河曲马睾丸组织成纤维细胞系的建立及生物学特性研究 被引量：13

1

作者 令世鑫 关伟军 +6 位作者 冯玉萍 乔自林 冯若飞 李明生 王家敏 沈武玲 马忠仁 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期10-14,共5页

采集河曲马睾丸组织,用热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型、乳酸脱氢同工酶谱及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果显示,河... 采集河曲马睾丸组织,用热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型、乳酸脱氢同工酶谱及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果显示,河曲马睾丸组织原代和传代细胞呈成纤维型,生长良好,最大增殖数量为4.32×105 mL-1,倍增时间为34.58h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性;染色体2 N=64,二倍体为85%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,共有4条谱带,其中LDH3浓度较高,活性较强;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。表明已成功建立河曲马睾丸组织成纤维细胞系,使河曲马这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 展开更多

关键词 河曲马 睾丸成纤维细胞 生物学特性

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禽流感研究进展 被引量：9

2

作者 王家敏 沈武玲 于国伟 《吉林农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期62-65,共4页

近年来禽流感的大范围流行,造成了巨大的经济损失并严重威胁着人类健康,因此禽流感的研究越来越被人们重视。本文就目前禽流感流行状况、检测方法进行综述。

关键词 禽流感 经济损失 研究进展

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MDCK细胞库的建立及其生物学特性研究 被引量：7

3

作者 王家敏 平玲 +4 位作者 沈武玲 徐水林 魏园园 马忠仁 乔自林 《山西农业科学》 2012年第12期1231-1234,1261,共5页

分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、... 分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明,4个来源的MDCK细胞均呈上皮型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体检测都为阴性;染色体2n=78;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库为开展MDCK细胞及流感细胞基质疫苗的研究提供了基础理论依据和细胞资源。 展开更多

关键词 MDCK细胞系 细胞库 生物学特性

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猪瘟疫苗的研究进展及ST细胞苗的研究现状 被引量：7

4

作者 平玲 魏园园 +4 位作者 王家敏 沈武玲 李倬 马忠仁 乔自 《当代畜禽养殖业》 2014年第3期3-6,共4页

本文综述了国内外猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)疫苗的研究进展,对传统疫苗和新型疫苗进行了概述,重点阐述了ST细胞苗的研究现状,为进一步研究开发猪瘟疫苗,有效控制猪瘟提供参考。

关键词 猪瘟 疫苗 免疫

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重组乙肝疫苗的研究进展 被引量：6

5

作者 平玲 魏园园 +3 位作者 王家敏 沈武玲 马忠仁 乔自林 《检验医学》 CAS 2013年第11期1055-1058,共4页

乙型病毒性肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染所致。HBV为嗜肝病毒，通过受感染者的血液或其他体液传播，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化。乙肝分急性和慢性2种。急性乙肝在成人中90％可自愈，慢性乙肝可发... 乙型病毒性肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染所致。HBV为嗜肝病毒，通过受感染者的血液或其他体液传播，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化。乙肝分急性和慢性2种。急性乙肝在成人中90％可自愈，慢性乙肝可发展成肝硬化，甚至肝癌。乙肝在世界各国均有流行，我国属于高流行区。据统计，全球现有20多亿人感染过HBV，其中（3．5～4）亿人为慢性HBV携带者，我国有1．2亿人， 展开更多

关键词 重组疫苗 乙型肝炎病毒 乙型病毒性肝炎

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Vero细胞的生长代谢特征及动力学模型构建

6

作者 平玲 顾朝剑 +4 位作者 吴易梅 张立敏 陈溢娟 杨净思 沈武玲 《生物技术》 CAS 2024年第4期448-453,共6页

[目的]解决Vero细胞在大规模高密度培养过程中营养物质耗尽,代谢产物积累导致细胞生长受限的问题。[方法]固定床生物反应器培养Vero细胞,通过换液培养和灌流培养两种方式比较细胞增殖、营养物质的消耗、代谢产物的生成,基于Logistic方程... [目的]解决Vero细胞在大规模高密度培养过程中营养物质耗尽,代谢产物积累导致细胞生长受限的问题。[方法]固定床生物反应器培养Vero细胞,通过换液培养和灌流培养两种方式比较细胞增殖、营养物质的消耗、代谢产物的生成,基于Logistic方程、Luedeking-Piret方程建立动力学模型,并根据实际检测数据,应用Origin软件进行非线性拟合。[结果]换液培养和灌流培养两种培养方式培养Vero细胞,两种培养方式达到的最大细胞密度分别是4.35×10^(6)/mL和4.34×10^(6)/mL,在对数生长期,细胞的生长速率分别是0.54 d^(-1)和0.67 d^(-1),葡萄糖的最大消耗量分别是14.95 g/d和17.1 g/d,谷氨酰胺的最大消耗量分别是2.725 g/d和3.7 g/d;Origin软件进行非线性拟合,得到的建模参数通过验证两种培养方式的细胞生长模型预测值与实验值拟合度较高。[结论]大规模培养Vero细胞,利用灌流培养的细胞生长速率较快,对营养物质的利用率较高,是理想的细胞培养方式;所建立的代谢动力学模型能较好的反应细胞在生长过程中的反应动力学过程。 展开更多

