中国百日咳疫苗的现状及研发趋势初探 被引量：32

1

作者 潘殊男 盛玉博 肖詹蓉 《微生物学免疫学进展》 2012年第5期72-77,共6页

百日咳是许多国家的严重公共卫生问题,目前预防百日咳最有效和最经济的方法是接种百日咳疫苗,百日咳组分疫苗由于其保护效果好、不良反应低、质量稳定可控而成为新一代无细胞百日咳疫苗的首选。本文简要介绍百日咳的病原学、传播途径及... 百日咳是许多国家的严重公共卫生问题,目前预防百日咳最有效和最经济的方法是接种百日咳疫苗,百日咳组分疫苗由于其保护效果好、不良反应低、质量稳定可控而成为新一代无细胞百日咳疫苗的首选。本文简要介绍百日咳的病原学、传播途径及流行病学特点,并对中国的百日咳疫苗研发趋势进行初步探讨。 展开更多

关键词 百日咳 百日咳疫苗 联合疫苗

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百日咳丝状血凝素酶联免疫检测法的建立 被引量：11

2

作者 潘殊男 肖詹蓉 +5 位作者 史雨舟 张霖阳 王宇星 李世慧 韩凝 张萍 《微生物学免疫学进展》 2012年第4期25-28,共4页

目的建立百日咳组分疫苗丝状血凝素(FHA)抗原含量监控的ELISA检测法。方法制备的多克隆抗血清,经辛酸硫酸铵法纯化抗体,用过碘酸钠氧化法辣根过氧化物酶标记,以棋盘滴定法确定最佳包被抗体及酶标抗体的浓度配伍,建立了双抗体夹心ELISA... 目的建立百日咳组分疫苗丝状血凝素(FHA)抗原含量监控的ELISA检测法。方法制备的多克隆抗血清,经辛酸硫酸铵法纯化抗体,用过碘酸钠氧化法辣根过氧化物酶标记,以棋盘滴定法确定最佳包被抗体及酶标抗体的浓度配伍,建立了双抗体夹心ELISA检测法。结果对双抗体夹心ELISA法的特异性、最佳线性范围、检测限度、精密度、准确度、测定限量、适用性的一系列验证试验表明,该方法与百日咳组分疫苗中PT和Prn无明显交叉反应,特异性较好。在0至20 ng/mL测量区间有最佳线性,相关系数大于0.99;经实验内12次及不同试验间3次测定16、8、4 ng/mL中的FHA含量,变异系数在0.2%～11.4%间,回收率在96.9%～114.5%间,精密度及准确度验证均符合常规质控要求,因此测定限量为4 ng/mL。结论该方法能有效检测出百日咳杆菌培养上清中的FHA含量,可用于百日咳组分疫苗生产过程的中间品质量控制。 展开更多

关键词 百日咳 丝状血凝素 酶联免疫吸附试验

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A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量测定方法的建立 被引量：9

3

作者 肖詹蓉 潘殊男 +2 位作者 李世慧 栗妍 张萍 《国际生物制品学杂志》 CAS 2011年第4期175-179,共5页

目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌（meningococcus,Men）多糖疫苗（groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine,MPV4）多糖含量的火箭免疫电泳（rocket immunoelectro-phoresis,RIE）法.方法 分别用A、C、Y、W135... 目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌（meningococcus,Men）多糖疫苗（groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine,MPV4）多糖含量的火箭免疫电泳（rocket immunoelectro-phoresis,RIE）法.方法 分别用A、C、Y、W135群Men菌液,A、C、Y、W135群Men菌液加弗氏佐剂,A、C、Y、W135群Men多糖-牛白蛋白结合物免疫家兔,制备特异性抗血清.将制备的抗血清以一定的比例加入琼脂糖凝胶制成平板,并将纯化的多糖作为定量参考品加入抗原孔进行RIE.以多糖含量和对应的RIE峰高作标准曲线并建立直线回归方程.采用优化的RIE法测定MPV4多糖含量和分子大小.结果 菌液加佐剂制备的抗血清效价较理想.在确定的电泳条件下,建立的RIE法制备的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数值均〉0.98.该法特异性较好,未检出各多糖间的交叉反应.采用该法测定的3批MPV4的多糖含量、分子大小及回收率均与先前的检定结果相符,均符合质控标准.结论 建立的RIE法可作为MPV4多糖抗原含量的测定方法. 展开更多

