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转录组分析毛白杨响应氧化胁迫的基因表达模式变化 被引量:1
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作者 李嘉鑫 李盈 +3 位作者 李聪慧 李慧 陆海 《植物学研究》 2018年第2期186-195,共10页
为了了解基因水平上毛白杨对于适应氧化胁迫的分子机制,本研究在氧化胁迫下对毛白杨叶片进行转录组测序分析,将有显著性差异的基因做GO功能及KEGG Pathway的富集分析,分析差异表达基因得出,胁迫与未胁迫毛白杨组之间的总表达基因数为34... 为了了解基因水平上毛白杨对于适应氧化胁迫的分子机制,本研究在氧化胁迫下对毛白杨叶片进行转录组测序分析,将有显著性差异的基因做GO功能及KEGG Pathway的富集分析,分析差异表达基因得出,胁迫与未胁迫毛白杨组之间的总表达基因数为3495,其中上调基因个数为1683,下调基因个数为1812。通过比较胁迫与未胁迫毛白杨组之间的go功能和KEGG分析得出,氧化胁迫后的植株中,与光合作用中光系统I,光系统Ⅱ相关蛋白均显著性下调。与光合膜,类囊体膜结构中基粒的堆积和膜重组相关蛋白均显著性下调(P <0.05)。说明氧化应激条件下,叶绿体是活性氧的主要产生部位。ROS的大量积累使叶绿体及细胞产生氧化损伤,导致光合作用相关功能下降,光合膜系统受到损伤。 展开更多
关键词 毛白杨 氧化胁迫 光合作用 转录组
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毛果杨漆酶基因PtrLAC-2的原核表达与多克隆抗体制备研究
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作者 李盈 李嘉鑫 +6 位作者 程子义 尹玢 张永卓 陆海 李慧 《植物学研究》 2018年第2期177-185,共9页
目的:克隆毛果杨漆酶基因PtrLAC-2,并对其进行原核表达,同时制备高特异性、高效价的PtrLAC-2多克隆抗体,为研究漆酶基因蛋白在体外结构与功能奠定基础。方法:利用拟南芥中的漆酶基因序列对毛果杨基因组数据库进行同源检索,PCR同源克隆... 目的:克隆毛果杨漆酶基因PtrLAC-2,并对其进行原核表达,同时制备高特异性、高效价的PtrLAC-2多克隆抗体,为研究漆酶基因蛋白在体外结构与功能奠定基础。方法:利用拟南芥中的漆酶基因序列对毛果杨基因组数据库进行同源检索,PCR同源克隆并扩增得到毛果杨PtrLAC-2基因序列,将其亚克隆到pET30a(+)载体得到PtrLAC-2-pET30a(+)原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达并纯化得到PtrLAC-2重组蛋白。采用皮下免疫法将纯化的PtrLAC-2蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,用ELISA和Western blot检测血清多克隆抗体的效价和特异性。结果:克隆获得了毛果杨漆酶基因的序列(命名PtrLAC-2,基因登录号XP_002308164),成功构建了PtrLAC-2-pET30a(+)原核表达载体,诱导表达获得了62 KDa的重组蛋白,ELISA检测显示抗体效价达1:102,400,经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性检测毛果杨中的PtrLAC-2蛋白。结论:毛果杨漆酶PtrLAC-2基因可以在体外成功进行原核表达,同时获得了高特异性、高效价的兔抗PtrLAC-2多克隆抗体,为后续研究该酶生化功能提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 毛果杨 漆酶 基因克隆 原核表达 多克隆抗体
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