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添加扩增内标的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-IAC)检测创伤弧菌 被引量:7
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作者 李伟 庄濠宇 +3 位作者 温尔英 张峥嵘 黄琦容 周广彪 《检验检疫学刊》 2019年第3期5-8,共4页
根据编码创伤弧菌的基因保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)特异性引物,以β-actin基因为内标基因,创伤弧菌gryB基因为目标基因的RPA-IAC的检测方法。37℃,恒温40min,扩增得到234bp的特异性条带及334bp的扩增内标片段,检测限可达到0.1... 根据编码创伤弧菌的基因保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)特异性引物,以β-actin基因为内标基因,创伤弧菌gryB基因为目标基因的RPA-IAC的检测方法。37℃,恒温40min,扩增得到234bp的特异性条带及334bp的扩增内标片段,检测限可达到0.1ng/μL。方法特异性及应用测试结果均与普通PCR方法相当,特别适用于基层和现场检测。 展开更多
关键词 创伤弧菌 重组酶聚合酶扩增技术 扩增内标
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高通量测序技术在海关监管中的应用概述 被引量:1
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作者 陈莉 郑耿东 +4 位作者 周广彪 周连柱 张峥嵘 温尔英 利光辉 《质量安全与检验检测》 2023年第6期61-66,共6页
高通量测序技术被称为新一代测序技术,能够对大量核酸分子进行平行序列测定,具有高效、准确的特点。该技术利用大规模平行信号和焦磷酸测序法,可以同时对数百万个短序列读长进行测序,高通量测序技术的应用日趋广泛和成熟,给不同领域带... 高通量测序技术被称为新一代测序技术,能够对大量核酸分子进行平行序列测定,具有高效、准确的特点。该技术利用大规模平行信号和焦磷酸测序法,可以同时对数百万个短序列读长进行测序,高通量测序技术的应用日趋广泛和成熟,给不同领域带来深刻影响乃至巨大变革。本文通过综述高通量测序的发展历程及测序原理,总结其在动物检疫、植物检疫、卫生检疫和食品微生物检疫4个领域的应用情况,展现高通量测序技术为海关检验检疫带来的最新成果,探讨高通量测序技术在检验检疫方面应用的新思路,也可为今后的相关研究提供理论基础及借鉴资料。 展开更多
关键词 高通量测序 检验检疫 动物医学
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海水弧菌三重重组聚合酶扩增技术(RPA)检测方法的建立 被引量:3
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作者 温尔英 郑耿东 +3 位作者 陈文婉 霍伟峰 张会军 周广彪 《中国口岸科学技术》 2020年第10期35-39,共5页
本研究基于霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌的保守基因序列,设计引物并建立相应弧菌的RPA三重检测方法,测试方法的特异性和灵敏度,再进行应用效果测试。结果显示,建立的RPA三重检测方法能够检出三种对应的特异性目标基因片段,仅需恒温37... 本研究基于霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌的保守基因序列,设计引物并建立相应弧菌的RPA三重检测方法,测试方法的特异性和灵敏度,再进行应用效果测试。结果显示,建立的RPA三重检测方法能够检出三种对应的特异性目标基因片段,仅需恒温37℃反应30 min,不需要特殊的仪器设备,灵敏度可达到10-1 ng/μl,应用检测结果也表明该方法与传统培养方法相当。综上所述,本研究建立的三重RPA检测方法可同时检测霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌,具有特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室快速检测等显著技术和应用优势。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增 拟态弧菌 创伤弧菌 霍乱弧菌 实验室检测
原文传递
利用添加扩增内标的重组酶聚合酶法检测霍乱弧菌 被引量:1
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作者 庄濠宇 李伟 +4 位作者 李窕妍 张峥嵘 温尔英 陈冬娥 周广彪 《检验检疫学刊》 2019年第5期1-5,共5页
本文根据霍乱弧菌的ompW基因的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)特异性引物,构建添加β-action基因为扩增内标的霍乱弧菌RPA-IAC检测方法。从扩增中可得到280 bp的目标基因片段和337 bp的扩增内标片段,该方法特异性良好,检测限与普通... 本文根据霍乱弧菌的ompW基因的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)特异性引物,构建添加β-action基因为扩增内标的霍乱弧菌RPA-IAC检测方法。从扩增中可得到280 bp的目标基因片段和337 bp的扩增内标片段,该方法特异性良好,检测限与普通PCR一致,灵敏度均可达到0.1 ng/μL。该方法应用测试效果与传统培养方法相当,恒温37℃,40 min即可完成反应,检测效率高,适用于基层及现场检测。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 重组酶聚合酶扩增 扩增内标