关键词 免疫电泳 脑膜炎双球菌菌苗 多糖类 细菌 方法

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ELISA法检测疫苗中牛血清残留量的适用性研究 被引量：8

4

作者 潘殊男 杨冰 +1 位作者 刘保奎 董小曼 《微生物学免疫学进展》 2006年第3期23-26,共4页

为了验证ELISA法对病毒性疫苗中残余牛血清蛋白检测的适用性,用牛血清蛋白ELISA测定法与牛血清白蛋白ELISA测定法、牛血清IgG-ELISA测定法对麻疹疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫苗洗涤前病毒培养液、洗涤后病毒收获液以及多种成品疫苗中的残... 为了验证ELISA法对病毒性疫苗中残余牛血清蛋白检测的适用性,用牛血清蛋白ELISA测定法与牛血清白蛋白ELISA测定法、牛血清IgG-ELISA测定法对麻疹疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫苗洗涤前病毒培养液、洗涤后病毒收获液以及多种成品疫苗中的残余牛血清蛋白含量进行了测定。结果显示,麻疹疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫苗洗涤前病毒培养液中牛血清白蛋白含量依次为IgG含量的70.5倍、65倍、84.3倍,洗涤后病毒收获液中两者比值分别为4.2、1.8和8.1;牛血清白蛋白ELISA法和牛血清蛋白ELISA法均能检测出疫苗中牛血清白蛋白,但前者测不出牛血清IgG,而后者可准确检测牛血清IgG。牛血清蛋白ELISA测定法可同时检测牛血清白蛋白和牛血清IgG,更适用于疫苗残余牛血清蛋白含量的测定。 展开更多

关键词 牛血清 ELISA 适用性

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检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制 被引量：5

5

作者 潘殊男 刘保奎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期54-57,共4页

目的　检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制。方法　将用于生产的 10批牛血清混合后 ,免疫家兔制备抗血清 ,以纯化抗牛血清兔IgG作为包被抗体、HRP 酶标抗体作为指标抗体 ,采用ELISA双抗体夹心法进行线性范围、精密度、准确度、特异... 目的　检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制。方法　将用于生产的 10批牛血清混合后 ,免疫家兔制备抗血清 ,以纯化抗牛血清兔IgG作为包被抗体、HRP 酶标抗体作为指标抗体 ,采用ELISA双抗体夹心法进行线性范围、精密度、准确度、特异性评价等一系列检测。结果　兔抗牛免疫血清双扩效价可达 1∶16 ,免疫血清、纯化抗体和酶标抗体均含有抗牛血清白蛋白及牛IgG等多种蛋白成分的抗体 ;检测疫苗中残余牛血清含量最佳线性范围为 0 78～ 2 5ng/ml,精密度 (回收率为 80 %～ 112 . 5 % ,CV为 2 . 5 %～ 9 0 % )和准确度 (回收率为 96 . 7%～112 . 5 % ,CV为 1. 4 %～ 9 .4 % )良好 ,检测限度为 1 5ng/ml,检测限量为 3ng/ml;与正常马、兔、豚鼠血清以及不同病毒性疫苗基质液均无交叉反应 ,可定量检测不同病毒性疫苗中的残余牛血清。结论　所制备的ELISA试剂特异性强 ,灵敏度高 ,重复性好 ,适用于常规疫苗中残余牛血清的检测。 展开更多

关键词 牛血清 ELISA试剂 疫苗 免疫血清 病毒性 酶标抗体 检测限 种蛋 基质 家兔

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检测百日咳毒素活性的中国仓鼠卵巢细胞簇集法的建立和初步应用 被引量：5

