稳定表达BCR／ABL的小鼠BaF3-P210细胞株的建立及其生物学特性的研究 被引量：11

1

作者 史梦 冯文莉 +8 位作者 张文萍 王小中 黄世锋 曾建明 温健萍 陶昆 陈新敏 曹唯希 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期1791-1794,共4页

目的构建能稳定表达BCR/ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr/abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR/ABL的转基因BaF3-P... 目的构建能稳定表达BCR/ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr/abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR/ABL的转基因BaF3-P210细胞。用PCR、DNA测序、RT-PCR和Westernblot检测bcr/abl基因在靶细胞中的整合和表达;用台盼蓝细胞计数法、流式细胞仪(FCM)和MTT法研究BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。结果bcr/abl基因整合在BaF3细胞基因组中,BaF3-P210细胞能稳定表达bcr/abl基因及其蛋白。与对照组相比,BaF3-P210细胞增殖速度增快(P<0.05);G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞比例增高(P<0.05);经STI571处理后的细胞增殖抑制率为(54.08±1.90)%(P<0.05),早期凋亡率为(12.35±2.04)%(P<0.05)。结论成功构建的能稳定表达BCR/ABL的小鼠BaF3-P210转化细胞株具有增殖能力增强、细胞周期进程加速和对STI571敏感的恶性表型特征。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 BCR/ABL融合基因 逆转录病毒载体 BaF3细胞

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HFMC在体外对精子功能和结构的影响 被引量：5

2

作者 温健萍 罗自强 徐若璞 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 1989年第2期119-123,共5页

体外实验发现:HFMC能够全面抑制人精子的运动能力、穿透牛宫颈粘液的能力和穿透去透明带金黄地鼠卵的能力,随HFMC剂量增加或HFMC与精子作用时间延长,抑制作用增强;HFMC主要损伤精子的膜性结构。推测HFMC的这些作用可能是它在体内抗生育... 体外实验发现:HFMC能够全面抑制人精子的运动能力、穿透牛宫颈粘液的能力和穿透去透明带金黄地鼠卵的能力,随HFMC剂量增加或HFMC与精子作用时间延长,抑制作用增强;HFMC主要损伤精子的膜性结构。推测HFMC的这些作用可能是它在体内抗生育的机理之一。采用改良Sander-Cramer方法测得HFMC的体外最低有效杀精子浓度为10～22毫克/毫升,但对不同动物或同一动物不同部位精子的最低有效杀精子浓度不同。提示在研究避孕药物对精子的作用时,最好选用人精液精子或生物学特性与其相似、且来源容易的其他动物的精子。 展开更多

关键词 HFMC 精子 结构 体外 功能

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HFMC在体外抑制精子功能的机理初探 被引量：5

3

作者 温健萍 罗自强 徐若璞 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1989年第3期274-276,共3页

作者用不同剂量的HFMC,在体外与精子作用不同时间,以探讨其抑制精子功能的机理。结果,HFMC与精子作用30分钟,有抑制精子功能,随剂量增大其作用增强,加入碱液,pH调至7.4时,精子功能有一定程度增强;当作用90分钟时,其抑制作用得不到解除;... 作者用不同剂量的HFMC,在体外与精子作用不同时间,以探讨其抑制精子功能的机理。结果,HFMC与精子作用30分钟,有抑制精子功能,随剂量增大其作用增强,加入碱液,pH调至7.4时,精子功能有一定程度增强;当作用90分钟时,其抑制作用得不到解除;溶液的pH值随HFMC量增加,而在一定范围内逐渐下降,其下降幅度<2.5。以上结果提示:HFMC所致的溶液pH值下降可能是抑制精子功能的原因之一。 展开更多

关键词 HFMC 精子 PH值

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bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立 被引量：4

4

作者 张文萍 冯文莉 +8 位作者 黄世峰 史梦 王雅珍 曾建明 李惠 温健萍 陈新敏 曹唯希 黄宗干 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第15期1377-1381,共5页