关键词 VERO细胞 换液培养 灌流培养 代谢物消耗 代谢物生成 ORIGIN软件 非线性拟合 动力学模型

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禽流感疫苗研究进展 被引量：5

7

作者 王家敏 乔自林 +6 位作者 令世鑫 冯玉萍 冯若飞 李明生 沈武玲 赵海源 马忠仁 《山西农业科学》 2012年第2期181-185,共5页

近年来,禽流感的大范围流行,造成了巨大的经济损失,并严重威胁着人类身体健康,其防制显得尤为重要。疫苗是预防禽流感的有效手段,在目前的实际应用中,主要以禽流感全病毒灭活疫苗为主,但由于其潜在的缺点,人们转向了其他类型疫苗的研制... 近年来,禽流感的大范围流行,造成了巨大的经济损失,并严重威胁着人类身体健康,其防制显得尤为重要。疫苗是预防禽流感的有效手段,在目前的实际应用中,主要以禽流感全病毒灭活疫苗为主,但由于其潜在的缺点,人们转向了其他类型疫苗的研制。对禽流感疫苗的研究状况进行了综述。 展开更多

关键词 禽流感 疫苗 研究进展

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ST细胞库的建立及其生物学特性鉴定 被引量：3

8

作者 平玲 魏圆圆 +3 位作者 王家敏 沈武玲 马忠仁 乔自林 《山西农业科学》 2013年第8期804-807,共4页

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进ST细胞系,扩大培养后液氮冻存建立了种子细胞库和工作细胞库;细胞复苏后对细胞的活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行了研究。结果表明,ST细胞系呈成纤维型,生... 从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进ST细胞系,扩大培养后液氮冻存建立了种子细胞库和工作细胞库;细胞复苏后对细胞的活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行了研究。结果表明,ST细胞系呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、病毒、支原体检测均为阴性;染色体为19对;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库,可为开展ST细胞及猪瘟疫苗的研究提供基础理论依据和细胞资源。 展开更多

关键词 ST细胞系 细胞库 生物学特性

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BHK-21细胞库的建立及其生物学特性鉴定 被引量：3

9

作者 付智财 王家敏 +8 位作者 令世鑫 沈武玲 平玲 魏园园 马桂兰 暴艳敏 徐水林 马忠仁 乔自林 《山西农业科学》 2013年第8期808-812,共5页

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)和中国兽医药品监察所(中监所)引进2株BHK-21细胞系,传代扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行研究。结果... 从美国典型培养物保藏中心(ATCC)和中国兽医药品监察所(中监所)引进2株BHK-21细胞系,传代扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行研究。结果显示,2个来源的BHK-21细胞系均呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性;染色体为21对,二倍体均占主体;外源质粒在该2株细胞系中能进行复制和表达。这可为开展BHK-21细胞系及口蹄疫疫苗的研究与开发提供基础理论依据和细胞资源。 展开更多

关键词 BHK-21细胞系 细胞库 生物学特性

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青海大通马耳缘组织成纤维细胞系的建立及生物学特性研究 被引量：3

10

作者 王家敏 乔自林 +6 位作者 冯若飞 李明生 冯玉萍 令世鑫 柏家林 沈武玲 马忠仁 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期7-9,166,共4页

为了建立青海大通马耳缘组织成纤维细胞系,使青海大通马这一重要种质资源在细胞水平上得以保存,试验采集青海大通马耳缘组织用组织块法制备原代细胞,通过差速消化法和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行了活... 为了建立青海大通马耳缘组织成纤维细胞系,使青海大通马这一重要种质资源在细胞水平上得以保存,试验采集青海大通马耳缘组织用组织块法制备原代细胞,通过差速消化法和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明:大通马耳缘组织原代和传代细胞呈成纤维型,生长良好,最大增殖浓度为4.27×105/mL,倍增时间为31.02 h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性;染色体2n=64,二倍体率为80%,占主体;红色荧光蛋白质粒在该细胞中能进行复制和表达。 展开更多

