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重组猪源罗伊氏乳酸杆菌分泌表达牛乳铁蛋白肽对新生仔猪生长性能的影响以及抗腹泻病毒感染的保护作用研究 被引量：3
1
作者 汪昭睿 王雪莹 +10 位作者 解伟纯 宋丽影 王晓娜 崔文 姜艳平 周晗 王丽 乔薪瑗 徐义刚 李一经 唐丽杰 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期159-176,共18页
本试验旨在研究分泌表达牛乳铁蛋白肽(LFCA)的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌对新生仔猪生长性能的影响以及对引起仔猪腹泻的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染的保护作用。试验1:选取36头1日龄、体重约为1.5 kg的新生杜长大仔猪,随机分为3组,分别... 本试验旨在研究分泌表达牛乳铁蛋白肽(LFCA)的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌对新生仔猪生长性能的影响以及对引起仔猪腹泻的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染的保护作用。试验1:选取36头1日龄、体重约为1.5 kg的新生杜长大仔猪,随机分为3组,分别为重组菌组、空载菌组和对照组,每组12头仔猪,分别口服表达LFCA的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA/LR-CO21、含有空载体质粒的重组猪源罗伊氏乳杆菌pPG/LR-CO21和磷酸盐缓冲液(PBS)各4 mL,连续口服3 d,口服后观测时间为14 d。期间仔猪自由采食,记录各组仔猪体重变化和腹泻情况。试验2:选取30头1日龄、体重约为1.5 kg的新生杜长大仔猪,随机分为5组,分别口服1、3、6、9、12 mL半数组织培养感染剂量(TCID 50)为10-7.50/mL的TGEV。设置7 d时间为观察期,分析半数致死量的条件。试验3:另选取1日龄、体重约为1.5 kg的新生杜长大仔猪32头,随机分为4组,分别为重组菌组、空载菌组、对照组、TGEV感染组,每组8个重复,每个重复1头仔猪。试验组每天每头按照2×1010 CFU的剂量口服pPG-LFCA/LR-CO21、pPG/LR-CO21及等体积的PBS,连续口服饲喂1周,在8日龄按照半数致死量口服TGEV感染,感染7 d后进行样品采集。记录各组仔猪体重变化和腹泻情况;苏木精-伊红(HE)染色检测小肠绒毛高度及隐窝深度;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测仔猪血清中总免疫球蛋白G(IgG)和肠黏液总分泌型免疫球蛋白A(sIgA)抗体含量;实时荧光定量PCR检测紧密连接蛋白相关基因封闭蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)和紧密连接蛋白-1(ZO-1)以及炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及Toll样受体2(TLR2)的mRNA相对表达量;对仔猪盲肠内容物进行菌群结构分析。结果表明:口服重组猪源罗伊氏乳酸杆菌后,与对照组相比,重组菌组新生仔猪的平均日增重极显� 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白肽 重组猪源罗伊氏乳酸杆菌 黏膜免疫 抗TGEV感染
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黑龙江省部分地区蓝舌病血清学调查及血清1型病毒的分离鉴定 被引量：1
2
作者 李佳璇 汪昭睿 +10 位作者 独军政 王晓娜 邵怡岚 姜艳平 崔文 单智夫 周晗 王丽 乔薪瑗 李一经 唐丽杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期312-319,共8页
为了解蓝舌病(BT)在黑龙江省部分地区的流行情况,调查黑龙江省不同地区、不同季节牛、绵羊感染蓝舌病的血清学情况,用已建立的BT的竞争ELISA方法检测不同季节黑龙江省部分地区997份牛、绵羊血清,通过鸡胚及BHK21细胞分离病毒,并利用BT... 为了解蓝舌病(BT)在黑龙江省部分地区的流行情况,调查黑龙江省不同地区、不同季节牛、绵羊感染蓝舌病的血清学情况,用已建立的BT的竞争ELISA方法检测不同季节黑龙江省部分地区997份牛、绵羊血清,通过鸡胚及BHK21细胞分离病毒,并利用BT国际参考实验室创立的RT-PCR方法和间接免疫荧光方法鉴定病毒的血清型。结果表明,该地区牛、绵羊血清的阳性率分别为13.70%、12.65%,并初步鉴定黑龙江省部分地区流行的蓝舌病病毒毒株为BTV-1型,为黑龙江省蓝舌病的防控提供了理论依据并奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 血清学调查 分离鉴定 BTV-1
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重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析 被引量：2
3
作者 刘增素 汪昭睿 +8 位作者 王雪莹 姜艳平 崔文 王丽 乔薪瑗 周晗 徐义刚 李一经 唐丽杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第4期1449-1456,共8页
本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素(BoIFN-α)的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性,对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切... 本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素(BoIFN-α)的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性,对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切,将胶回收产物进行连接后,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,提取阳性质粒电转化乳酸乳球菌感受态细胞,用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达蛋白进行分析和鉴定,同时将重组乳酸乳球菌培养28 h后取上清用PEG20000浓缩10倍左右,进行体外抗病毒试验。结果显示,试验成功构建了重组乳酸乳球菌pAMJ399-BoIFN-α/MG1363,重组菌上清和沉淀均出现约20 ku的目的条带,表明重组蛋白以分泌的形式同时存在于培养液的上清和沉淀中。浓缩后的重组BoIFN-α(rBoIFN-α)上清与水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)同时作用,用MDBK/VSV系统以微量细胞病变抑制法测定rBoIFN-α的效价为1.02×106 U/L;通过Alamer Blue法分析可知,加入rBoIFN-α后对细胞的活性影响较小;间接免疫荧光试验可见加入rBoIFN-α后细胞无绿色荧光,说明rBoIFN-α有良好的抗病毒效果;实时荧光定量PCR结果进一步证实rBoIFN-α具有一定的抗病毒效果。本试验构建了能分泌表达rBoIFN-α的乳酸乳球菌,通过一系列的体外抗病毒试验证明rBoIFN-α具有良好的抗病毒活性,试验结果为rBoIFN-α作为抗病毒药物、免疫增强剂的开发、肽类用药及临床应用提供新途径。 展开更多
关键词 牛α干扰素(BoIFN-α) 乳酸乳球菌 分泌表达 抗病毒活性
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