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肝癌细胞分泌蛋白质的多种提取方法比较 被引量：2
1
作者 曹晶 沈诚频 +5 位作者 张军 姚鋆 申华莉 刘银坤 陆豪杰 杨芃原 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2010年第9期853-858,共6页
由于分泌蛋白在重大生理和病理过程中的重要角色和功能,使得分泌蛋白质组的研究备受人们关注.高效提取分泌蛋白质是分泌蛋白质组学研究的第一步,也是关键的一步.本研究首次比较了3种常用的提取方法:超滤法、沉淀法和透析法.以具有高自... 由于分泌蛋白在重大生理和病理过程中的重要角色和功能,使得分泌蛋白质组的研究备受人们关注.高效提取分泌蛋白质是分泌蛋白质组学研究的第一步,也是关键的一步.本研究首次比较了3种常用的提取方法:超滤法、沉淀法和透析法.以具有高自发性转移潜能的人肝癌细胞系LM3为研究对象,采用3种方法平行提取分泌蛋白,发现超滤法的提取效率最高;蛋白质经过溶液酶解,在线的一维反相高效液相色谱分离和ESI-MS/MS质谱鉴定,共鉴定了360个非冗余蛋白,其中有34,110和29个蛋白分别只在超滤法、沉淀法和透析法提取的样品中被鉴定到,沉淀法占优势,3种方法互相补充.360个蛋白中,有42个分泌蛋白为首次被鉴定到,扩大了已有的人肝癌转移细胞分泌蛋白数据库. 展开更多
关键词 肝癌 分泌蛋白 蛋白提取 超滤 沉淀 透析LC—MS/MS
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利用谱图校正提高色谱-质谱联用的分析效率
2
作者 陆文渊 张扬 +3 位作者 沈诚频 殷薛飞 刘晓慧 杨芃原 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期349-354,共6页
在使用对二甲基亚砜(DMSO)和NEDD8激活酶抑制剂(MLN4924,MLN)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内的蛋白质进行分析的过程中,利用Progenesis LC-M S软件对色谱图进行了保留时间的校正,并比较了同组分多次重复实验中的谱图相似率及两种刺激... 在使用对二甲基亚砜(DMSO)和NEDD8激活酶抑制剂(MLN4924,MLN)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内的蛋白质进行分析的过程中,利用Progenesis LC-M S软件对色谱图进行了保留时间的校正,并比较了同组分多次重复实验中的谱图相似率及两种刺激下细胞内蛋白质色谱图的相似度。样品经双酶切处理后,加入QconC AT标准蛋白质混合物作为参照,经高效液相色谱-串级质谱分离,后续又对谱图进行了校正与分析。经过谱图校正,将蛋白质鉴定结果从7 000个左右提高到8 000个以上,提高了蛋白质的鉴定效率。在利用谱图计数进行相对定量时,还分析了DMSO和MLN分别刺激HUVEC后细胞内的蛋白质差异在1 000个左右,并给出了校正后的色谱总离子流图的相似度比较。相比其他方法更为简单快捷和流程化,具有高通量高灵敏度的优点。 展开更多
关键词 高效液相色谱-串级质谱 谱图校正 蛋白质分析
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乙酰化蛋白的质谱鉴定研究 被引量：2
3
作者 祝叶萍 樊惠芝 +3 位作者 沈诚频 姚鋆 周新文 杨芃原 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第22期2563-2568,共6页
报道了两种生物质谱技术ESI-MS和MALDI-MS在鉴定乙酰化修饰蛋白BSA-ac中的应用研究结果.乙酰化修饰蛋白通过特征碎裂峰m/z126.1或MS/MS质谱图中相差一个赖氨酸的相邻b或y离子之间170Da分子量的差异确证赖氨酸乙酰化修饰,并且后者提供具... 报道了两种生物质谱技术ESI-MS和MALDI-MS在鉴定乙酰化修饰蛋白BSA-ac中的应用研究结果.乙酰化修饰蛋白通过特征碎裂峰m/z126.1或MS/MS质谱图中相差一个赖氨酸的相邻b或y离子之间170Da分子量的差异确证赖氨酸乙酰化修饰,并且后者提供具体修饰位点信息.研究提示ESI-MS和MALDI-MS两种质谱技术均可用于鉴定实际复杂样品中的乙酰化蛋白,且在乙酰化蛋白的鉴定中各有其优点. 展开更多
关键词 乙酰化蛋白 翻译后修饰 质谱 鉴定
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