关键词 大通马 耳缘组织 成纤维细胞 生物学特性

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微载体培养技术在生物医药领域的应用 被引量：4

11

作者 沈武玲 王家敏 于国伟 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第8期43-44,45,共3页

微载体培养是一种新兴的大规模细胞培养技术,是当前贴壁依赖型细胞大规模培养的主要方法,该技术具有均相培养、平板培养、悬浮培养的优势,比表面积大,能有效提高贴壁性细胞密度。目前微载体培养技术已被广泛应用于一些具有重要价值的生... 微载体培养是一种新兴的大规模细胞培养技术,是当前贴壁依赖型细胞大规模培养的主要方法,该技术具有均相培养、平板培养、悬浮培养的优势,比表面积大,能有效提高贴壁性细胞密度。目前微载体培养技术已被广泛应用于一些具有重要价值的生物制品及细胞产品研发和生产领域,如病毒疫苗、干扰素、激素、单克隆抗体等。本文介绍了微载体培养技术在病毒疫苗、基因工程药物、组织工程等领域的应用。 展开更多

关键词 微载体 病毒疫苗 基因工程药物 组织工程

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两种凝胶过滤介质纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒效果的比较 被引量：2

12

作者 王虓宇 朱云 +3 位作者 沈武玲 平玲 蔡玮 孙明波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第10期1086-1091,1095,共7页

目的比较两种不同的凝胶过滤介质对Sabin株脊髓灰质炎病毒的分离纯化效果。方法将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒收获液各3批经超滤浓缩后,分别采用Sepharose CL-6B和Sepharose 6FF填料进行凝胶过滤纯化,分段收集各纯化峰,检测D抗... 目的比较两种不同的凝胶过滤介质对Sabin株脊髓灰质炎病毒的分离纯化效果。方法将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒收获液各3批经超滤浓缩后,分别采用Sepharose CL-6B和Sepharose 6FF填料进行凝胶过滤纯化,分段收集各纯化峰,检测D抗原及蛋白含量,计算比活性、蛋白去除率及抗原回收率,确定病毒峰收集范围。取抗原含量最高的病毒收获液,利用DEAE Sepharose FF离子交换填料进行纯化后,检测Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量。结果 Sepharose 6FF填料按6%柱体积上样进行凝胶纯化,纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒收获液抗原回收率均值分别为78.69%、78.03%和78.37%,与Sepharose CL-6B填料按3%柱体积上样(77.29%、78.60%和77.36%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。两种填料纯化的各型收获液再经离子交换纯化后,蛋白去除率、比活性、Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检测结果均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求,两种填料纯化的各型收获液比活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用Sepharose 6FF纯化的各型病毒纯化液抗原回收率和比活性与Sepharose CL-6B无明显差异,但可以减少纯化的上样次数,大幅提高纯化效率,可用Sepharose 6FF替换Sepharose CL-6B。 展开更多

关键词 脊髓灰质炎病毒 层析纯化 凝胶过滤 离子交换

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优化Ⅲ型脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中的增殖条件 被引量：2

13

作者 沈武玲 蔡玮 +7 位作者 平玲 张名 牛杰 高娜 彭佳 葛进 唐聪 周健 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1138-1142,共5页

型脊髓灰质炎病毒经下游灭活工艺后抗原损失量较大,可以通过优化上游培养工艺来提高病毒产量。为研究病毒接种时间、感染复数(MOI)和病毒收获时间对Ⅲ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度(CCID50)和D抗原的影响,优化Ⅲ型脊髓灰质炎病毒在Vero细... 型脊髓灰质炎病毒经下游灭活工艺后抗原损失量较大,可以通过优化上游培养工艺来提高病毒产量。为研究病毒接种时间、感染复数(MOI)和病毒收获时间对Ⅲ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度(CCID50)和D抗原的影响,优化Ⅲ型脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中的增殖条件,为生产及毒种制备提供指导依据,本研究以接种胞龄和MOI为病毒接种的两个变量条件,以病毒滴度和D抗原含量为病毒收获液中病毒产量的判定指标。先固定MOI,在不同胞龄的Vero细胞上以相同MOI接种Ⅲ型脊髓灰质炎病毒,根据病毒收获液中病毒产量的结果筛选出产毒量最高的接种胞龄范围。然后以最佳产毒胞龄为固定条件,暨Vero细胞生长至96h^144h,以不同MOI接种病毒,进一步筛选出产毒量最高的MOI范围。结果显示,当MOI=0.003时,Vero细胞培养48h、72h、96h、120h和144h种毒组均在种毒后70h完全病变,Vero细胞培养120h种毒所得收获液D抗原含量和病毒滴度均为最高,分别为(331±31)DU/mL、(8.04±0.14)lgCCID50/mL。接种胞龄固定在96h^144h范围,当MOI为0.001、0.01和0.1时,细胞完全病变时间分别为81h、66h和55h,所得病毒收获液的D抗原含量分别为(301.1±13.8)DU/mL、(303.7±15.6)DU/mL和(272.6±19.6)DU/mL,滴度分别为(7.88±0.13)lgCCID50/mL、(7.58±0.14)lgCCID50/mL和(7.75±0.13)lgCCID50/mL。本研究提示,相同MOI下,不同细胞胞龄种毒后细胞达到完全病变时间相同;细胞培养至平台期前后接种Ⅲ型脊髓灰质炎病毒所获得的收获液D抗原含量和感染性滴度均最高;MOI影响Ⅲ型病毒病变进程,但对病毒产量影响不大;90%以上Vero细胞发生病变、脱落时为最佳收获病毒时间点。 展开更多

