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HIV-1 Env三聚体抗原改造研究进展
被引量：
2
1
作者
沈鸿
霖
张芝晴
+1 位作者
李少伟
顾颖
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期25-32,共8页
HIV-1疫苗研发是当前艾滋病研究的一大热点,其病毒表面包膜糖蛋白Env三聚体介导病毒与细胞融合,是HIV-1疫苗研究的重要靶点。因此,设计并在体外表达类天然Env三聚体对HIV-1疫苗的研发具有重要的意义。近年来,Env三聚体研究取得了显著的...
HIV-1疫苗研发是当前艾滋病研究的一大热点,其病毒表面包膜糖蛋白Env三聚体介导病毒与细胞融合,是HIV-1疫苗研究的重要靶点。因此,设计并在体外表达类天然Env三聚体对HIV-1疫苗的研发具有重要的意义。近年来,Env三聚体研究取得了显著的进展。SOSIP、NFL2P、UFO等抗原改造方法实现了类天然Env三聚体的体外表达,逐步解决了改造抗原产量低、结构不稳定等问题,且表达的Env三聚体抗原能在动物免疫中诱导机体产生较高的中和抗体水平。Env三聚体改造方法促进了HIV-1疫苗的研究。文中综述了SOSIP、NFL2P、UFO三种HIV-1 Env三聚体抗原改造方法,对比各个改造方法优缺点,并结合自身工作提出相关建议,为后续HIV-1抗原的相关设计提供指导。
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关键词
人类免疫缺陷病毒I型
Env三聚体
抗原设计
中和抗体
原文传递
人类免疫缺陷病毒1型gp140包膜蛋白三聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定
被引量：
1
2
作者
杨超
张芝晴
+5 位作者
沈鸿
霖
高双全
李少勇
李少伟
夏宁邵
顾颖
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期541-549,共9页
本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构...
本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性linker、三聚体折叠序列等方法优化设计。通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEK293T细胞进行gp140蛋白表达,采用镍柱纯化。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70%,每升培养基可获得0.5mg gp140蛋白,并且具有良好的抗原活性,电镜下呈现三聚体结构。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,检测小鼠免疫血清显示gp140蛋白能有效刺激机体产生免疫应答。本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1NL4-3gp140蛋白,为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础。
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关键词
人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)
包膜糖蛋白gp140
真核表达
密码子优化
原文传递
HIV-1 CAP2NC蛋白的表达及体外自组装
3
作者
白诗梦
张芝晴
+7 位作者
乔佳明
沈鸿
霖
黄芳
高双全
李少勇
李少伟
夏宁邵
顾颖
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期586-593,共8页
构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2N...
构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2NC。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CAP2NC可在大肠杆菌可溶高效表达,经纯化后纯度约为95%。ELISA检测表明重组蛋白CAP2NC可被HIV-1衣壳蛋白特异性单克隆抗体识别,具有较好反应活性。重组蛋白透析后在非原性SDS-PAGE中呈现为多种聚体形式。分子筛排阻层析分析CAP2NC蛋白透析后可进行组装,负染电镜进一步观察显示CAP2NC蛋白在RNA存在条件下,可形成空心管状颗粒,其形态结构与HIV-1病毒衣壳体外自组装形成的类似。上述结果表明HIV-1 CAP2NC蛋白具有体外自组装的性质,为进一步在体外研究非成熟病毒样颗粒结构奠定基础。
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关键词
HIV-1
CAP2NC蛋白
自组装
原文传递
题名
HIV-1 Env三聚体抗原改造研究进展
被引量：
2
1
作者
沈鸿
霖
张芝晴
李少伟
顾颖
机构
厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心
厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期25-32,共8页
基金
国家自然科学基金(No.81671645)资助~~
文摘
