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与Rab2互作布鲁菌株效应蛋白HSP70的鉴定
被引量：
4
1
作者
崔桂梅
魏盼
+3 位作者
赵玉玺
潘
垒
昌
徐晓晗
彭其胜
《扬州大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期6-10,共5页
以Rab2作为诱饵钓取布鲁菌效应蛋白,通过RT-PCR获得鼠Rab2基因,利用基因克隆方法构建表达载体pGEX-4T-1-Rab2及其2个突变体pGEX-4T-1-Rab2[N119I]和pGEX-4T-1-Rab2[Q65L];然后IPTG诱导GST-Rab2、GST-Rab2[N119I]和GST-Rab2[Q65L]融合蛋...
以Rab2作为诱饵钓取布鲁菌效应蛋白,通过RT-PCR获得鼠Rab2基因,利用基因克隆方法构建表达载体pGEX-4T-1-Rab2及其2个突变体pGEX-4T-1-Rab2[N119I]和pGEX-4T-1-Rab2[Q65L];然后IPTG诱导GST-Rab2、GST-Rab2[N119I]和GST-Rab2[Q65L]融合蛋白的表达,使用琼脂糖亲和介质分离纯化融合蛋白;最后将纯化的融合蛋白与超声破碎的野生布鲁菌或Δvirb2缺失布鲁菌株上清互作,利用SDS-PAGE电泳和银染确定差异蛋白,质谱分析差异蛋白。结果表明:所鉴定出的布鲁菌株效应蛋白为热休克蛋白HSP70。这为未来研究HSP70如何调节布鲁菌胞内寄生奠定基础。
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关键词
布鲁菌
Rab2
效应蛋白
HSP70
下载PDF
职称材料
表达锌指蛋白A20的巨噬细胞J774A.1模型的构建
被引量：
1
2
作者
赵玉玺
崔桂梅
+3 位作者
潘
垒
昌
魏盼
徐晓晗
彭其胜
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期411-414,421,共5页
为了研究布鲁菌感染机体后锌指蛋白A20调节天然免疫的机制,我们尝试构建A20表达的巨噬细胞模型。通过分子生物学手段构建表达A20的慢病毒;Western blot检测A20的表达;以内毒素(LPS)刺激细胞,Western blot检测IκB-α降解变化且ELISA检...
为了研究布鲁菌感染机体后锌指蛋白A20调节天然免疫的机制,我们尝试构建A20表达的巨噬细胞模型。通过分子生物学手段构建表达A20的慢病毒;Western blot检测A20的表达;以内毒素(LPS)刺激细胞,Western blot检测IκB-α降解变化且ELISA检测炎性细胞因子TNF-α及IL-6的水平来判定A20表达细胞模型是否成功。限制性内切酶酶切鉴定、DNA测序及慢病毒包装试验表明A20重组慢病毒构建成功;Western blot证实感染J774A.1后A20蛋白表达明显增加;A20表达的J774A.1受到LPS刺激后IκB-α未发生降解,TNF-α及IL-6水平明显低于空载体及空白对照组(P<0.01)。结果表明,本研究成功构建了A20表达的巨噬细胞模型。
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关键词
A20
巨噬细胞
模型
布鲁菌
原文传递
题名
与Rab2互作布鲁菌株效应蛋白HSP70的鉴定
被引量：
4
1
作者
崔桂梅
魏盼
赵玉玺
潘
垒
昌
徐晓晗
彭其胜
机构
吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室
出处
《扬州大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期6-10,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(31372409)
文摘
以Rab2作为诱饵钓取布鲁菌效应蛋白,通过RT-PCR获得鼠Rab2基因,利用基因克隆方法构建表达载体pGEX-4T-1-Rab2及其2个突变体pGEX-4T-1-Rab2[N119I]和pGEX-4T-1-Rab2[Q65L];然后IPTG诱导GST-Rab2、GST-Rab2[N119I]和GST-Rab2[Q65L]融合蛋白的表达,使用琼脂糖亲和介质分离纯化融合蛋白;最后将纯化的融合蛋白与超声破碎的野生布鲁菌或Δvirb2缺失布鲁菌株上清互作,利用SDS-PAGE电泳和银染确定差异蛋白,质谱分析差异蛋白。结果表明:所鉴定出的布鲁菌株效应蛋白为热休克蛋白HSP70。这为未来研究HSP70如何调节布鲁菌胞内寄生奠定基础。
关键词
布鲁菌
Rab2
效应蛋白
HSP70
Keywords
Brucella
Rab2
effeetors
HSP70
分类号
S855.12 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
表达锌指蛋白A20的巨噬细胞J774A.1模型的构建
被引量：
1
2
作者
赵玉玺
崔桂梅
潘
垒
昌
魏盼
徐晓晗
彭其胜
机构
吉林大学人兽共患病研究所教育部人兽共患病研究重点实验室
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期411-414,421,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(31372409)
文摘
为了研究布鲁菌感染机体后锌指蛋白A20调节天然免疫的机制,我们尝试构建A20表达的巨噬细胞模型。通过分子生物学手段构建表达A20的慢病毒;Western blot检测A20的表达;以内毒素(LPS)刺激细胞,Western blot检测IκB-α降解变化且ELISA检测炎性细胞因子TNF-α及IL-6的水平来判定A20表达细胞模型是否成功。限制性内切酶酶切鉴定、DNA测序及慢病毒包装试验表明A20重组慢病毒构建成功;Western blot证实感染J774A.1后A20蛋白表达明显增加;A20表达的J774A.1受到LPS刺激后IκB-α未发生降解,TNF-α及IL-6水平明显低于空载体及空白对照组(P<0.01)。结果表明,本研究成功构建了A20表达的巨噬细胞模型。
关键词
A20
巨噬细胞
模型
布鲁菌
Keywords
A20
macrophage
model
Brucella
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
与Rab2互作布鲁菌株效应蛋白HSP70的鉴定
崔桂梅
魏盼
赵玉玺
潘
垒
昌
徐晓晗
彭其胜
《扬州大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014
4
下载PDF
职称材料
2
表达锌指蛋白A20的巨噬细胞J774A.1模型的构建
赵玉玺
崔桂梅
潘
垒
昌
魏盼
徐晓晗
彭其胜
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
原文传递
已选择
0
条
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引证文献
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