关键词 VERO细胞 Ⅲ型脊髓灰质炎病毒 感染性滴度 D抗原

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欧拉羊胚肾细胞的分离培养和鉴定 被引量：2

14

作者 乔自林 李明生 +6 位作者 冯若飞 令世鑫 王家敏 沈武玲 冯玉萍 柏家林 马忠仁 《安徽农业科学》 CAS 2012年第2期850-851,980,共3页

[目的]分离培养并鉴定欧拉羊胚肾细胞,为该品种基因组文库构建和遗传多样性研究提供生物学材料。[方法]用胰蛋白酶热消化法分离并培养欧拉羊胚肾原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏... [目的]分离培养并鉴定欧拉羊胚肾细胞,为该品种基因组文库构建和遗传多样性研究提供生物学材料。[方法]用胰蛋白酶热消化法分离并培养欧拉羊胚肾原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。[结果]欧拉羊胚肾细胞呈成纤维型,复苏活力90%以上,生长良好,生长曲线呈"S",最大增殖浓度为4.61×105/ml,倍增时间26 h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性,连续传代培养在10代内生长正常。[结论]欧拉羊胚肾细胞分离培养成功,使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 展开更多

关键词 欧拉羊 胚肾细胞 培养 鉴定

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4种甲醛对Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活动力学的比较 被引量：2

15

作者 赵远 徐丽兰 +5 位作者 周健 张名 戴永娟 沈武玲 杨卉娟 孙明波 《兰州大学学报（医学版）》 CAS 2017年第3期1-6,共6页

目的观察4种甲醛对脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株的灭活效果。方法用4种甲醛(终浓度为92.5μg/mL)对3批脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株进行灭活,微量滴定法测定病毒感染性滴度进行病毒灭活验证实验,绘制灭活动力曲线;酶联免疫... 目的观察4种甲醛对脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株的灭活效果。方法用4种甲醛(终浓度为92.5μg/mL)对3批脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株进行灭活,微量滴定法测定病毒感染性滴度进行病毒灭活验证实验,绘制灭活动力曲线;酶联免疫吸附测定法检测灭活病毒液D抗原含量。结果 4种甲醛对3批脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株灭活后,病毒感染性滴度均成下降趋势。在37°C灭活1 d滴度直线下降1 000 CCID50/mL以上,灭活到第4天均检测不到病毒;灭活后的病毒液D抗原含量回收率均大于80%,且4种甲醛对3批脊髓灰质炎病毒灭活后抗原影响无差异(P>0.05)。结论 4种甲醛对脊髓灰质炎病毒Sabin株样品灭活彻底,对脊髓灰质炎病毒Sabin株的D抗原破坏小,能较好地保持疫苗的有效成分,为甲醛质量控制及供应商筛选提供依据。 展开更多

关键词 甲醛 Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗 病毒灭活 灭活动力学

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静置培养BHK-21细胞生长及代谢动力学研究 被引量：1

16

作者 付智财 王家敏 +3 位作者 沈武玲 令世鑫 马忠仁 乔自林 《黑龙江农业科学》 2014年第2期62-64,共3页

为研究BHK-21细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养方法,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:BHK-21细胞生长曲线呈S... 为研究BHK-21细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养方法,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:BHK-21细胞生长曲线呈S型,最大增殖密度为50.3×104 upf·mL-1,倍增时间为21.1h;对数生长期Gluc和Gln的比消耗速率为-3.79mg·(106 cells)-1·d-1和-9.95μmol·(106 cells)-1·d-1,Lac和NH4+的比生成速率为2.81mg·(106 cells)-1·d-1和6.30μmol·(106 cells)-1·d-1。 展开更多