6

作者 张霖阳 潘殊男 +3 位作者 李世慧 徐鹤 周峻凯 肖詹蓉 《国际生物制品学杂志》 CAS 2013年第4期177-181,共5页

目的 建立检测百日咳毒素（pertussis toxin,PT）活性的中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞簇集法,并将建立的方法应用于无细胞百日咳疫苗生产的质量控制.方法 将PT标准品系列稀释后与培养的CHO细胞混合,观察PT引起CHO细胞... 目的 建立检测百日咳毒素（pertussis toxin,PT）活性的中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞簇集法,并将建立的方法应用于无细胞百日咳疫苗生产的质量控制.方法 将PT标准品系列稀释后与培养的CHO细胞混合,观察PT引起CHO细胞簇集的敏感度,并研究反应时间、反应溶液的pH值、缓冲液浓度、加样顺序等因素对PT引起CHO细胞簇集的影响.应用建立的方法检测百日咳疫苗生产过程中脱毒前后的PT活性及丝状血凝素和百日咳黏着素组分中残留的PT活性.结果 PT使CHO细胞发生最佳簇集的理想反应时间是24h,最适pH值是7～8,适宜氯化钠缓冲液浓度为0.15 mol/L,最优加样顺序是先加CHO细胞再加PT.建立的CHO细胞簇集法的检测敏感度为10pg/ml PT,且重复性良好.结论 CHO细胞簇集法可用于PT活性检测. 展开更多

关键词 CHO细胞 百日咳毒素 方法

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检测四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量ELISA法的建立 被引量：4

7

作者 肖詹蓉 潘殊男 +4 位作者 张霖阳 王宇星 史雨舟 李工 张萍 《微生物学免疫学进展》 2012年第4期29-33,共5页

目的建立双抗体夹心ELISA法,对A群流脑多糖抗原进行特异性定量测定。方法制备抗A群多糖的特异性多克隆抗体,所得抗血清经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记多克隆抗体。分别以抗A群多糖多克隆抗体作为包被抗... 目的建立双抗体夹心ELISA法,对A群流脑多糖抗原进行特异性定量测定。方法制备抗A群多糖的特异性多克隆抗体,所得抗血清经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记多克隆抗体。分别以抗A群多糖多克隆抗体作为包被抗体及酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对A群多糖抗原进行特异性定量测定。结果一系列验证试验表明,该法特异性较好,未检出与C、Y、W135群多糖的交叉反应;1.25～20 ng/mL多糖浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.98,经实验内10次及不同试验间以16、84、ng/mL测定3次A群多糖中的含量,变异系数在6.3%～11.5%间,回收率在91.8%～105.9%之间,符合常规质控要求,检测限量为4 ng/mL。采用该法测定3批ACYW135群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量、分子大小及回收率的结果均符合规程草案质量标准。结论建立的双抗体夹心ELISA法可尝试用于ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖的关键质量指标的检测。 展开更多

关键词 ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗 多糖含量 酶联免疫吸附试验

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第1代百日咳毒素国家参考品的标定 被引量：4

8

作者 卫辰 晁哲 +10 位作者 王丽婵 吴燕 张霖阳 潘殊男 方习静 张立志 刘翠 王魁 程之铭 骆鹏 马霄 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第8期853-857,共5页

目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞... 目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞簇集试验对4和37℃放置7、14、21、28 d的C1进行热加速稳定性检测,-20℃放置36个月的C1进行实时稳定性检测,将C1用不同稀释液(水、PBS、50%甘油)复溶,于4、-20、-80℃分别放置1、7及14 d,检测复溶稳定性。结果 C1经6个实验室的协作标定获得104个有效结果,最终确定候选参考品簇集活性为3 000 IU/支。C1的纯度、外观、水分、无菌、分装精度均合格,与JNIH-5的抗原抗体结合能力差异无统计学意义(P>0.05),具有良好的实时稳定性、热加速稳定性,C1经50%甘油复溶后2周内稳定性较好。结论该候选参考品符合国家参考品的各项要求,可用于百日咳毒素CHO簇集试验及组分百日咳疫苗原液抗原纯度、安全性和免疫原性的检测。 展开更多

关键词 百日咳毒素 CHO簇集试验 参考品

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检测百日咳毒素的双抗体夹心ELISA法的建立 被引量：4

