胶质瘤细胞U87MG、U251MG,用过表达ADAM17载体转染ADAM17低表达细胞SW1783,q-PCR和Western blot检测ADAM17表达水平的变化,同时检测ADAM17和Hippo信号通路中相关蛋白质表达水平,CCK-8法分析细胞增殖能力并绘制生长曲线,划痕实验检测细胞迁移率。结果表明,下调ADAM17后,U87MG、U251MG细胞增殖和迁移能力减弱,而Hippo信号通路中MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平升高;上调ADAM17后,SW1783细胞增殖和迁移能力增强,而MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平降低。结果说明,ADAM17在脑胶质瘤细胞的增殖和迁移中发挥了重要作用,这可能是通过抑制Hippo信号通路来实现的,MST2被抑制,p-MOB1水平降低,从而YAP的磷酸化水平也降低,促进了胶质瘤细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 ADAM17 胶质瘤 Hippo信号通路 细胞增殖 细胞迁移
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA影响U251细胞中p21稳定性的机制
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作者 龚爱华 +5 位作者 张严 杜凤移 彭琬昕 邵根宝 金洁 程建军 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1577-1583,共7页
目前已开发的组蛋白去乙酰化酶抑制剂如SAHA表现出了广泛的临床应用前景。然而,其作用机制有待进一步阐明。该研究旨在探明SAHA对p21蛋白稳定性的影响。运用Real-time PCR、免疫共沉淀、泛素化降解实验、免疫印迹和流式细胞技术分析了S... 目前已开发的组蛋白去乙酰化酶抑制剂如SAHA表现出了广泛的临床应用前景。然而,其作用机制有待进一步阐明。该研究旨在探明SAHA对p21蛋白稳定性的影响。运用Real-time PCR、免疫共沉淀、泛素化降解实验、免疫印迹和流式细胞技术分析了SAHA对p21 mRNA和蛋白水平、稳定性和泛素化水平的影响;并分析了SAHA通过调节GSK-3β的活性影响p21蛋白稳定性及细胞周期的进程。结果发现,SAHA不但可以上调p21 mRNA水平,还可以稳定其蛋白水平;而且SAHA通过影响GSK-3β的活性降低p21蛋白泛素化水平,从而抑制其降解,并因此改变细胞周期进程,这表明SAHA可以通过抑制GSK-3β的活性增加p21蛋白的稳定性,维持其蛋白水平从而发挥SAHA的生物学效应。该研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。 展开更多
关键词 SAHA 胶质瘤细胞 P21 GSK-3Β
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