目的：构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病（CML）样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法：bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampo细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静... 目的：构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病（CML）样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法：bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampo细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静脉移植入经致死剂量γ射线（900cGy）照射的同种雌性受体鼠中.用形态学、RT-PCR和Western Blot鉴定小鼠成模情况.结果：小鼠移植8-9 wk后,外周血白细胞达2×10^10-3×10^10/L（为对照鼠的5-8倍）,外周血涂片幼稚细胞达到0.10-0.20;骨髓粒系细胞显著增高,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;移植4-5 wk后在受体鼠骨髓和脾脏检出bcr-abl融合基因,8-9 wk后在肝脏亦检测出bcr-abl融合基因,同时在骨髓和脾脏也检测到bcr-abl融合蛋白.建模成功的小鼠3-5 mo后相继死亡.结论：成功建立bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠CML模型,可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究. 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 BCR/ABL融合蛋白 逆转录病毒载体 动物模型

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bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响 被引量：3

5

作者 史梦 冯文莉 +8 位作者 黄世峰 曾建明 王小中 温健萍 张文萍 陶昆 陈新敏 曹唯希 黄宗干 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第4期357-360,共4页

目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR... 目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR1细胞为对照;用彗星实验对两组细胞在DNA损伤后的修复进行不同时间段的动态观测.结果:彗星实验确定了细胞DNA损伤模型的建立条件是:采用50μmol/L终浓度的H2O2对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间均为4℃,10min.BaF3-P210细胞与BaF3-MIGR1细胞相比DNA损伤后修复时间缩短,在损伤后60min即可达到完全修复,而后者在损伤后120min才能完全修复(P<0.05).结论:建立了表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210细胞的DNA损伤模型,并发现bcr/abl融合蛋白可增强BaF3-P210细胞的DNA损伤后修复能力. 展开更多

关键词 融合蛋白质类 bcr/abl 白血病 髓样 慢性 DNA损伤 DNA修复

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PTD-OD-HA融合蛋白对bcr/abl阳性细胞凋亡的影响 被引量：4

6

作者 黄峥兰 季茂胜 +5 位作者 袁颖 黄世峰 刘钉宾 曾建明 温健萍 冯文莉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期267-271,共5页

目的:研究含有蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)、寡聚化结构域(oligomerization domain,OD)和HA标签的PTD-OD-HA融合蛋白对几种bcr/abl阳性细胞株细胞凋亡的影响。方法:将前期制备的PTD-OD-HA蛋白作用于几种bcr/abl阳性细... 目的:研究含有蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)、寡聚化结构域(oligomerization domain,OD)和HA标签的PTD-OD-HA融合蛋白对几种bcr/abl阳性细胞株细胞凋亡的影响。方法:将前期制备的PTD-OD-HA蛋白作用于几种bcr/abl阳性细胞后,应用FCM法、DNA梯度电泳(DNAladder)和透射电子显微镜检测细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测凋亡相关基因bax、bcl-2的mRNA和蛋白水平变化。结果:FCM法检测发现,PTD-OD-HA能促进bcr/abl阳性细胞发生凋亡;DNA ladder实验检测发现,PTD-OD-HA作用后BaF3-P210和K562细胞DNA电泳有梯状条带;透射电子显微镜观察发现,PTD-OD-HA作用后BaF3-P210细胞发生了凋亡;RT-PCR及Western印迹法检测显示,促凋亡基因bax的mRNA及蛋白水平增高,抗凋亡基因bcl-2的mRNA及蛋白水平降低。结论:PTD-OD-HA蛋白可以特异性诱发bcr/abl阳性细胞的凋亡。 展开更多

关键词 白血病 髓样 慢性 重组融合蛋白质类 细胞凋亡 融合蛋白类 bcr-abl

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CTP-OD-HA融合蛋白的原核表达及其活性鉴定 被引量：4

7

作者 刘钉宾 黄世峰 +6 位作者 曾建明 袁颖 陶昆 温健萍 曹唯希 黄宗干 冯文莉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期115-119,共5页