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Quick Gene-810型自动核酸提取仪在转基因大豆检测中的应用研究 被引量:1
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作者 周广彪 蔡颖 +1 位作者 陈文婉 温尔英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期434-437,共4页
分别使用Quick Gene-810型自动核酸提取仪法和手工试剂盒法,提取0.1%~100%梯度的转基因大豆GTS-40-3-2和非转基因大豆的DNA。使用核酸蛋白分析仪检测DNA浓度和纯度,荧光定量PCR扩增大豆内源Lectin基因和转基因大豆GTS-40—3-2结... 分别使用Quick Gene-810型自动核酸提取仪法和手工试剂盒法,提取0.1%~100%梯度的转基因大豆GTS-40-3-2和非转基因大豆的DNA。使用核酸蛋白分析仪检测DNA浓度和纯度,荧光定量PCR扩增大豆内源Lectin基因和转基因大豆GTS-40—3-2结构特异性基因,对比Quick Gene-810型自动核酸提取仪与手工方法的DNA提取效果。并用Quick Gene-810型自动核酸提取仪法提取100份大豆样本DNA进行稳定性评价。结果表明:自动核酸提取仪法耗时短、成功率较高、稳定性良好,所得DNA的浓度和A260/A280比值均明显高于手工试剂盒法(P〈0.001),荧光定量PCR扩增大豆内源Lectin基因的Ct值高于手工试剂盒法(P〈0.001),但转基因大豆GTS-40-3-2结构特异性基因Ct值差别不明显(P=0.540)。 展开更多
关键词 核酸提取仪 转基因大豆 检测
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纺织品中多种有机磷酸酯化合物的GC/MS法测定
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作者 林殷 温尔英 +1 位作者 苏思杰 王璨 《印染》 北大核心 2018年第3期54-57,共4页
建立了同时检测纺织品材料中11种有机磷酸酯化合物(OPEs)的方法。通过正交试验,确定了以20 m L丙酮萃取30 min的超声萃取条件。纺织品样品中的OPEs经超声萃取后,采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行分析。结果表明,该方法中11种OPEs的... 建立了同时检测纺织品材料中11种有机磷酸酯化合物(OPEs)的方法。通过正交试验,确定了以20 m L丙酮萃取30 min的超声萃取条件。纺织品样品中的OPEs经超声萃取后,采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行分析。结果表明,该方法中11种OPEs的线性相关系数为0.999 3~0.999 9,检出限为0.2~1.2 mg/kg,加标回收率为81.2%~104.2%,相对标准偏差(RSD)为2.8%~9.7%。本方法操作简便,检测效率、准确度高,精密度、回收率理想,适合用于多种纺织品材料中有机磷酸酯化合物的检测。 展开更多
关键词 测试 有机磷酸酯 超声萃取 气相色谱法 质谱法 纺织品
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锦鲤疱疹病毒胸苷激酶基因的生物信息学分析
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作者 陈莉 周广彪 +4 位作者 郑耿东 温尔英 陈文婉 吴松浩 利光辉 《安徽农业科学》 CAS 2023年第16期90-94,共5页
[目的]探究锦鲤疱疹病毒胸苷激酶(Thymidine Kinase,TK)基因编码蛋白的生物学特性及结构功能特征。[方法]采用生物信息学软件对胸苷激酶蛋白的理化性质、亲/疏水性、结构域及二级结构和三级结构进行预测分析。[结果]TK蛋白编码224个氨基... [目的]探究锦鲤疱疹病毒胸苷激酶(Thymidine Kinase,TK)基因编码蛋白的生物学特性及结构功能特征。[方法]采用生物信息学软件对胸苷激酶蛋白的理化性质、亲/疏水性、结构域及二级结构和三级结构进行预测分析。[结果]TK蛋白编码224个氨基酸,不稳定系数较大,属于不稳定蛋白;且该蛋白不含有信号肽及跨膜结构,位于膜外;结构域位于2-175氨基酸残基区域,与其他病毒氨基酸序列比对分析,锦鲤疱疹病毒TK基因与鲤科疱疹病毒亲缘关系较近。[结论]对锦鲤疱疹病毒TK基因的分析,为深入研究锦鲤疱疹病毒的特性及分子机制,采取更有效的精准防控措施提供了基础保障,也为下一步的研究计划提供了方向。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 胸苷激酶 生物信息学
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