9

作者 潘殊男 肖詹蓉 +5 位作者 张霖阳 史雨舟 简志华 王宇星 李世慧 张萍 《国际生物制品学杂志》 CAS 2012年第5期225-227,共3页

目的建立白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产中百日咳毒素（pertussistoxin，PT）含量的测定方法。方法免疫家兔制备高效价抗胛血清，纯化抗肼多克隆抗体并进行酶标记，建立双抗体夹心ELISA法并对其进行验证。结果建立的方法在0～20ng／m... 目的建立白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产中百日咳毒素（pertussistoxin，PT）含量的测定方法。方法免疫家兔制备高效价抗胛血清，纯化抗肼多克隆抗体并进行酶标记，建立双抗体夹心ELISA法并对其进行验证。结果建立的方法在0～20ng／mlPT测量区间呈现最佳线性，相关系数〉0．99，且重复性好。检测百日咳丝状血凝素和黏着素，结果均为阴性，说明该法特异性良好。试验内10次、不同试验问3次测定16．0、8．0、4．0、3．0ng／mlPT，变异系数为2．8％～9．7％，回收率为95．7％～106．O％，精密度和准确度验证均符合常规质量控制要求，定量限度为3．0ng／ml。结论该方法能有效检测百日咳杆菌大罐发酵过程中分泌的门，为门质量控制奠定了重要基础。 展开更多

关键词 百日咳毒素 酶联免疫吸附测定 方法

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无细胞百日咳疫苗中百日咳毒素活性检测方法的建立 被引量：4

10

作者 夏德菊 潘殊男 +5 位作者 杨云凯 周第 金萧 王珣 张萍 肖詹蓉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第12期1601-1606,共6页

目的建立检测无细胞百日咳疫苗（acellular pertussis vaccine,APV）中百日咳毒素（pertussis toxin,PT）活性的胎球蛋白结合试验ELISA方法。方法优化APV中PT残余含量的胎球蛋白结合试验ELISA检测方法,分析不同抗原稀释液对该方法的影响... 目的建立检测无细胞百日咳疫苗（acellular pertussis vaccine,APV）中百日咳毒素（pertussis toxin,PT）活性的胎球蛋白结合试验ELISA方法。方法优化APV中PT残余含量的胎球蛋白结合试验ELISA检测方法,分析不同抗原稀释液对该方法的影响,并对该方法进行线性、精密度、灵敏度、特异性验证。分析丝状血凝素（filamentous hemagglutinin,FHA）、百日咳黏着素（pertactin,Prn）、白喉类毒素（diphtheria toxoid,DT）、破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）在成品疫苗剂量时（即50μg/ml、16μg/ml、25 Lf/ml、7 Lf/ml）对PT与胎球蛋白结合的影响,确定疫苗解吸附条件,并对不同厂家的8批吸附无细胞百白破联合疫苗进行解析附后,检测PT含量,计算CV。结果在胎球蛋白包被浓度为5μg/ml时,使用p H 8.5含1%胎牛血清白蛋白（BSA）Tris缓冲液对样品进行稀释后,直接用酶标抗PT抗体进行检测,建立的胎球蛋白结合试验ELISA检测方法的剂量反应曲线线性良好（r均〉0.99）;试验内CV为13.74%-5.85%,试验间CV为2.75%-10.39%,灵敏度可达4 ng/ml,精密度好,灵敏度高;降低了PTd的干扰作用,特异性较好。FHA、Prn、DT、TT在成品疫苗剂量时对PT与胎球蛋白的结合无影响;确定疫苗解吸附条件为Tris-柠檬酸钠溶液（4%,w/v）（p H 8.5）;各批疫苗3次检测结果的CV值均符合要求,重复性较好。结论优化后的胎球蛋白结合试验ELISA检测方法可用于APV中残余PT含量的检测。 展开更多

关键词 无细胞百日咳疫苗 毒素 胎球蛋白 活性

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检测百日咳黏着素的酶联免疫吸附法的建立及初步应用 被引量：4

11

作者 王玲 潘殊男 +4 位作者 张霖阳 夏菊 王宇星 张萍 肖詹蓉 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第1期1-3,共3页

