进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆中CP4-EPSPS基因的检测比较研究 被引量：35

1

作者 潘良文 陈家华 +3 位作者 沈禹飞 胡永强 陶军 韩伟 《生物技术通讯》 CAS 2001年第3期175-177,207,共4页

由于国际上对转基因产品的安全性存在较大争议 ,因此对没有加施标签予以声明的情况下大量进入中国市场的转基因产品进行检测就显得十分迫切且意义重大。本研究以进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆为材料 ,通过比较分析外源的CP4 EPSPS基... 由于国际上对转基因产品的安全性存在较大争议 ,因此对没有加施标签予以声明的情况下大量进入中国市场的转基因产品进行检测就显得十分迫切且意义重大。本研究以进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆为材料 ,通过比较分析外源的CP4 EPSPS基因的核苷酸序列和表达的氨基酸序列 ,设计出两对不同的引物 ,采用PCR方法分别对转基因油菜籽和大豆中外源的CP4 展开更多

关键词 抗草甘膦油菜籽 抗草甘膦大豆 CP4-EPSPS PCR CP4-EPSPS基因 检测 转基因作物

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转基因抗草甘膦油菜籽中草甘膦氧化还原酶基因的检测方法研究 被引量：21

2

作者 陈家华 潘良文 +2 位作者 沈禹飞 胡永强 陶军 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期63-67,共5页

应用PCR技术 ,分析草甘膦氧化还原酶基因 (GOX)和修饰草甘膦氧化还原酶基因的核苷酸序列及表达蛋白质的氨基酸序列 。

关键词 抗草甘膦油菜籽 草甘膦氧化还原酶 PCR 基因 检测方法

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套式PCR直接检测印度腥黑穗病菌冬孢子 被引量：18

3

作者 易建平 陶庭典 +3 位作者 潘良文 沈禹飞 印丽萍 郑建中 《植物检疫》 北大核心 2002年第4期197-200,共4页

用印度腥黑穗病菌冬孢子制备模板DNA ,利用印腥特异性引物T3 /T6,T3 /T4和套式PCR(nestPCR)扩增技术直接检测印腥冬孢子 ,检测的灵敏度可达 1个冬孢子。检测时间缩短为 1天。这种简单、快速、灵敏、实用和准确的PCR检测技术适用于口岸... 用印度腥黑穗病菌冬孢子制备模板DNA ,利用印腥特异性引物T3 /T6,T3 /T4和套式PCR(nestPCR)扩增技术直接检测印腥冬孢子 ,检测的灵敏度可达 1个冬孢子。检测时间缩短为 1天。这种简单、快速、灵敏、实用和准确的PCR检测技术适用于口岸印腥检疫的需要 ,解决了常规PCR检测中DNA制备需要萌发冬孢子和检测时间长的难题。 展开更多

关键词 套式PCR 直接检测 印度腥黑穗病菌 冬孢子 电泳图 小麦病害

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马铃薯单双三价抗病毒基因表达载体的构建 被引量：14

4

作者 崔晓江 彭学贤 +1 位作者 沈禹飞 莽克强 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期185-189,共5页

马铃薯Y病毒(PVY)、X病毒(PVX)和卷叶病毒(PLRV)引起的病害是造成我国马铃薯退化的主要原因,严重危害我国的马铃薯生产。PVY和PVX或PVY和PLRV混合侵染带来的损失远远大于各病毒单独侵染。国外科学家通过在马铃薯植株体内表达病毒外壳蛋... 马铃薯Y病毒(PVY)、X病毒(PVX)和卷叶病毒(PLRV)引起的病害是造成我国马铃薯退化的主要原因,严重危害我国的马铃薯生产。PVY和PVX或PVY和PLRV混合侵染带来的损失远远大于各病毒单独侵染。国外科学家通过在马铃薯植株体内表达病毒外壳蛋白(CP)基因来减缓病毒病害的发生已取得相当的成功。 我们从河北省坝上地区农科所试验田中采集PLRV感病材料Burbank及87-1,参照文献提取病毒RNA并以其为模板,反转录合成cDNA。根据PLRV澳大利亚分离物已发表的序列。 展开更多