关键词 BHK-21细胞 生长特征 代谢动力学 比代谢速率 比消耗速率 比生成速率

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兔抗鸡免疫血清的制备及效价测定 被引量：1

17

作者 王冬梅 沈武玲 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2010年第2期49-50,共2页

目的：制备高效价兔抗鸡免疫血清．方法：将抗原鸡血清经弗氏佐剂乳化，采用一定的免疫程序免疫家兔．末次加强免疫后7～9d取兔血清，应用双向免疫扩散法测定其效价；采用沉降与离心方法分离血清．结果：免疫家兔在全程免疫后都产生了... 目的：制备高效价兔抗鸡免疫血清．方法：将抗原鸡血清经弗氏佐剂乳化，采用一定的免疫程序免疫家兔．末次加强免疫后7～9d取兔血清，应用双向免疫扩散法测定其效价；采用沉降与离心方法分离血清．结果：免疫家兔在全程免疫后都产生了高效价抗体，效价达到1：32．结论：用抗原鸡血清免疫家兔，可成功制备高效价的免疫血清，为今后的实验教学和实验研究奠定了基础． 展开更多

关键词 免疫血清 双向免疫扩散法 效价测定

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滩羊肾和耳缘组织细胞的分离培养与鉴定 被引量：1

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作者 乔自林 令世鑫 +6 位作者 冯若飞 李明生 王家敏 沈武玲 冯玉萍 柏家林 马忠仁 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第11期64-66,共3页

用胰蛋白酶热消化分离并培养肾组织原代细胞,组织块法培养耳缘组织原代细胞,并通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞并用液氮保存,细胞复苏后进行了活力、形态、生长特性、微生物污染和染色体等检查。结果发现,滩羊肾和耳缘细胞呈成... 用胰蛋白酶热消化分离并培养肾组织原代细胞,组织块法培养耳缘组织原代细胞,并通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞并用液氮保存,细胞复苏后进行了活力、形态、生长特性、微生物污染和染色体等检查。结果发现,滩羊肾和耳缘细胞呈成纤维形,平均复苏活力94.5%和97.7%,生长均良好,生长曲线均呈"S",最大增殖浓度和倍增时间分别为2.8×105/mL、25.5 h和3.2×105/mL、24.2 h,保存的细胞经细菌、真菌、病毒和支原体检查为阴性,染色体为2n=54,二倍体占主体。本研究,滩羊肾和耳缘组织细胞成功分离培养并保存,使滩羊这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 展开更多

关键词 滩羊 肾细胞 耳缘细胞 培养 鉴定

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欧拉羊胎儿皮肤细胞的培养、保存与鉴定 被引量：1

19

作者 乔自林 冯若飞 +6 位作者 李明生 令世鑫 王家敏 沈武玲 冯玉萍 柏家林 马忠仁 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期7-10,共4页

用胰蛋白酶对欧拉羊胎儿皮肤组织进行热消化分离并培养原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代时用液氮保存,复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。结果显示,欧拉羊胎儿皮肤... 用胰蛋白酶对欧拉羊胎儿皮肤组织进行热消化分离并培养原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代时用液氮保存,复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。结果显示,欧拉羊胎儿皮肤细胞呈成纤维型,复苏活力93.5%以上,生长良好,细胞生长曲线呈"S"型,最大增殖量为3.31×105 mL-1,倍增时间为26.2h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性,连续传代培养在10代内生长正常。表明欧拉羊胎儿皮肤细胞分离培养成功,使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 展开更多

关键词 欧拉羊 皮肤细胞 培养 鉴定

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婴儿皮肤组织成纤维细胞系的建立及生物学特性

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作者 王家敏 沈武玲 +4 位作者 平玲 徐水林 赵彬 马忠仁 乔自林 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期100-105,共6页

采集婴儿皮肤组织,用组织块法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代液氮冻存,复苏细胞后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型、乳酸脱氢同工酶谱及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究.结果显示,婴儿皮... 采集婴儿皮肤组织,用组织块法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代液氮冻存,复苏细胞后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型、乳酸脱氢同工酶谱及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究.结果显示,婴儿皮肤组织细胞呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈"S"型,最大增值浓度为1.64×105/mL,倍增时间为63.12 h;细菌、真菌、支原体检测均为阴性;染色体2n=46,二倍体为86%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱显示有5条谱带;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达.表明已成功建立了婴儿皮肤组织成纤维细胞系,这为复合人工皮肤的组织工程学研究奠定了前期工作基础,也为皮肤相关疾病的研究提供了实验条件,因而具有重要的理论和实践意义. 展开更多

关键词 婴儿皮肤 成纤维细胞系 生物学特性

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