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题名发根农杆菌介导的闽楠遗传转化体系构建与优化
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作者
吴梦洁
洪家都
李芳燕
周生财
林二培
程龙军
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机构
浙江农林大学林业与生物技术学院/亚热带森林培育国家重点实验室
丽水职业技术学院
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出处
《核农学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第8期1516-1522,共7页
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基金
浙江省重点研发计划项目(2021C02054)。
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文摘
闽楠[Phoebe bournei(Hemsl.)Yang]为我国重要的珍贵树种。为建立闽楠遗传转化体系,以闽楠幼苗为材料,利用pCAMBIA1300-GFP质粒转化的发根农杆菌介导植株转化。在比较注射和菌液浸泡两种侵染方式侵染效率的基础上,进一步利用正交[L9(3^(3))]试验从菌株种类、菌液侵染浓度和侵染植株苗龄三个方面优化了遗传转化体系。另外,对不同光强影响闽楠毛状根诱导及转化率情况进行了分析。结果表明,注射法的毛状根诱导率和遗传转化率分别为80.0%、66.7%;而菌液浸泡法的诱导率和遗传转化率分别为41.2%、35.3%。正交试验中,影响闽楠毛状根诱导率和遗传转化率的主要因素为菌株种类。最大诱导率和转化效率分别达到了87.5%、70.6%。该体系的最优组合为:K599菌株在菌液浓度OD_(600)=1.2条件下注射侵染三叶期的闽楠幼苗。此外,较弱光强(50μmol·m^(-2)·s^(-1))的培养条件比较强光照(100μmol·m^(-2)·s^(-1))更有利于闽楠幼苗的生长和遗传转化。本研究创建并优化了一套高效、稳定的闽楠遗传转化体系,成功获得了具有转基因毛状根的闽楠植株,为闽楠重要基因挖掘、新种质创建和遗传改良奠定了基础。
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关键词
闽楠
遗传转化
发根农杆菌
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Keywords
Phoebe bournei
genetic transformation
Agrobacterium rhizogenes
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分类号
S792.24
[农业科学—林木遗传育种]
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题名巨桉EgrCIN1响应非生物逆境的分析
被引量：1
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作者
李芳燕
夏晓雪
吴梦洁
洪家都
程龙军
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机构
浙江农林大学林业与生物技术学院
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出处
《浙江农林大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期1194-1202,共9页
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基金
浙江省科技厅重大科技专项(2021C02070-6)。
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文摘
【目的】对巨桉Eucalyptus grandis中特有的低温响应基因EgrCIN1 (Eucgr.B02882)序列及其表达特征进行分析,并探索其在植物低温响应中发挥的功能,以丰富桉树抗寒基因资源。【方法】利用生物信息学手段分析EgrCIN1基因、蛋白序列的特征和启动子上的顺式作用元件信息;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术分析EgrCIN1在巨桉不同组织及4℃不同时间、干旱、 300 mmol·L^(-1)1-氯化钠(NaCl)、 100μmol·L^(-1)脱落酸(ABA)和100μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯(MeJA)处理下植株叶片中的表达特征;通过EgrCIN1::GFP载体瞬时转化烟草Nicotiana tabacum进行亚细胞定位;并构建CaMV35S启动子驱动的过表达载体异源转化拟南芥Arabidopsis thaliana,获得3个转基因纯合株系后,对其进行-6℃低温、0.5μmol·L^(-1)ABA等逆境处理,分析EgrCIN1在低温胁迫响应中发挥的功能。【结果】EgrCIN1是巨桉中特有的基因,不含内含子,没有跨膜结构,启动子含有多个与逆境响应相关的顺式作用元件。该基因在茎和叶片中都有表达,而在根中不表达;在叶片中其表达受低温处理强烈诱导;同时,干旱、高盐和ABA等非生物逆境因子也能诱导叶片中EgrCIN1的表达,其编码蛋白被定位在叶绿体中。拟南芥中EgrCIN1过表达转基因株系对低温耐受性提高,对外源ABA敏感程度增强。【结论】EgrCIN1是在叶绿体表达,并可能通过ABA依赖途径参与植物低温胁迫响应,提高植物对低温的抗性。图8表2参27。
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关键词
巨桉
EgrCIN1
低温响应
叶绿体
脱落酸
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Keywords
Eucalyptus grandis
EgrCIN1
cold response
chloroplast
ABA
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分类号
S722.3
[农业科学—林木遗传育种]
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