关键词 马铃薯 抗病毒基因 载体 基因表达

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进口转基因抗Basta^(TM)除草剂油菜籽检测方法研究 被引量：23

5

作者 潘良文 沈禹飞 +2 位作者 陈家华 胡永强 陶军 《粮食与油脂》 2001年第5期36-37,共2页

建立了从油菜籽中提取总ＤＮＡ和用ＰＣＲ技术检测外源基因的方法，用该方法从进口油 菜籽中检出外源的草丁膦乙酰转移酶基因（ＰＡＴ）、新霉素磷酸转移酶基因（ＮｐｔＩＩ）、花椰 菜花叶病毒３５Ｓ启动子（ＣａＭＶ ３５Ｓ）。

关键词 油菜籽 草丁膦乙酰转移酶基因 新霉素磷酸转移酶基因 CaMV35S启动子 外源基因 检测方法 进口农产品

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转基因抗草甘膦油菜籽中FMV 35S启动子的检测研究 被引量：15

6

作者 潘良文 陈家华 +1 位作者 胡永强 沈禹飞 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第3期224-229,共6页

对 FMV3 5 S和 FMV3 4S、Ca MV3 5 S启动子的 DNA序列进行了同源性分析 ,并设计引物对转基因抗草甘膦油菜籽中转入的 FMV3 5 S启动子进行了检测 .从 7船进口加拿大油菜籽检出 FMV3 5 S启动子基因 .

关键词 草甘膦 转基因油菜籽 FMV 35S启动子 PCR 除草剂抗性 检测

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转基因抗草丁膦油菜籽检测方法研究 被引量：11

7

作者 潘良文 沈禹飞 +2 位作者 陈家华 胡永强 陶军 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期57-59,62,共4页

应用PCR技术 ,测试抗草丁膦杂交油菜籽中转入的外源抗草丁膦除草剂基因 (BAR)、雄性不育基因 (BARNASE)和恢复基因 (BARSTAR) ,通过对PCR产物进行克隆和测序 ,建立了检测转基因抗草丁膦油菜籽的技术和方法。

关键词 转基因油菜籽 抗草丁膦除草剂基因 雄性不育基因 恢复基因 PCR 农产品安全

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烟草环斑病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测方法研究 被引量：11

8

作者 杨翠云 曹洁 +3 位作者 于翠 高焕利 沈禹飞 代光辉 《上海农业学报》 CSCD 2007年第1期83-87,共5页

根据TRSV CP基因的保守序列设计引物,RT-PCR和IC-RT-PCR能从TRSV的2个分离物中分别扩增到与预期大小相同的DNA条带,序列测定和分析表明所扩增序列为TRSV CP基因的部分序列,在系统关系树上与TRSV的其他分离物形成一簇,表明所建立的RT-PCR... 根据TRSV CP基因的保守序列设计引物,RT-PCR和IC-RT-PCR能从TRSV的2个分离物中分别扩增到与预期大小相同的DNA条带,序列测定和分析表明所扩增序列为TRSV CP基因的部分序列,在系统关系树上与TRSV的其他分离物形成一簇,表明所建立的RT-PCR和IC-RT-PCR检测方法是可靠的。 展开更多

关键词 烟草环斑病毒(TRSV) RT-PCR IC-RT-PCR 检测方法

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小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的单孢检测 被引量：9

9

作者 易建平 陶庭典 +3 位作者 印丽萍 沈禹飞 潘良文 郑建中 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期42-46,共5页

设计了小麦印度腥黑穗病菌 (Tilletiaindica)和黑麦草腥黑穗病菌 (Tilletiawalkeri)通用引物H4 /H7和H11/H12 ,结合T .indica特异性引物Tin3/Tin4和T .walkeri特异性引物Tin11/Tin4建立了检测T .indica和T .walkeri冬孢子的套式PCR (nes... 设计了小麦印度腥黑穗病菌 (Tilletiaindica)和黑麦草腥黑穗病菌 (Tilletiawalkeri)通用引物H4 /H7和H11/H12 ,结合T .indica特异性引物Tin3/Tin4和T .walkeri特异性引物Tin11/Tin4建立了检测T .indica和T .walkeri冬孢子的套式PCR (nestedPCR)检测方法。检测的灵敏度达 1个冬孢子 ,检测时间缩短为 8h。PCR产物的测序验证了PCR反应的可靠性。这一方法克服了冬孢子休眠或不具存活力以及常规PCR检测时间长的困难 。 展开更多

