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异种脱细胞真皮基质的制作和临床应用观察 被引量：93
1
作者 姜笃银 陈璧 +3 位作者 徐明达 胡大海 汤朝武 朱雄翔 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 2002年第1期15-18,共4页
目的　降低异种 (猪 )真皮组织的抗原性 ,探讨在临床复合移植的可行性。　方法　健康小猪中厚皮 ,半数经戊二醛交联后采用胰蛋白酶和TritonX 10 0等脱细胞处理 ,制成未交联(sADM0 )和交联型 (sADM1)网状脱细胞真皮基质 ,通过动物实验和... 目的　降低异种 (猪 )真皮组织的抗原性 ,探讨在临床复合移植的可行性。　方法　健康小猪中厚皮 ,半数经戊二醛交联后采用胰蛋白酶和TritonX 10 0等脱细胞处理 ,制成未交联(sADM0 )和交联型 (sADM1)网状脱细胞真皮基质 ,通过动物实验和临床应用 ,观察 2种sADM组织学变化和移植效果。　结果　 (1)兔皮下埋植sADM0 宿主细胞侵入迅速 ,炎症反应和组织降解明显 ,而sADM1炎症反应轻 ,皮片降解和收缩不明显 ;(2 ) 10例烧伤患者Ⅲ度创面和 1例胸部瘢痕切除后 ,以自体薄中厚皮 (ATS)和自体刃厚皮或超薄皮 (UTS)为对照 ,进行sADM +UTS复合移植 ,19块复合皮平均成活率为 78.9% ,与ATS组无显著差异。其中sADM0 +UTS组早期炎症反应和创面收缩明显 ,外观效果与UTS组相当 ;在sADM1+UTS组 ,早期炎症反应和创面收缩较轻 ,外观平整 ,触软 ,与ATS组移植效果相当 ,但有 3例患者的 6块创面在术后平均 (12 .8± 6 .9)周时 ,出现表皮破溃、sADM1外露和组织学严重的异物巨噬细胞反应。　结论　临床用交联型sADM作复合皮的真皮替代物 ,能减缓早期免疫反应 ,提高UTS移植效果 ,但仍不可避免迟发性异种排异反应。 展开更多
关键词 脱细胞真皮基质 异种基因 皮肤移植 烧伤 临床观察
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人视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏培养 被引量：38
2
作者 王琳 惠延年 +2 位作者 王雨生 惠宏襄 汤朝武 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期157-159,共3页
目的：建立人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞的冻存和复苏方法。方法：根据慢冻速融的细胞冻存原则，将原代或传代１～２次培养的人ＲＰＥ细胞，加入１０％二甲基亚砜作为保护剂，液... 目的：建立人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞的冻存和复苏方法。方法：根据慢冻速融的细胞冻存原则，将原代或传代１～２次培养的人ＲＰＥ细胞，加入１０％二甲基亚砜作为保护剂，液氮中冻存。复苏时将冻存细胞在６０℃、２分钟内融化，用台盼蓝染色测定细胞存活率，用抗人角蛋白抗体免疫细胞化学染色作细胞鉴定，每日计算细胞数以确定细胞生长曲线。结果：经冻存复苏后的ＲＰＥ细胞的存活率达９０％，生长状态与对照组无差异，抗人角蛋白染色阳性，细胞对数生长期在１～４天，群体细胞倍增期约为１．５５天。结论：人ＲＰＥ细胞液氮冻存可保持生物活性，复苏后生长良好，保持了细胞特征。这可提供细胞系，方便了体外实验，并可能作为ＲＰＥ细胞移植治疗一些眼底病的细胞库。 展开更多
关键词 色素上皮 组织保存 低温保存 复苏培养 视网膜
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复合皮移植的实验研究与临床应用 被引量：46
3
作者 陈璧 姜笃银 +5 位作者 贾赤宇 汤朝武 姚庆君 韩军涛 刘亚玲 徐明达 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 2004年第6期347-350,共4页
目的　寻求一种较理想的真皮替代物 ,用以修复全厚皮肤缺损创面。　方法　 (1 )将异体 /异种脱细胞真皮基质 (allo/xeno ADM) +自体刃厚皮组成复合皮 (CS),以自体刃厚皮作对照 ,采用一步移植法进行实验研究和临床研究。移植术后应用生... 目的　寻求一种较理想的真皮替代物 ,用以修复全厚皮肤缺损创面。　方法　 (1 )将异体 /异种脱细胞真皮基质 (allo/xeno ADM) +自体刃厚皮组成复合皮 (CS),以自体刃厚皮作对照 ,采用一步移植法进行实验研究和临床研究。移植术后应用生物化学及免疫学方法观察移植物抗原性的改变、表皮 真皮连接区 (DEJ)基底膜带结构的再形成情况。 (2 )在此基础上 ,应用前述CS移植技术治疗5 3例全厚皮缺损或瘢痕切除患者 ,观察术后皮片成活情况并作随访。　结果　CS一步法移植后的成活情况良好。 (1 )移植后 2 8周可见DEJ基底膜带重新形成 ,基底膜细胞呈极性生长并呈波浪形排列 ,真皮乳头与皮钉再生。allo ADM的抗原性明显低于xeno ADM,仅在术后早期有少数炎性细胞浸润 ,未见明显的免疫排斥反应。 (2 )移植于 5 3例患者的 70块CS中 ,6 5块完全存活占 92 9%,2块因更换敷料不当部分存活 ,3块因创面感染移植失败。患者最长随访时间为 8.5年 ,所移植的CS质地和色泽接近正常皮肤。　结论　allo/xeno ADM的抗原性很低 ,移植后能发挥长期的真皮支架或诱导组织再生的真皮“模板”作用。 展开更多
