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维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达
被引量：
7
1
作者
翟新新
温
振
才
+6 位作者
沈雪飞
孙真
贾生美
张俊辉
王文东
杨
振
国
卢强
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014年第7期40-43,共4页
本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性。根据GenBank公布的序列设计1对引物,经PCR扩增获得flaA基因的完整开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL...
本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性。根据GenBank公布的序列设计1对引物,经PCR扩增获得flaA基因的完整开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化。SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌成功表达,约在38ku处可见清晰的表达产物,诱导产物大小与理论值相符。经Western blotting检测,结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体和His-tag抗体发生免疫反应。因此,本试验成功表达了维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,为进一步研究其生物学功能及免疫佐剂作用奠定了基础。
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关键词
维氏气单胞菌
鞭毛蛋白
克隆
表达
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职称材料
嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB的克隆、表达及其免疫原性分析
被引量：
1
2
作者
沈雪飞
翟新新
+3 位作者
温
振
才
孙真
贾生美
卢强
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期199-202,共4页
目的克隆、表达及纯化嗜水气单胞菌鞭毛FlaB蛋白,比较了它与天然鞭毛蛋白的抗原性,为以后鱼类弧菌病的防治及其疫苗的制备奠定了基础。方法利用PCR扩增出嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB,经确定后将该基因克隆到原核表达载体pET-30a中,在...
目的克隆、表达及纯化嗜水气单胞菌鞭毛FlaB蛋白,比较了它与天然鞭毛蛋白的抗原性,为以后鱼类弧菌病的防治及其疫苗的制备奠定了基础。方法利用PCR扩增出嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB,经确定后将该基因克隆到原核表达载体pET-30a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达,并用电洗脱法对表达的蛋白进行纯化,用纯化的重组蛋白免疫家兔制备抗血清,并进行Western-blot分析。结果嗜水气单胞菌鞭毛蛋白flaB基因全长912bp,编码303个氨基酸,预测分子量为32kDa,Western-blot结果表明兔抗FlaB血清不仅能与重组鞭毛蛋白发生反应,而且能与天然鞭毛蛋白发生反应。结论鞭毛蛋白FlaB可能是嗜水气单胞菌的重要保护抗原之一,为下一步疫苗的制备奠定了基础。
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关键词
嗜水气单胞菌
鞭毛
蛋白
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职称材料
鲤鱼诱导型一氧化氮合成酶全长cDNA克隆及其在外周血白细胞中的差异表达分析
3
作者
温
振
才
曹津津
卢强
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第5期1133-1139,共7页
试验旨在获得鲤鱼诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)cDNA全长序列,并以此为基础探讨在丝裂原刺激下外周血白细胞中iNOS的表达变化。以从鲤鱼正常外周血白细胞cDNA文库中获得的iNOS的EST序列为基础,采用基因...
试验旨在获得鲤鱼诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)cDNA全长序列,并以此为基础探讨在丝裂原刺激下外周血白细胞中iNOS的表达变化。以从鲤鱼正常外周血白细胞cDNA文库中获得的iNOS的EST序列为基础,采用基因文库筛选和cDNA 5′末端快速扩增技术(5′-RACE)相结合的方法,成功扩增出鲤鱼iNOS cDNA全长序列,然后进行鲤鱼外周血白细胞原代培养,分成对照组和试验组,其中试验组分别为脂多糖(LPS,1.0μg/mL)刺激4、12h,刀豆蛋白A(ConA,1.0μg/mL)刺激4、24h,对照组为相同培养时间无丝裂原刺激的外周血白细胞,根据得到的iNOS cDNA全长序列和鲤鱼β-actin序列分别设计特异性引物,应用实时荧光定量PCR方法检测各组外周血白细胞中iNOS在mRNA水平上的表达情况并进行分析。序列分析结果显示,最后获得的cDNA片段共3 704bp,包含74bp的5′端非编码区,246bp的3′端非编码区,一个3 384bp的完整的开放阅读框(ORF),共编码1 127个氨基酸。序列同源性分析结果显示,该序列与鲫鱼iNOS基因同源性高达100%;实时荧光定量PCR结果显示,经LPS、ConA刺激的试验组外周血白细胞中iNOS表达量均升高,且短时间(4h)刺激的表达量高于长时间(LPS 12h;ConA 24h)刺激的表达量。综上所述,在LPS、ConA刺激过程中,iNOS在外周血白细胞中表达量均有上调,结果提示存在炎症反应的动态变化。
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关键词
鲤鱼
iNOS
CDNA克隆
外周血白细胞
差异表达分析
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职称材料
立墩滑坡群滑坡机理分析
4
作者
温
振
才
《四川建材》
2015年第5期91-91,94,共2页
近年来,滑坡灾害发生频率呈现增加的趋势,受地层岩性、气候水文、地质构造、地形地貌等的综合影响,滑坡已成为国内主要灾害之一。其主要特点是分布广泛、规模较小,以土质为主、发生频率高、突发性强、危害性大,大部分与人类工程活动有关...