关键词 小麦印度腥黑穗病菌 黑麦草腥黑穗病菌 单孢检测 套式PCR 冬孢子 检疫

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进境黑麦草种子中黑麦草腥黑粉菌的鉴定 被引量：6

10

作者 易建平 陶庭典 +3 位作者 沈禹飞 戚龙君 印丽萍 郑建中 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期52-56,共5页

从广州 (1997)和天津 (1999)进境的美国黑麦草种子中均发现一种类似中国一类危险性有害生物小麦印度腥黑粉菌 (TilletiaindicaMitra)的冬孢子。其大小分别为 2 8 9～ 4 3 7μm和 2 9 2～ 4 0 2 μm ,淡黄色至暗褐色 ,半透明至不透明 ,... 从广州 (1997)和天津 (1999)进境的美国黑麦草种子中均发现一种类似中国一类危险性有害生物小麦印度腥黑粉菌 (TilletiaindicaMitra)的冬孢子。其大小分别为 2 8 9～ 4 3 7μm和 2 9 2～ 4 0 2 μm ,淡黄色至暗褐色 ,半透明至不透明 ,球形至亚球形 ,疣状突起常呈钝圆状 ,表面有脊状突起。检疫中常因其与印腥冬孢子极为相似而引起误诊。经形态学特征观察、PCR分析和PCR扩增产物测序分析 ,鉴定为黑麦草腥黑粉菌 (Tilletiawalkeri)。 展开更多

关键词 黑麦草 种子 中黑麦草 腥黑粉菌 鉴定 引种 PCR 冬孢子 形态学特征 扩增产物 测序分析

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油菜内源特异参照基因寻找与检测研究 被引量：6

11

作者 潘良文 沈禹飞 +2 位作者 陈家华 胡永强 陶 军 《粮食与油脂》 2002年第8期31-33,共3页

对油菜内源特异参照基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEP3-PEPCase,PEP）基因、PCR 检测的引物和相应的靶序列引物进行同源性分析,建立了PEP基因的检测方法。

关键词 油菜 内源特异参照基因 检测 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因 PCR方法

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肉骨粉中羊源性成分检测方法研究 被引量：4

12

作者 潘良文 沈禹飞 +2 位作者 张舒亚 陈家华 胡永强 《检验检疫科学》 2004年第2期15-18,共4页

发现行业标准SN1 1 1 9- 2 0 0 2检测羊源性成分的引物与山羊线粒体基因完全匹配 ,而与绵羊线粒体基因有 7个碱基不匹配 ,对该引物的特异性和灵敏度进行了分析 ,发现该引物检测绵羊成分的灵敏度较低。根据绵羊线粒体基因序列重新设计了... 发现行业标准SN1 1 1 9- 2 0 0 2检测羊源性成分的引物与山羊线粒体基因完全匹配 ,而与绵羊线粒体基因有 7个碱基不匹配 ,对该引物的特异性和灵敏度进行了分析 ,发现该引物检测绵羊成分的灵敏度较低。根据绵羊线粒体基因序列重新设计了引物OV1 /OV2、OV3/OV4 ,并对其特异性和灵敏度进行了分析。用以上引物对进口肉骨粉进行了检测 ,从 1 4批进口肉骨粉中检测出羊源性成分 ,美国检疫专家确认了中方的检测结果 。 展开更多

关键词 肉骨粉 羊源性成分 检测方法 蛋白饲料 疯牛病 羊搔痒病 朊蛋白

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番茄环斑病毒的普通RT-PCR和巢式PCR检测方法 被引量：4

13

作者 杨翠云 于翠 +1 位作者 沈禹飞 代光辉 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2005年第4期396-400,共5页