目的 建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中黏着素（pertactin,Prn）的方法.方法 纯化的Prn免疫家兔以制备高效价血清抗Prn抗体.辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗Prn多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记,建立双抗体夹心ELISA法.... 目的 建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中黏着素（pertactin,Prn）的方法.方法 纯化的Prn免疫家兔以制备高效价血清抗Prn抗体.辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗Prn多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记,建立双抗体夹心ELISA法.结果 建立的方法与丝状血凝素和百日咳毒素无交叉反应,特异性较好.该ELISA法在1.25 ～ 80.00μg/L Prn测量区间有最佳线性,相关系数＞0.99.实验内和实验间检测64.0、32.0、16.0 μg/L Prn,变异系数为2.6％～7.7％,回收率为84.9％～ 95.5％,精密度和准确度均符合常规质控要求,因此该法的定量限度为16.0 μg/L.结论 建立的ELISA法可有效检测百日咳疫苗纯化过程中的Prn含量,为组分百日咳疫苗质量控制奠定了重要基础. 展开更多

关键词 酶联免疫吸附测定 方法 百日咳黏着素

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ELISA法检测疫苗中残余牛血清蛋白含量的方法学验证 被引量：2

12

作者 董小曼 田博 +4 位作者 杨冰 潘殊男 栗妍 沈淑琴 王晋 《现代仪器》 2006年第6期21-25,共5页

为验证ELISA法检测病毒性疫苗中残余牛血清蛋白方法的可靠性,由2个部门对12个样品进行4人连续3天的验证.结果表明：4人连续3天的12次检测结果均满足牛血清白蛋白ELISA法（BSP-ELISA法）标准曲线成立的条件,建立合格标准曲线的成功率为10... 为验证ELISA法检测病毒性疫苗中残余牛血清蛋白方法的可靠性,由2个部门对12个样品进行4人连续3天的验证.结果表明：4人连续3天的12次检测结果均满足牛血清白蛋白ELISA法（BSP-ELISA法）标准曲线成立的条件,建立合格标准曲线的成功率为100%;对5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL浓度的牛血清白蛋白（BSP）标准品,不同实验人员间测定结果的变异系数在2.87%～6.33%之间,精密度较好;回收率在92.9%～103.1%之间,说明不同人的测定结果准确度高.分别采用该方法与已上市的牛血清白蛋白试剂盒对7种疫苗中100个样品的残余BSP含量进行检测,二者的检测结果合格符合率为100%,用该方法对已上市的检测BSA试剂盒中的4个标准品进行检测,回收率在90.0%～117.1%,检测灵敏度为2.5ng/mL,表明BSP-ELISA法可以敏感、准确地定量检测BSA,可用于目前我公司疫苗制品中残余牛血清白蛋白的质量控制. 展开更多

关键词 牛血清 BSA BSP ELISA 法学验证

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病毒性疫苗生产用牛血清及其疫苗中残余量的检测 被引量：3

13

作者 潘殊男 刘保奎 《微生物学免疫学进展》 2004年第4期77-81,共5页

本文介绍了牛血清的分类,牛血清中的主要蛋白成分及其在体外细胞培养中的作用,疫苗中残余牛血清的检测。

关键词 病毒性疫苗 牛血清 残余量

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疫苗用氢氧化铝佐剂质量标准的初步建立 被引量：3

14

作者 肖詹蓉 张娜 +7 位作者 潘殊男 杨溢尧 艾绪露 李彦涵 许文婷 孙宏亮 吴永林 杨明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第7期721-725,731,共6页