HIV-1疫苗研发是当前艾滋病研究的一大热点,其病毒表面包膜糖蛋白Env三聚体介导病毒与细胞融合,是HIV-1疫苗研究的重要靶点。因此,设计并在体外表达类天然Env三聚体对HIV-1疫苗的研发具有重要的意义。近年来,Env三聚体研究取得了显著的进展。SOSIP、NFL2P、UFO等抗原改造方法实现了类天然Env三聚体的体外表达,逐步解决了改造抗原产量低、结构不稳定等问题,且表达的Env三聚体抗原能在动物免疫中诱导机体产生较高的中和抗体水平。Env三聚体改造方法促进了HIV-1疫苗的研究。文中综述了SOSIP、NFL2P、UFO三种HIV-1 Env三聚体抗原改造方法,对比各个改造方法优缺点,并结合自身工作提出相关建议,为后续HIV-1抗原的相关设计提供指导。
关键词
人类免疫缺陷病毒I型
Env三聚体
抗原设计
中和抗体
Keywords
HIV-1
Env trimer
antigen design
neutralizing antibody
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
人类免疫缺陷病毒1型gp140包膜蛋白三聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定
被引量：
1
2
作者
杨超
张芝晴
沈鸿
霖
高双全
李少勇
李少伟
夏宁邵
顾颖
机构
厦门大学公共卫生学院
厦门大学生命科学学院
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期541-549,共9页
基金
国家自然科学基金(项目号:81671645),题目:靶向CD4受体的人类免疫缺陷病毒中和抗体的作用机制和表位结构研究~~
文摘
本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性linker、三聚体折叠序列等方法优化设计。通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEK293T细胞进行gp140蛋白表达,采用镍柱纯化。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70%,每升培养基可获得0.5mg gp140蛋白,并且具有良好的抗原活性,电镜下呈现三聚体结构。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,检测小鼠免疫血清显示gp140蛋白能有效刺激机体产生免疫应答。本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1NL4-3gp140蛋白,为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础。
关键词
人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)
包膜糖蛋白gp140
真核表达
密码子优化
Keywords
Human immunodeficieney virus type I（HIV-1）
Envelope glycoprotein gpl40
Eukaryotic ex- pression
Codon optimization
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
HIV-1 CAP2NC蛋白的表达及体外自组装
3
作者
白诗梦
张芝晴
乔佳明
沈鸿
霖
黄芳
高双全
李少勇
李少伟
夏宁邵
顾颖
机构
厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心
厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期586-593,共8页
基金
国家自然科学基金(Nos.81671645
81371818)资助~~
文摘
构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2NC。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CAP2NC可在大肠杆菌可溶高效表达,经纯化后纯度约为95%。ELISA检测表明重组蛋白CAP2NC可被HIV-1衣壳蛋白特异性单克隆抗体识别,具有较好反应活性。重组蛋白透析后在非原性SDS-PAGE中呈现为多种聚体形式。分子筛排阻层析分析CAP2NC蛋白透析后可进行组装,负染电镜进一步观察显示CAP2NC蛋白在RNA存在条件下,可形成空心管状颗粒,其形态结构与HIV-1病毒衣壳体外自组装形成的类似。上述结果表明HIV-1 CAP2NC蛋白具有体外自组装的性质,为进一步在体外研究非成熟病毒样颗粒结构奠定基础。
关键词
HIV-1
CAP2NC蛋白
自组装
Keywords
HIV- 1, CAP2NC protein, self-assembly property
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HIV-1 Env三聚体抗原改造研究进展
沈鸿
霖
张芝晴
李少伟
顾颖
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
原文传递
2
人类免疫缺陷病毒1型gp140包膜蛋白三聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定
杨超
张芝晴
沈鸿
霖
高双全
李少勇
李少伟
夏宁邵
顾颖
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
原文传递
3
HIV-1 CAP2NC蛋白的表达及体外自组装
白诗梦
张芝晴
乔佳明
沈鸿
霖
黄芳
高双全
李少勇
李少伟
夏宁邵
顾颖
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
原文传递
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