根据番茄环斑病毒(ToRSV)外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计了2对引物(引物对I和II),利用RT-PCR分别扩增出预期大小的800bp和580bp的条带,其中引物对II扩增效率较高、特异性较好。以引物对I和II进行2轮PCR扩增,建立了巢式PCR检测方法,其... 根据番茄环斑病毒(ToRSV)外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计了2对引物(引物对I和II),利用RT-PCR分别扩增出预期大小的800bp和580bp的条带,其中引物对II扩增效率较高、特异性较好。以引物对I和II进行2轮PCR扩增,建立了巢式PCR检测方法,其灵敏度比普通RT-PCR提高100～200倍。序列测定和分析表明所测定的序列为ToRSVCP基因的部分序列,在系统关系树上与ToRSV的其他分离物形成一簇,亲缘关系很近。 展开更多

关键词 番茄环斑病毒 RT—PCR 巢式PCR 检测方法

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PCR技术在印度腥黑穗病菌检测和鉴定中的应用 被引量：1

14

作者 易建平 沈禹飞 +3 位作者 陶庭典 戚龙君 印丽萍 郑建中 《上海农业学报》 CSCD 2002年第2期57-61,共5页

利用 2对小麦印度腥黑穗病菌 (Tilletiaindica Mitra)特异性引物 (Tin3/Tin4 ,F3/R1)和 2对黑麦草腥黑穗病菌T .walkeri特异性引物 (Tin7/Tin8,Tin11/Tin4 )建立快速鉴定T .indica及其近似种T .walkeri的PCR程序。引物Tin3/Tin4 ,F3/R1... 利用 2对小麦印度腥黑穗病菌 (Tilletiaindica Mitra)特异性引物 (Tin3/Tin4 ,F3/R1)和 2对黑麦草腥黑穗病菌T .walkeri特异性引物 (Tin7/Tin8,Tin11/Tin4 )建立快速鉴定T .indica及其近似种T .walkeri的PCR程序。引物Tin3/Tin4 ,F3/R1可特异性扩增T .indica分别得到 4 15bp和 4 98bp产物 ,扩增 T .walkeri无产物 ;引物Tin7/Tin8,Tin11/Tin4可特异性扩增T .walkeri 得到 391bp和 4 15bp产物 ,扩增 T .indica 无产物。 4对引物扩增 T .horrida、T .controversa和T .laevis无产物。产物片段的测序验证了PCR反应的可靠性。为进口粮检疫中T .indica的鉴定提供了快速、简便。 展开更多

关键词 PCR技术 印度腥黑穗病菌 检测 鉴定 小麦 黑麦草

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小麦印度腥黑穗病菌鉴定方法的新进展 被引量：2

15

作者 易建平 彭金火 +1 位作者 陶庭典 沈禹飞 《植物检疫》 北大核心 2002年第2期95-97,共3页

关键词 小麦 印度腥黑穗病菌 鉴定方法 进展

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DAS-ELISA检测香石竹环斑病毒 被引量：2

16

作者 陶庭典 易建平 沈禹飞 《植物检疫》 北大核心 2001年第4期216-217,共2页

使用碱性磷酸酶标记的抗体进行DAS -ELISA试验 ,检测香石竹环斑病毒的灵敏度可达 4ng/ml的提纯病毒或 1 0 -4 倍稀释的克利夫兰烟的病汁液。在检测人工接种的Di anthusspp .的 5个品种时 ,有 2个品种在接种 7天后还没有表现症状 ,但DAS ... 使用碱性磷酸酶标记的抗体进行DAS -ELISA试验 ,检测香石竹环斑病毒的灵敏度可达 4ng/ml的提纯病毒或 1 0 -4 倍稀释的克利夫兰烟的病汁液。在检测人工接种的Di anthusspp .的 5个品种时 ,有 2个品种在接种 7天后还没有表现症状 ,但DAS -ELISA检测为阳性反应。 展开更多

关键词 香石竹环斑病毒 DAS-ELISA 检测 种苗

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啤酒大麦药剂处理对TCK冬孢子的杀灭效果及问题 被引量：2