目的构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a... 目的构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a(+)质粒,构建重组原核表达质粒pCTP-OD-HA,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的蛋白回收和FITC标记后,将FITC-CTP-OD-HA融合蛋白作用于K562细胞,观察其转导活性及细胞定位。结果重组原核表达质粒pCTP-OD-HA经酶切及测序鉴定,证明构建正确。37℃,1 mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的35%,纯化后纯度达95%以上。FITC-CTP-OD-HA融合蛋白在K562细胞中具有高转导活性和显著的胞浆定位特性。结论已成功构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,并高效表达了目的蛋白,为进一步研究其在CML信号转导通路中的作用,阐明CML的发病机制及探讨蛋白肽在CML中的治疗策略奠定了基础。 展开更多

关键词 胞浆转导肽 寡聚化区域 血凝素 慢性粒细胞白血病 原核表达 转导活性 胞浆定位

原文传递

钟基因Per2对白血病K562细胞增殖、分化、凋亡的影响及其机制研究 被引量：3

8

作者 孙成铭 黄世峰 +7 位作者 罗红伟 刘钉宾 田文君 朱喜丹 冯文莉 涂植光 温健萍 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期301-306,共6页

目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色... 目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色观察细胞形态,台盼蓝拒染法和MTT法检测K562细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡,电镜观察细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法检测该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53、cyclin B1和c-myc等的表达。结果筛选到稳定表达Per基因的稳定表达细胞株K562/Per2细胞,与空载体转染组及未处理对照组细胞相比,K562/Per2细胞体积缩小,但是分化不明显;台盼蓝拒染法和MTT实验发现Per2抑制细胞生长与增殖能力;流式细胞仪检测周期结果K562/Per2细胞中G2期细胞增多[转染组(36.1±5.5)%,空载组(12.5±2.9)%,未处理对照组(9.7±2.3)%,P<0.05],凋亡检测显示转染组细胞凋亡明显增加[14.8%P<0.05];电镜结果显示染色质浓集、断裂,核固缩和凋亡小体;RT-PCR及Western blot显示Per2明显上调p53基因的mRNA和蛋白表达,而抑制cyclin B1、c-myc基因mR-NA和蛋白的表达。结论钟基因Per2能抑制K562细胞的生长和增殖,并诱导其发生凋亡,但对分化无明显作用。其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控并阻止细胞周期进程来实现的。 展开更多

关键词 钟基因 增殖 凋亡 细胞周期 节律调节

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靶向激活蛋白激酶PKR对白血病K562细胞增殖的影响及机制 被引量：2

9

作者 赵世巧 冯文莉 +6 位作者 曾建明 白卫君 王小中 温健萍 曹唯希 罗云萍 黄宗干 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1058-1063,共6页

背景与目的:由t(9;22)(q34;q11)导致的bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病中起着重要的作用。本研究运用CML特异的bcr/abl融合基因的mRNA与外源重组反义RNA形成双链RNA(double strand RNA,dsRNA)能... 背景与目的:由t(9;22)(q34;q11)导致的bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病中起着重要的作用。本研究运用CML特异的bcr/abl融合基因的mRNA与外源重组反义RNA形成双链RNA(double strand RNA,dsRNA)能激活双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)的策略,研究其对白血病K562细胞增殖的影响及可能的机制。方法:将dsRNA类似物聚肌苷酸-聚胞啶酸(Polyriboinosinic Polyribocytidylic Acid,polyIC)、含bcr/abl融合基因序列40bp的逆转录病毒载体RV-40AS、RV-40AS+2-氨基嘌呤(2-aminopurine,2AP)和含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的逆转录病毒载体RV-GFP作用于K562细胞,并以ECV304细胞作对照细胞株。通过细胞计数、MTT法和半固体集落形成实验检测其对细胞生长增殖的影响,用流式细胞仪检测处理前后细胞周期的变化,用Western blot法检测细胞内PKR、磷酸化PKR(phosphated PKR,p-PKR)、真核翻译启始因子2α(eukaryotic initiation factor-2α,eIF2α)、磷酸化eIF2α(phosphated eIF2α,peIF2α)蛋白表达的变化,用3H-亮氨酸掺入实验检测细胞总蛋白合成水平的变化。结果:polyIC对K562细胞和ECV304细胞生长和增殖均具有非特异性抑制作用,而RV-40AS仅对K562细胞具有特异性的抑制效应。PKR抑制剂能阻断RV-40AS对K562细胞的抑制效应。polyIC和RV-40AS作用K562细胞24h后,S期细胞减少[polyIC组(37.26±2.35)%,未处理组(58.53±5.42)%,P<0.05;RV-40AS组(31.48±3.65)%,未处理组(58.53±5.42)%,P<0.05],G0/G1期细胞增多[polyIC组(50.97±2.18)%,未处理组(36.44±4.20)%,P<0.05;RV-40AS组(57.47±3.61)%,未处理组(36.44±4.20)%,P<0.05]。polyIC处理K562细胞组、ECV304细胞组以及RV-40AS处理K562细胞组的p-PKR和p-eIF2α蛋白表达显著上调,且总蛋白合成水平下降[RV-40AS处理的K562细胞组(3.5±1.9)cpm/ng,未处理组(26.8±2.6)cpm/ng,P<0.05]。结论:外源重组反义RNA与bcr/abl融合基因的mRNA形成� 展开更多

