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汉防己甲素衍生物HL-49协同顺铂或多柔比星促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡 被引量：4
1
作者 汤长宁 吴翱兰 +4 位作者 刘金河 张望明 杨爽 何志旭 刘杰麟 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期151-163,共13页
目的:研究汉防己甲素衍生物HL-49协同顺铂(cisplatin,DDP)或多柔比星(adriamycin,ADM)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:用不同浓度的HL-49、DDP、ADM单药以及HL-49联合DDP或ADM处理MDA-MB-... 目的:研究汉防己甲素衍生物HL-49协同顺铂(cisplatin,DDP)或多柔比星(adriamycin,ADM)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:用不同浓度的HL-49、DDP、ADM单药以及HL-49联合DDP或ADM处理MDA-MB-231细胞;采用MTT法检测细胞的增殖抑制率并计算Q值,平板克隆实验检测细胞的集落形成能力,FCM法检测细胞的凋亡率并计算Q值;蛋白质印迹法检测细胞中Bloom综合征解旋酶(Bloom’s symdrome helicase,BLM)、乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)和DNA修复关键酶Rad51以及凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 8、 caspase 10、Bax、p53和Bcl-2蛋白的表达水平。结果:与HL-49、DDP和ADM单药组相比,HL-49(1或2μmol/L)联合DDP(5或10μmol/L)或ADM(2或5μmol/L)组MDA-MB-231细胞的增殖抑制率均明显提高(P值均<0.05),其中HL-49联合DDP(单药浓度两两组合)4个浓度组的Q值分别为2.04、1.88、1.87和1.83,HL-49联合ADM的Q值分别为1.37、1.21、1.36和1.23,两药联用均具有协同效应。在平板克隆形成实验中,联合用药组细胞的集落形成数均较单药组明显减少(P值均<0.05)。HL-49(1或2μmol/L)联合DDP(5或10μmol/L)或ADM(2或5μmol/L)组MDA-MB-231细胞的凋亡率均高于单药组(P值均<0.05),其中HL-49联合DDP的Q值分别为1.20、1.35、1.70和2.06,HL-49联合ADM的Q值分别为1.48、1.17、1.99和2.13,提示两药联用有协同作用。HL-49联合DDP或ADM用药组MDA-MB-231细胞中的caspase 3、caspase 8、caspase 10和Bax蛋白的表达水平均较单药组明显上调(P值均<0.05),Rad51、BRCA1、BLM、p53和Bcl-2蛋白表达水平均明显下调(P值均<0.05)。结论:汉防己甲素衍生物HL-49与DDP或ADM联合用药均具有协同作用,且其联用抗肿瘤活性可能与诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡相关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 粉防己碱 抗肿瘤联合化疗方案 细胞增殖 细胞凋亡
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衰老小鼠肝脏、脾脏和骨髓中Blm解旋酶表达水平 被引量：2
2
作者 郑艺 杨爽 +2 位作者 黄晏军 汤长宁 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第7期767-772,共6页
目的:观察Blm解旋酶在衰老小鼠肝、脾及骨髓组织中的表达水平。方法:20只小鼠均分为正常对照组和衰老组,雌雄各半,采用D-gal致衰老的方法制备衰老小鼠模型;观察小鼠生存状态、监测体质量,检测小鼠血清中超氧化物气化酶(SOD)、丙二醛(MDA... 目的:观察Blm解旋酶在衰老小鼠肝、脾及骨髓组织中的表达水平。方法:20只小鼠均分为正常对照组和衰老组,雌雄各半,采用D-gal致衰老的方法制备衰老小鼠模型;观察小鼠生存状态、监测体质量,检测小鼠血清中超氧化物气化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量和小鼠肝脏中凋亡相关蛋白Bax的表达量;利用蛋白质印记法和石蜡切片免疫组织化学染色方法检测小鼠肝脏、脾脏和骨髓中Blm蛋白的表达。结果:衰老模型组小鼠生存状态变差,体质量增长低于对照组小鼠;与对照组小鼠比较,血清SOD活性降低、MAD含量升高、Bax蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);衰老模型组小鼠的脾脏H-E切片边缘区模糊,白髓与红髓界限模糊;胸腺H-E切片显示衰老模型组小鼠胸腺皮质、髓质界限模糊、胸腺细胞分布稀疏;衰老组小鼠Blm解旋酶在肝脏、脾脏和骨髓的表达均低于对照组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Blm解旋酶在衰老小鼠体内的表达降低,Blm解旋酶可能与衰老发生的机制相关。 展开更多
关键词 Blm解旋酶 D-半乳糖 衰老 超氧化物歧化酶 BAX蛋白
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汉防己碱衍生物诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡 被引量：1
3
作者 黄晏军 汤长宁 +2 位作者 杨爽 潘卫东 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第2期125-129,140,共6页
目的:探讨汉防己碱衍生物YZ-18对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、集落形成能力以及凋亡的影响,并分析可能的药物干预机制。方法:采用不同浓度汉防己碱衍生物YZ-18干预人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞后,通过MTT法检测细胞的增殖抑制率... 目的:探讨汉防己碱衍生物YZ-18对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、集落形成能力以及凋亡的影响,并分析可能的药物干预机制。方法:采用不同浓度汉防己碱衍生物YZ-18干预人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞后,通过MTT法检测细胞的增殖抑制率,集落形成实验检测细胞克隆形成能力,FCM法检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测细胞中BLM及乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白表达水平。结果:不同浓度的汉防己碱衍生物YZ-18处理细胞后,细胞增殖生长明显受到抑制(P <0. 05),细胞克隆能力明显减弱(P <0. 001),细胞凋亡率明显增加(P <0. 01),BLM蛋白表达上调,BRCA1蛋白表达下调,且具有浓度依赖性。结论:汉防己碱衍生物YZ-18可抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与BLM蛋白表达上调,BRCA1蛋白表达下调有关。 展开更多
关键词 汉防己碱 乳腺肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 BLM蛋白质 BRCA1蛋白质
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敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建
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作者 黄晏军 郑艺 +2 位作者 汤长宁 刘金河 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第5期503-507,共5页
目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sg... 目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用Cruiser^(TM)核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株。结果:测序结果表明重组质粒构建成功,免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低,与空白对照组相比,BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组。结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株。 展开更多
关键词 规律成簇间隔短回文重复序列系统 基因敲除 BLM基因 MDA-MB-231细胞 乳腺癌
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