目的建立疫苗用氢氧化铝佐剂的质量标准。方法参照《欧洲药典》8.0和《中国药典》四部(2015版),选择5个实验室对6个厂家12批氢氧化铝佐剂样品同时进行17个理化项目的检测及分析,建立适合国内氢氧化铝佐剂的质量标准。结果初步建立了疫... 目的建立疫苗用氢氧化铝佐剂的质量标准。方法参照《欧洲药典》8.0和《中国药典》四部(2015版),选择5个实验室对6个厂家12批氢氧化铝佐剂样品同时进行17个理化项目的检测及分析,建立适合国内氢氧化铝佐剂的质量标准。结果初步建立了疫苗用氢氧化铝佐剂17项质量标准。经5个实验室检测,12批样品外观、溶解性能、鉴别试验、无菌、吸附率、硫酸盐含量、硝酸盐含量、铵盐含量、砷盐含量、铁盐含量、重金属含量、氯化钠含量、氯化物含量及细菌内毒素的结果均符合《欧洲药典》8. 0和《中国药典》四部(2015版)相关质量标准;而p H值、铝含量、沉降率检测结果不同厂家之间差异较大。结论建立了适合国内氢氧化铝佐剂的质量评价体系,为氢氧化铝佐剂的质量标准进入2015版《中国药典》增补版提供了方法细则和标准制定依据。 展开更多

关键词 疫苗 氢氧化铝 佐剂 质量标准

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检测破伤风类毒素的酶联免疫吸附法的建立及应用 被引量：2

15

作者 王玲 王珣 +6 位作者 韩俊杰 张建玲 杨云凯 张娜 佟芳 潘殊男 张霖阳 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第1期8-11,共4页

目的建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中破伤风类毒素（tetanustoxoid，TT）的方法。方法TT免疫家兔以制备高效价血清抗TT抗体。辛酸一硫酸铵沉淀法纯化抗TT多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记，建立双抗体夹心ELISA... 目的建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中破伤风类毒素（tetanustoxoid，TT）的方法。方法TT免疫家兔以制备高效价血清抗TT抗体。辛酸一硫酸铵沉淀法纯化抗TT多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记，建立双抗体夹心ELISA法。结果建立的ELISA法与丝状血凝素、百日咳毒素及白喉类毒素无交叉反应，特异性较好。该ELISA法在0．5～16．0Lf／LTT检测区间有最佳线性，决定系数〉0．99。实验内和实验间检测14．0、12．0、6．0、3．0和1．5Lf／LTT，变异系数为4．7％～9．8％，回收率为92．7％～109．0％，精密度和准确度均符合常规质控要求。该法的定量下限为1．5Lf／LTT。结论建立的ELISA法可有效检测破伤风疫苗纯化过程中的TT含量，为破伤风疫苗质量控制奠定了基础。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附测定 破伤风类毒素 方法

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检测百日咳抗原的系列酶免疫测定试剂盒的稳定性及其在百日咳疫苗生产中的应用 被引量：1

16

作者 潘殊男 张霖阳 +3 位作者 王玲 夏德菊 王宇星 肖詹蓉 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第6期272-275,共4页

目的 评估检测百日咳毒素（pertussis toxin,PT）、丝状血凝素（filamentous haemagglutinin,FHA）和黏着素（pertactin,Prn）的3种酶免疫测定试剂盒的稳定性及其在无细胞百日咳疫苗（acellular pertussis vaccine,aPV）生产质量控制中... 目的 评估检测百日咳毒素（pertussis toxin,PT）、丝状血凝素（filamentous haemagglutinin,FHA）和黏着素（pertactin,Prn）的3种酶免疫测定试剂盒的稳定性及其在无细胞百日咳疫苗（acellular pertussis vaccine,aPV）生产质量控制中的应用.方法 对3种酶免疫测定试剂盒进行热加速试验（37℃放置3 d）和长期稳定性试验（4℃放置6月）,根据试剂盒的标准曲线相关系数、最高浓度标准品与阴性对照的吸光度值之比（P/N）值、质控品回收率评估试剂盒的稳定性.将3种试剂盒用于aPV生产的发酵、纯化、吸附阶段的PT、FHA、Prn定量检测,以确定3种试剂盒对aPV生产质量控制的可行性.结果 3种酶免疫测定试剂盒的37℃热加速试验和4℃长期稳定性试验的各项质量参数均符合相关要求.采用试剂盒定量各生产阶段的百日咳抗原含量显示：百日咳杆菌的发酵终点在第42～46 h;各3批PT、FHA和Prn组分液的纯化回收率分别为49.24％、56.12％和63.65％,68.75％、55.60％和49.76％、75.73％、60.63％和50.10％.采用单独吸附的铝佐剂抗原吸附率高于采用混合吸附,但单独和混合吸附方式制备的疫苗的效力无差异.结论 检测PT、FHA和Prn的3种酶免疫测定试剂盒具有良好的稳定性,可用于aPV生产的质量控制. 展开更多