关键词 白血病 蛋白激酶 K562细胞 细胞增殖

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PTD-OD-HA融合蛋白对BCR-ABL阳性细胞增殖的影响 被引量：2

10

作者 黄峥兰 季茂胜 +5 位作者 袁颖 黄世峰 刘钉宾 曾建明 温健萍 冯文莉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期849-852,856,共5页

目的研究PTD-OD-HA融合蛋白对BCR-ABL阳性细胞株增殖的影响。方法将前期制备的PTD-OD-HA融合蛋白作用于两种BCR-ABL阳性细胞株BaF3-P210和K562,同时设立PBS和OD-HA融合蛋白对照组,用MTT法检测细胞的生长情况。48h后离心收集细胞,用瑞氏... 目的研究PTD-OD-HA融合蛋白对BCR-ABL阳性细胞株增殖的影响。方法将前期制备的PTD-OD-HA融合蛋白作用于两种BCR-ABL阳性细胞株BaF3-P210和K562,同时设立PBS和OD-HA融合蛋白对照组,用MTT法检测细胞的生长情况。48h后离心收集细胞,用瑞氏染色及透射电镜观察细胞形态改变,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化,RT-PCR、Westernblot-ting检测c-myc、cyclinD1mRNA及蛋白表达的变化。结果 MTT检测发现,与PBS和OD-HA对照组比较,PTD-OD-HA能抑制BCR-ABL阳性细胞株的生长。瑞氏染色及透射电镜观察见PTD-OD-HA处理的细胞胞质内有大量空泡样变,出现大量的溶酶体,线粒体广泛扩张;FCM检测发现G1期细胞比例增加,S期和G2期细胞比例减少;RT-PCR及Westernblotting检测发现c-myc、cyclinD1的mRNA及蛋白水平均降低。结论 PTD-OD-HA融合蛋白可抑制BCR-ABL阳性细胞生长,使细胞形态发生改变,并使细胞阻滞在G1期,这些改变可能是通过下调c-myc、cyclinD1的表达实现的。 展开更多

关键词 白血病 髓样 慢性 融合蛋白质类 bcr-abl 细胞增殖

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靶向激活蛋白激酶PKR诱导白血病K562细胞凋亡 被引量：2

11

作者 白卫君 王小中 +6 位作者 曾建明 赵世巧 温健萍 肖青 曹唯希 黄宗干 冯文莉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期35-41,共7页