近年来,滑坡灾害发生频率呈现增加的趋势,受地层岩性、气候水文、地质构造、地形地貌等的综合影响,滑坡已成为国内主要灾害之一。其主要特点是分布广泛、规模较小,以土质为主、发生频率高、突发性强、危害性大,大部分与人类工程活动有关;而且滑坡并不是孤立发生或存在的,往往以点、群形式发生,形成灾害体系或者灾害链,在降雨量异常区出现区域性与群发性地质灾害。所以,对滑坡灾害机理进行研究以防治滑坡灾害的发生具有指导意义。
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关键词
立墩
滑坡群
机理
研究
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职称材料
题名
维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达
被引量：
7
1
作者
翟新新
温
振
才
沈雪飞
孙真
贾生美
张俊辉
王文东
杨
振
国
卢强
机构
吉林大学人兽共患病研究所
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014年第7期40-43,共4页
基金
国家自然科学基金(30972277)
文摘
本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性。根据GenBank公布的序列设计1对引物,经PCR扩增获得flaA基因的完整开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化。SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌成功表达,约在38ku处可见清晰的表达产物,诱导产物大小与理论值相符。经Western blotting检测,结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体和His-tag抗体发生免疫反应。因此,本试验成功表达了维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,为进一步研究其生物学功能及免疫佐剂作用奠定了基础。
关键词
维氏气单胞菌
鞭毛蛋白
克隆
表达
Keywords
Aerornonas veronii
flagellin
cloning
expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB的克隆、表达及其免疫原性分析
被引量：
1
2
作者
沈雪飞
翟新新
温
振
才
孙真
贾生美
卢强
机构
吉林大学人兽共患病研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期199-202,共4页
基金
国家自然科学基金项目(30972277)
吉林大学基本科研业务费项目(200903250)~~
文摘
目的克隆、表达及纯化嗜水气单胞菌鞭毛FlaB蛋白,比较了它与天然鞭毛蛋白的抗原性,为以后鱼类弧菌病的防治及其疫苗的制备奠定了基础。方法利用PCR扩增出嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB,经确定后将该基因克隆到原核表达载体pET-30a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达,并用电洗脱法对表达的蛋白进行纯化,用纯化的重组蛋白免疫家兔制备抗血清,并进行Western-blot分析。结果嗜水气单胞菌鞭毛蛋白flaB基因全长912bp,编码303个氨基酸,预测分子量为32kDa,Western-blot结果表明兔抗FlaB血清不仅能与重组鞭毛蛋白发生反应,而且能与天然鞭毛蛋白发生反应。结论鞭毛蛋白FlaB可能是嗜水气单胞菌的重要保护抗原之一,为下一步疫苗的制备奠定了基础。
关键词
嗜水气单胞菌
鞭毛
蛋白
Keywords
Aeromonas hydrophila
flagellar
protein
分类号
R378.3 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
鲤鱼诱导型一氧化氮合成酶全长cDNA克隆及其在外周血白细胞中的差异表达分析
3
作者
温
振
才
曹津津
卢强
机构
吉林大学人兽共患病研究所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第5期1133-1139,共7页
基金
国家自然科学基金项目(30972277)
文摘
试验旨在获得鲤鱼诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)cDNA全长序列,并以此为基础探讨在丝裂原刺激下外周血白细胞中iNOS的表达变化。以从鲤鱼正常外周血白细胞cDNA文库中获得的iNOS的EST序列为基础,采用基因文库筛选和cDNA 5′末端快速扩增技术(5′-RACE)相结合的方法,成功扩增出鲤鱼iNOS cDNA全长序列,然后进行鲤鱼外周血白细胞原代培养,分成对照组和试验组,其中试验组分别为脂多糖(LPS,1.0μg/mL)刺激4、12h,刀豆蛋白A(ConA,1.0μg/mL)刺激4、24h,对照组为相同培养时间无丝裂原刺激的外周血白细胞,根据得到的iNOS cDNA全长序列和鲤鱼β-actin序列分别设计特异性引物,应用实时荧光定量PCR方法检测各组外周血白细胞中iNOS在mRNA水平上的表达情况并进行分析。序列分析结果显示,最后获得的cDNA片段共3 704bp,包含74bp的5′端非编码区,246bp的3′端非编码区,一个3 384bp的完整的开放阅读框(ORF),共编码1 127个氨基酸。序列同源性分析结果显示,该序列与鲫鱼iNOS基因同源性高达100%;实时荧光定量PCR结果显示,经LPS、ConA刺激的试验组外周血白细胞中iNOS表达量均升高,且短时间(4h)刺激的表达量高于长时间(LPS 12h;ConA 24h)刺激的表达量。综上所述,在LPS、ConA刺激过程中,iNOS在外周血白细胞中表达量均有上调,结果提示存在炎症反应的动态变化。
关键词
鲤鱼
iNOS
CDNA克隆
外周血白细胞
差异表达分析
Keywords
Cyprinus carpio
iNOS
cDNA clones
peripheral blood leukocytes
differential expression analysis
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
立墩滑坡群滑坡机理分析
4
作者
温
振
才
机构
青岛平建建筑安装股份有限公司
出处
《四川建材》
2015年第5期91-91,94,共2页
文摘
近年来,滑坡灾害发生频率呈现增加的趋势,受地层岩性、气候水文、地质构造、地形地貌等的综合影响,滑坡已成为国内主要灾害之一。其主要特点是分布广泛、规模较小,以土质为主、发生频率高、突发性强、危害性大,大部分与人类工程活动有关;而且滑坡并不是孤立发生或存在的,往往以点、群形式发生,形成灾害体系或者灾害链,在降雨量异常区出现区域性与群发性地质灾害。所以,对滑坡灾害机理进行研究以防治滑坡灾害的发生具有指导意义。
关键词
立墩
滑坡群
机理
研究
分类号
U416.163 [交通运输工程—道路与铁道工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达
翟新新
温
振
才
沈雪飞
孙真
贾生美
张俊辉
王文东
杨
振
国
卢强
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014
7
下载PDF
职称材料
2
嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB的克隆、表达及其免疫原性分析
沈雪飞
翟新新
温
振
才
孙真
贾生美
卢强
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
下载PDF
职称材料
3
鲤鱼诱导型一氧化氮合成酶全长cDNA克隆及其在外周血白细胞中的差异表达分析
温
振
才
曹津津
卢强
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016
0
下载PDF
职称材料
4
立墩滑坡群滑坡机理分析
温
振
才
《四川建材》
2015
0
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职称材料
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