关键词 百日咳菌苗 免疫酶技术 质量控制

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疫苗用氢氧化铝佐剂的质量研究 被引量：1

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作者 张霖阳 王玲 +7 位作者 盛玉博 池俊 杜磊 李世慧 何亚丽 潘殊男 肖詹蓉 杨冰 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第6期274-278,共5页

目的 建立与国际标准一致的氢氧化铝佐剂的质量标准。方法 制备10批疫苗用氢氧化铝佐剂，按照中国药典2015年版进行外观、氯化钠含量、渗透压摩尔浓度、氢氧化铝含量、pH值的检测。参照欧洲药典第8版开展溶解度和内毒素含量检测，鉴... 目的 建立与国际标准一致的氢氧化铝佐剂的质量标准。方法 制备10批疫苗用氢氧化铝佐剂，按照中国药典2015年版进行外观、氯化钠含量、渗透压摩尔浓度、氢氧化铝含量、pH值的检测。参照欧洲药典第8版开展溶解度和内毒素含量检测，鉴别试验、沉降试验、无菌检查、牛血清白蛋白吸附力试验以及氯化物、硫酸盐、硝酸盐、铵盐、铁盐、砷盐、重金属等7项杂质13个检测项目的测定。参照丹麦铝佐剂对粒径、比表面积、等电点、黏度和抗原吸附率进行检测。对检定结果进行统计分析，初步确定与欧洲药典相关联的质量标准。结果 10批氢氧化铝佐剂的外观、无菌试验、内毒素含量、溶解度、鉴别试验、沉降试验、牛血清白蛋白吸附力、杂质和抗原吸附率的检测结果均合格。佐剂的氯化钠含量均值为1.01%，渗透压摩尔浓度均值为309 mOsmol/kg，氢氧化铝含量均值为4.7 mg/ml；佐剂灭菌前、后的pH值均值分别为6.3、5.8；佐剂的粒径DV50全部〈10 μm；平均比表面积为1 386 m^2/kg，等电点为10.3，黏度为1.2 mPa·s。检测结果均符合质控合格范围。结论 初步建立了符合欧洲药典第8版的氢氧化铝佐剂质量控制标准。 展开更多

关键词 疫苗 氢氧化铝 佐剂 免疫 质量控制

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脑膜炎球菌W135群多糖含量和分子大小双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量：1

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作者 潘殊男 肖詹蓉 +4 位作者 王宇星 张霖阳 史雨舟 孙芳芳 张萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1688-1691,1696,共5页

目的建立检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）多糖疫苗（Groups A,C,Y,W135 menig-nococcal polysaccharide vaccine,MPV4）中W135群多糖含量和分子大小的双抗体夹心ELISA法,并进行初步应用。方法以抗W135群Nm... 目的建立检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）多糖疫苗（Groups A,C,Y,W135 menig-nococcal polysaccharide vaccine,MPV4）中W135群多糖含量和分子大小的双抗体夹心ELISA法,并进行初步应用。方法以抗W135群Nm多克隆抗体作为包被抗体,建立双抗体夹心ELISA法,采用棋盘滴定法筛选包被抗体与酶标抗体的最佳工作浓度,对W135群Nm多糖进行特异性定量测定,并验证线性关系的重复性;对建立的ELISA法进行特异性、准确度、精密度及定量限的验证;采用建立的ELISA法检测10批W135群Nm多糖样品和10批无关流脑多糖样品,进行W135群Nm多糖的鉴别试验;采用建立的ELISA法测定MPV4多糖含量、多糖分子大小和回收率。结果经棋盘滴定法确定双抗体夹心ELISA法的最佳包被抗体工作浓度为10μg/ml,最佳酶标抗体工作浓度为1∶15 000稀释,W135群Nm多糖在2.5~20 ng/ml浓度范围内剂量反应曲线线性关系良好,相关系数大于0.99。采用建立的双抗体夹心ELISA法检测W135群Nm多糖为强阳性,检测其余样品的结果均为阴性;试验内及试验间测定16、8、4 ng/ml W135群Nm多糖含量的变异系数在1.1%~9.0%之间,回收率在87.5%~105.0%之间,定量限为4 ng/ml;检测W135群Nm多糖的阳性符合率和无关多糖的阴性符合率均为100%。采用该法测定3批MPV4中W135群多糖含量、分子大小及回收率均符合申报MPV4疫苗暂行规程关于W135群Nm多糖的质量标准。结论建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4中W135群多糖含量和分子大小的测定。 展开更多