目的:采用双链RNA能激活细胞内蛋白激酶PKR引起细胞凋亡的策略,研究重组慢性粒细胞白血病独特的bcr/ablb3a2型外源反义RNA诱导白血病K562细胞的凋亡及其作用机制。方法:用含bcr/abl融合基因序列40bp的反转录病毒载体RV-40AS作用于白血病... 目的:采用双链RNA能激活细胞内蛋白激酶PKR引起细胞凋亡的策略,研究重组慢性粒细胞白血病独特的bcr/ablb3a2型外源反义RNA诱导白血病K562细胞的凋亡及其作用机制。方法:用含bcr/abl融合基因序列40bp的反转录病毒载体RV-40AS作用于白血病K562细胞,以光学显微镜、电子显微镜、FCM法和DNA梯状条带法检测细胞凋亡情况,化学比色法检测caspase-8和caspase-9活性变化,RT-PCR法检测Bax、Bcl-2 mRNA表达变化,并以Western印迹法检测双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)、磷酸化PKR(p-PKR)、Bax和Bcl-2的蛋白变化。结果:RV-40AS作用K562细胞组在光学显微镜下出现胞体皱缩、染色质浓集以及折光性减弱,电子显微镜下可见细胞质电子密度增大、核固缩和出现凋亡小体;FCM法检测到凋亡细胞占(22.70±1.42)%[未处理组(3.24±0.66)%],DNA电泳出现典型的梯状条带;caspase-8和caspase-9活性升高,PKR蛋白无明显变化,但p-PKR水平升高;Bax的mRNA和蛋白表达均升高,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平没有明显变化。对照组和PKR抑制剂处理组均未发生上述改变。结论:bcr/abl反义RNA反转录病毒载体RV-40AS可特异性激活PKR,从而诱导白血病K562细胞发生凋亡,其可能的机制是PKR活化激活了凋亡反应的上游分子caspase-8,并通过上调Bax表达水平、降低Bcl-2/Bax的比值,导致线粒体膜稳定性被破坏,促使凋亡小体形成和caspase-9活化,最终激活其他凋亡分子使细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 白血病 蛋白激酶类 细胞凋亡 K562细胞

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猪卵透明带单克隆抗体特性研究 被引量：2

12

作者 蒋全斌 温健萍 +2 位作者 刘树君 管妤晶 黄永波 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期31-34,共4页

从猪卵巢中分离卵子提取透明带(ZP)免疫动物,实验研究证明多克隆ZP抗体,对卵巢功能有一定影响。我们制备的三株猪ZP单克隆抗体,它们与人体主要器官无交叉反应。用免疫荧光、ABC免疫组织化学及体外阻断人精卵结合等方法,进行研究。发现... 从猪卵巢中分离卵子提取透明带(ZP)免疫动物,实验研究证明多克隆ZP抗体,对卵巢功能有一定影响。我们制备的三株猪ZP单克隆抗体,它们与人体主要器官无交叉反应。用免疫荧光、ABC免疫组织化学及体外阻断人精卵结合等方法,进行研究。发现有一株单抗(LPD_8)能明显阻断体外人精卵结合。此外有二株单抗(LPD_8,LPC_4)对卵透明带及卵细胞质有交叉反应,而对卵泡颗粒层,卵泡膜,间质细胞等均无交叉反应。这说明卵细胞质内有与上述单抗结合的抗原决定簇,因此透明带与卵细胞质有共同的抗原成分,这一现象支持了ZP由卵细胞产生的理论。本研究结果提示ZP抗体对卵巢功能的影响是由于抗体和卵细胞结合,早期抑制了卵泡的发育而导致卵泡数目减少,内分泌功能下降,而不是直接作用颗粒层和卵泡膜而使激素分泌紊乱。 展开更多

关键词 猪卵透明带 免疫组织化学 人卵巢

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bcr-abl反转录病毒介导的慢性粒细胞白血病样小鼠二次移植模型的建立 被引量：1

13

作者 张文萍 黄世峰 +5 位作者 袁颖 王雅珍 温健萍 曹唯希 黄宗干 冯文莉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期508-513,共6页