17

作者 杨翠云 郑建中 +4 位作者 沈禹飞 戚龙君 陶庭典 易建平 周国梁 《上海农业学报》 CSCD 2002年第3期65-68,共4页

参考啤酒大麦加工工艺流程中所采用的药剂及浓度,设计不同浓度的漂白粉、石灰、甲醛以及石灰加漂白粉,对小麦矮腥黑穗病菌（Tilletia　controversa　Kuhn）（简称TCK）冬孢子分别处理4h,接种于3％琼脂培养基上,然后移入5℃生长箱内培养... 参考啤酒大麦加工工艺流程中所采用的药剂及浓度,设计不同浓度的漂白粉、石灰、甲醛以及石灰加漂白粉,对小麦矮腥黑穗病菌（Tilletia　controversa　Kuhn）（简称TCK）冬孢子分别处理4h,接种于3％琼脂培养基上,然后移入5℃生长箱内培养,观察药剂处理对孢子萌发率的影响。结果表明,漂白粉浓度达到0.05％以上时,孢子基本不能萌发;几种浓度的生石灰处理对TCK孢子几乎没有灭活作用;0.01％甲醛可以明显抑制TCK孢子的萌发;对TCK孢子直接浸水处理45d仍有50％以上的萌发率。大麦加工工艺中所采用的漂白粉及石灰处理浓度不足以杀灭TCK冬孢子;其污水处理中采用0.05％浓度的甲醛可抑制孢子的萌发。 展开更多

关键词 杀灭效果 啤酒大麦 药剂处理 冬孢子 萌发率 小麦矮腥黑穗病菌

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转基因抗虫保铃棉(Bollgard~ひ)检测方法研究

18

作者 张舒亚 潘良文 +2 位作者 沈禹飞 陈家华 胡永强 《种子》 CSCD 北大核心 2003年第5期38-40,共3页

运用常规 PCR方法和实时荧光 PCR方法对转基因抗虫保铃棉外源基因 Ca MV 35 S启动子、NOS终止子、标记基因NPT II和目的基因 Cry IA(c)进行了检测。建立了快速、准确的抗虫保铃棉籽转基因成分的 PCR检测方法。

关键词 PCR 转基因抗虫保铃棉 生物技术 安全性

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啤酒大麦加工工艺中药剂处理对TCK杀灭作用及孢子流向的研究

19

作者 杨翠云 郑建中 +4 位作者 沈禹飞 戚龙君 陶庭典 易建平 周国梁 《植物检疫》 北大核心 2003年第B09期4-7,共4页

本试验根据啤酒大麦加工工艺流程中所采用的药剂及浓度为参考，设计不同浓度的漂白粉、石灰、甲醛以及石灰加漂白粉，对TCK冬孢子分别处理4h，置3％琼脂培养基上，然后放入5℃生长箱内培养，观察药剂处理对孢子萌发率的影响，结果表明... 本试验根据啤酒大麦加工工艺流程中所采用的药剂及浓度为参考，设计不同浓度的漂白粉、石灰、甲醛以及石灰加漂白粉，对TCK冬孢子分别处理4h，置3％琼脂培养基上，然后放入5℃生长箱内培养，观察药剂处理对孢子萌发率的影响，结果表明：大麦加工工艺中所采用的漂白粉及石灰处理浓度不足以杀灭TCK冬孢子；其污水处理中采用0．05％浓度的甲醛有抑制孢子萌发的作用；而用清水浸泡的孢子在1个半月后仍有50％以上的萌发率。在啤酒大麦加工过程中，TCK冬孢子的流向主要为大麦下脚料，数量达到90％以上，而浸麦水和排放的污水中的孢子量很少。 展开更多

关键词 啤酒大麦 加工工艺 药剂处理 TCK冬孢子 杀灭作用 孢子流向 小麦矮腥黑穗病菌 大麦下脚料 浸麦水 污水

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最新植物病毒属名一览表

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作者 陶庭典 易建平 +1 位作者 沈禹飞 朱永芳 《植物检疫》 北大核心 2001年第2期122-125,共4页

关键词 植物病毒 属名 分类

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