关键词 脑膜炎球菌多糖疫苗 W135群 多糖 分子大小 酶联免疫吸附测定

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牛血清蛋白酶联免疫检测试剂盒的研制及验证 被引量：1

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作者 潘殊男 杨云凯 +2 位作者 杨冰 刘保奎 董小曼 《微生物学免疫学进展》 2008年第2期20-23,共4页

为研制酶联免疫试剂盒以检测病毒性疫苗中残余牛血清蛋白（BSP）含量，制备高效价高纯度的兔抗BSP多克隆抗体作为包被抗体和酶标抗体，建立了ELISA双抗体夹心法并组建试剂盒，通过标准剂量曲线可对样品中所含BSP、BSA及B-IgG进行定量，... 为研制酶联免疫试剂盒以检测病毒性疫苗中残余牛血清蛋白（BSP）含量，制备高效价高纯度的兔抗BSP多克隆抗体作为包被抗体和酶标抗体，建立了ELISA双抗体夹心法并组建试剂盒，通过标准剂量曲线可对样品中所含BSP、BSA及B-IgG进行定量，经验证该方法标准曲线线性范围内r≥0．98，对BSP的检测限量为3ng／ml；分别检测5、10、20ne／ml含量的BSP时，试验内（n=12）和试验间（n=3）测定的变异系数在3．71％到7．29％之间，回收率在93．4％-106．3％，未见该方法与人血清白蛋白、卵清蛋白以及疫苗复合保护剂之间有交叉反应。该法敏感度高，准确性、重复性和稳定性好，可用于疫苗牛血清残余蛋白的质量控制。 展开更多

关键词 牛血清蛋白 试剂盒

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检测脑膜炎球菌多糖疫苗Y群多糖含量和分子大小的双抗体夹心ELISA法的建立和初步应用

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作者 肖詹蓉 潘殊男 +4 位作者 王宇星 张霖阳 王玲 史雨舟 张萍 《国际生物制品学杂志》 CAS 2012年第5期228-232,共5页

目的建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗（groupsA，C，Y，W135meningococ—calpolysaccharidevaccine，MPV4）Y群多糖含量的双抗体夹心ELISA法。方法采用杂交瘤技术制备抗Y群多糖单克隆抗体，并通过过碘酸钠法用辣根过氧化物... 目的建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗（groupsA，C，Y，W135meningococ—calpolysaccharidevaccine，MPV4）Y群多糖含量的双抗体夹心ELISA法。方法采用杂交瘤技术制备抗Y群多糖单克隆抗体，并通过过碘酸钠法用辣根过氧化物酶标记单克隆抗体。分别以抗Y群多糖不同位点的单克隆抗体作为包被抗体和酶标二抗，通过优化反应条件来建立双抗体夹心ELISA法，同时进行方法学验证。结果建立的双抗体夹心ELISA法特异性良好，未检出与A、C、W135群多糖的交叉反应。Y群多糖在2．5～20．0ng／ml范围的剂量反应曲线呈现最佳线性关系，相关系数〉0．99。该法的试验内和试验间准确度较好，精密度较佳，定量限度为4ng／ml。采用该法测定3批MPV4Y群多糖显示，Y群多糖的含量、多糖分子大小‰值和回收率的结果均与先前的检定结果一致，符合暂行质量标准。结论建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4Y群多糖的关键质量指标测定。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附测定 脑膜炎双球菌菌苗 多糖类 细菌 方法

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