目的:构建bcr-abl反转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)样二次移植模型,为深入研究CML的发病和治疗机制奠定可靠的基础。方法:收集已成功建模的由bcr-abl反转录病毒介导的CML样模型小鼠的骨髓细胞或脾细... 目的:构建bcr-abl反转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)样二次移植模型,为深入研究CML的发病和治疗机制奠定可靠的基础。方法:收集已成功建模的由bcr-abl反转录病毒介导的CML样模型小鼠的骨髓细胞或脾细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量γ射线(450 cGy)照射的同种雌性受体鼠,进行造血组织的形态学观察、Y染色体及其特异性性别决定基因Sry的检测以及bcr-abl mRNA和蛋白水平表达的检测,分析鉴定CML样小鼠二次移植模型情况。结果:移植后12 d,肉眼可见明显的脾结节形成,连续切片可见成堆脾集落。移植4~5周后,在雌性受体小鼠骨髓中检出相似Y染色体及Y染色体特异性Sry基因,骨髓和脾脏中检出bcr-abl融合基因。移植10~12周后外周血白细胞水平升高至正常未处理小鼠的4~8倍,粒系细胞水平明显升高至(20~32)×109个/L,外周血涂片幼稚细胞占10%~20%;骨髓涂片结果显示粒系细胞显著增多,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;同时,在肝脏中检测出bcr-abl融合基因,骨髓中检测出bcr-abl融合蛋白的表达。移植18周后,外周血涂片幼稚细胞占30%以上,小鼠发生急性变,最终因肺出血相继死亡。结论:本研究成功建立了bcr-abl反转录病毒介导的小鼠CML样二次移植模型,该模型可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究。 展开更多

关键词 白血病 髓样 慢性 融合蛋白质类 bcr—abl 异种移植模型抗肿瘤试验 小鼠 近交BALB/C

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重组逆转录病毒双表达载体的构建及其对K562细胞增殖活性的影响 被引量：1

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作者 曾建明 冯文莉 +6 位作者 王小中 赵世巧 白卫君 罗云萍 温健萍 涂植光 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第21期2130-2134,共5页

目的构建针对慢性粒细胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的双表达逆转录病毒载体,初步探讨其对K562细胞表型的影响。方法以逆转录病毒载体pMSCV-neo为骨架,构建eGFP及针对bcr-abl b3a2型mRNA的反义RNA双表达载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同... 目的构建针对慢性粒细胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的双表达逆转录病毒载体,初步探讨其对K562细胞表型的影响。方法以逆转录病毒载体pMSCV-neo为骨架,构建eGFP及针对bcr-abl b3a2型mRNA的反义RNA双表达载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同时构建对照载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40S和pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL80AS,酶切及测序鉴定各重组载体;以脂质体法转染各载体到PT67包装细胞后,G418筛选稳定的病毒产生细胞株,再以NIH3T3细胞测定病毒滴度并感染K562细胞,计数细胞数绘制细胞生长曲线,FCM检测细胞凋亡情况、并用Westernblot检测PKR激活情况。结果酶切及测序结果证实各重组载体构建完全正确;G418筛选到高滴度重组逆转录病毒生产细胞株:PT67-MSCV/GFP、PT67-40as、PT67-40s和PT67-80as,且PT67-40as上清感染组K562细胞生长受抑制,其24h时早期细胞凋亡率为22.54±3.19%,与除PT67-80as组外的其余各组相比有显著差异(P<0.05);PT67-40as和PT67-80as处理组细胞PKR磷酸化水平分别增高了59.20%和60.33%,2AP能抑制PT67-40as的作用。结论成功构建重组逆转录病毒双表达载体,并发现其能抑制K562细胞生长并引起细胞凋亡,通过激活PKR抗肿瘤可望成为肿瘤新的靶向治疗策略。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 PKR 反义RNA 逆转录病毒载体 基因克隆

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酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响 被引量：1

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作者 史梦 冯文莉 +8 位作者 黄世峰 曾建明 王小中 温健萍 张文萍 陶昆 陈新敏 曹唯希 黄宗千 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1034-1038,共5页

目的建立人类慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562细胞在伊马替尼（Imatinib mesylate）处理前、后的DNA损伤模型，探讨伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响。方法用噻唑蓝（MTT）法确定伊马替尼预处理K562细胞的浓度；用免疫印... 目的建立人类慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562细胞在伊马替尼（Imatinib mesylate）处理前、后的DNA损伤模型，探讨伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响。方法用噻唑蓝（MTT）法确定伊马替尼预处理K562细胞的浓度；用免疫印迹法（Western blot）检测伊马替尼处理后K562细胞BCR／ABL的磷酸化状态，以反映BCR-ABL酪氨酸激酶活性受抑制情况；用彗星实验检测不同浓度过氧化氢（H2O2）诱导的K562细胞、伊马替尼预处理K562细胞的DNA损伤模型；用彗星实验对各组细胞在DNA损伤后的修复进行动态观测。结果MTT实验结果显示，伊马替尼预处理K562细胞的最佳终浓度为1μmol／L，作用时间24h；Westernblot实验结果显示，该浓度的伊马替尼可有效抑制BCR／ABL融合蛋白第177位酪氨酸激酶磷酸化，密度比为0．100±0．018，与对照组（0．425±0．039）相比，降低了（77．11±5．59）％，差异有统计学意义（t=4．57，P〈0．05）；彗星实验确定了各组细胞DNA损伤模型的建立条件，采用10μmol／L终浓度的H2O2对K562细胞和伊马替尼预处理后K562细胞进行染毒，H2O2作用温度和时间为4℃、10min。修复结果显示，经伊马替尼预处理的K562细胞修复时间为120min，与未处理组修复时间60min相比，前者DNA损伤修复时间明显延长（F=97．79，P〈0．05）。结论本研究建立了伊马替尼处理前、后的白血病K562细胞的DNA损伤模型，BCR／ABL融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼能减弱K562细胞的DNA损伤后修复能力。 展开更多

关键词 白血病 髓样 慢性 K562细胞 哌嗪类 嘧啶类 DNA修复

原文传递

重组逆转录病毒RV-40AS对K562细胞裸鼠移植瘤的实验研究

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作者 曾建明 冯文莉 +7 位作者 赵世巧 白卫君 王小中 温健萍 曹唯希 罗云萍 涂植光 黄宗干 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期102-104,共3页

目的通过重组逆转录病毒RV-40AS表达bcr-abl反义RNA,激活蛋白激酶PKR引起靶细胞表型改变的策略,研究RV-40AS对K562致瘤裸鼠的抗肿瘤效应。方法建立K562细胞裸鼠移植瘤模型,瘤体注射重组逆转录病毒上清,观察裸鼠瘤体生长状况,于实验终点... 目的通过重组逆转录病毒RV-40AS表达bcr-abl反义RNA,激活蛋白激酶PKR引起靶细胞表型改变的策略,研究RV-40AS对K562致瘤裸鼠的抗肿瘤效应。方法建立K562细胞裸鼠移植瘤模型,瘤体注射重组逆转录病毒上清,观察裸鼠瘤体生长状况,于实验终点处死小鼠检测瘤体大小,用western blot检测瘤组织PKR、真核细胞蛋白合成启动因子eIF2α及其磷酸化(p-PKR、p-eIF2α)蛋白质水平。3H-亮氨酸掺入实验检测细胞总蛋白质合成水平。结果RV-40AS作用组裸鼠的瘤体明显小于对照组,瘤重抑制率为61.9%(P<0.05);p-PKR和p-eIF2α蛋白质表达水平有不同程度上调(88%和53%)。3H-亮氨酸掺入实验显示RV-40AS组细胞总蛋白质合成受抑。结论逆转录病毒RV-40AS能激活PKR从而抑制白血病K562细胞移植瘤裸鼠模型的瘤体生长,激活PKR可作为白血病治疗的又一策略。 展开更多

关键词 白血病 动物实验 逆转录病毒载体 K562细胞

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透明带抗原在抗生育中的作用

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作者 温健萍 蒋全斌 罗自强 《四川生理科学杂志》 1990年第Z1期17-19,共3页

大量实验和临床观察证实,免疫对机体的生殖功能有控制作用。这使人们想到利用免疫的方法来抗生育。目前对免疫避孕的研究主要集中在三个方面,即HCG免疫、精子免疫和透明带(Zonae-Pellucidae,ZP)免疫。本文就国内外对ZP抗原的研究近况作... 大量实验和临床观察证实,免疫对机体的生殖功能有控制作用。这使人们想到利用免疫的方法来抗生育。目前对免疫避孕的研究主要集中在三个方面,即HCG免疫、精子免疫和透明带(Zonae-Pellucidae,ZP)免疫。本文就国内外对ZP抗原的研究近况作一综述。 展开更多

关键词 抗生育作用 透明带 单克隆抗体 抗原决定簇 免疫动物 免疫避孕 精子 受体位点 三个方面 临床观察

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猪卵透明带单克隆抗体对人卵巢免疫组织化学研究

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作者 蒋全斌 管妤晶 +1 位作者 刘树君 温健萍 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第S1期20-22,107,共4页

从猪卵巢中分离卵子提取透明带(ZP—OVA).实验研究证明对卵巢功能有一定影响.我们制备的三株抗猪ZP—OVA单克隆抗体(LPD_8,LPC)4.LPD_2,,其中二株(LPD_8,LPC_4)以免疫组织化学方法对人卵巢组织进行体外试验.发现它们除对人卵透明带有交... 从猪卵巢中分离卵子提取透明带(ZP—OVA).实验研究证明对卵巢功能有一定影响.我们制备的三株抗猪ZP—OVA单克隆抗体(LPD_8,LPC)4.LPD_2,,其中二株(LPD_8,LPC_4)以免疫组织化学方法对人卵巢组织进行体外试验.发现它们除对人卵透明带有交叉反应外,还在卵细胞质内见有反应颗粒,而对卵泡颗粒层及卵泡膜则无反应。这说明卵细胞质内有与上述单抗结合的抗原决定簇,因此证明透明带与卵细胞质有共同抗原成分,这一现象支持透明带(ZP—OVA) 展开更多

关键词 猪卵透明带 免疫组化 人卵巢

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运动性劳损的研究进展

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作者 尹立 温健萍 《成都体育学院学报》 CSSCI 北大核心 1989年第3期89-92,共4页

运动性劳损是目前发病率最高的运动性损伤。持续地超负荷训练往往造成组织结构微细损伤,微细损伤的积累是运动劳损的主要原因,运动性劳损的本质是组织的慢性炎症.在悭性炎症过程中,前列腺素(PGS)起着重要的作用。它在炎症的发生和发展... 运动性劳损是目前发病率最高的运动性损伤。持续地超负荷训练往往造成组织结构微细损伤,微细损伤的积累是运动劳损的主要原因,运动性劳损的本质是组织的慢性炎症.在悭性炎症过程中,前列腺素(PGS)起着重要的作用。它在炎症的发生和发展过程中的作用越来越受到重视。治疗运动性劳损的关键是抑制前列腺素的合成和降低其活性,从而减轻慢性炎症。本文还讨论了过度训练时肌腱、软骨和骨组织发生运动性劳损的特点以及解剖结构的异常与运动性劳损的关系。 展开更多

关键词 运动性 前列腺素 劳损 组织结构 过度训练 发病率 运动员 软骨组织 损伤区域 慢性炎症

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猪卵透明带单克隆抗体在体外与人、猪卵巢组织的反应

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作者 温健萍 蒋全斌 管妤晶 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1990年第1期9-11,共3页

用ABC免疫组织化学染色法,观察猪卵透明带单克隆抗体(LPD_8、LPC_4),在体外与人、猪卵巢组织的反应。LPD_8和LPC_4使人、猪卵透明带及卵细胞质着色,但不使卵巢的其他结构,如颗粒细胞、卵泡膜细胞及结缔组织着色。这些结果提示:猪卵透明... 用ABC免疫组织化学染色法,观察猪卵透明带单克隆抗体(LPD_8、LPC_4),在体外与人、猪卵巢组织的反应。LPD_8和LPC_4使人、猪卵透明带及卵细胞质着色,但不使卵巢的其他结构,如颗粒细胞、卵泡膜细胞及结缔组织着色。这些结果提示:猪卵透明带单克隆抗体对卵巢内分泌功能可能无直接影响,但可通过与卵细胞质结合,抑制卵泡的发育,继而导致卵泡数目减少和内分泌功能降低。作者认为,用本实验提取的两株猪卵透明带单克隆抗体,进行免疫避孕研究前途不大。 展开更多

关键词 透明带 单克隆抗体 卵巢 免疫组化

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