关键词 临床应用 移植后 基底膜 患者 ADM 抗原性 复合皮移植 生物化学 存活 细胞
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戊二醛交联的异种/异体脱细胞真皮基质的制作及临床应用观察(英文) 被引量：29
4
作者 姜笃银 陈璧 +4 位作者 贾赤宇 徐明达 朱雄翔 汤朝武 王波涛 《第四军医大学学报》 1999年第5期371-374,共4页
目的：为降低异种／异体真皮组织的抗原性，便于临床大面积烧伤患者复合皮（ＣＳ）移植的推广．方法：将胰蛋白酶和戊二醛等处理的、含基底膜成分的１８例人（ｈ－ＣＳ）和８例猪（ｓ－ＣＳ）无细胞真皮基质（ＡＤＭ）与自体刃厚表皮一... 目的：为降低异种／异体真皮组织的抗原性，便于临床大面积烧伤患者复合皮（ＣＳ）移植的推广．方法：将胰蛋白酶和戊二醛等处理的、含基底膜成分的１８例人（ｈ－ＣＳ）和８例猪（ｓ－ＣＳ）无细胞真皮基质（ＡＤＭ）与自体刃厚表皮一起重叠移植于１３例烧伤患者Ⅲ度切痂创面上，同时以邻近移植的自体刃厚皮（ＯＴＳ）和自体薄中厚皮（ＴＴＳ）为对照，观察无细胞真皮制作前后的组织结构变化和各组皮片移植的成活率及外观效果．结果：ＡＤＭ表面含薄层基底膜成分，组织内附件上皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等细胞消失．临床应用观察，ｈ－ＣＳ和ｓ－ＣＳ组移植的成活率与ＴＴＳ组和ＯＴＳ组比较无显著性差异，未见排异反应，外观平滑、近期无瘢痕增生；ＣＳ组未成活５例，可能与ＡＤＭ制作过厚（＞０．３ｍｍ）、组织内残留戊二醛等因素有关．结论：ＡＤＭ，尤其是ｓ－ＡＤＭ作为自体刃厚皮移植的载体，可能方便于大面积烧伤患者的ＣＳ移植，但其有一定的占位性，制作仍有待改进． 展开更多
关键词 脱细胞真皮基质 异种 异体 皮肤移植 烧伤 创面
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利用 Geneticin 纯化雪旺细胞的实验研究 被引量：19
5
作者 韩岩 汤朝武 +2 位作者 王剑波 鲁开化 丛国辉 《中华显微外科杂志》 CSCD 北大核心 1997年第4期277-280,共4页
目的：了解Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ在雪旺细胞培养过程中去除成纤维细胞的作用。方法：组织块法培养雪旺细胞，４～３天后应用含有１００μｇ／ｍｌ浓度的Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ培养液培养４～５天，再改用普通培养液进行培养，并进行细胞传代... 目的：了解Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ在雪旺细胞培养过程中去除成纤维细胞的作用。方法：组织块法培养雪旺细胞，４～３天后应用含有１００μｇ／ｍｌ浓度的Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ培养液培养４～５天，再改用普通培养液进行培养，并进行细胞传代，利用Ｓ－１００蛋白和ＧＦＡＰ（胶质纤维酸性蛋白）进行免疫组化染色，鉴定培养的雪旺细胞。结果：应用含有Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ的培养液培养雪旺细胞４～５天后成纤维细胞基本消失，雪旺细胞仍生长良好，并可传代培养。经Ｓ－１００蛋白和ＧＦＡＰ免疫组化染色鉴定培养的细胞基本为染色阳性的雪旺细胞。结论：应用含Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ的培养液培养雪旺细胞能够有效地去除成纤维细胞，获得纯度高、活力良好的雪旺细胞。 展开更多
关键词 雪旺细胞 细胞培养 周围神经
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不同条件对人游离毛囊培养的影响 被引量：19
6
作者 唐建兵 陈璧 +2 位作者 汤朝武 胡大海 徐明达 《西北国防医学杂志》 CAS 2001年第1期57-59,共3页
目的 :研究不同培养基对游离毛囊培养的影响。方法 :将美容手术后取下的头皮在无菌条件下分离成游离的毛囊培养于含血清或无血清的DMEM培训基、WilliamsE培养基中 ,观测毛囊的生长速度及形态学改变。结果 :在含血清DMEM培养基中毛囊生... 目的 :研究不同培养基对游离毛囊培养的影响。方法 :将美容手术后取下的头皮在无菌条件下分离成游离的毛囊培养于含血清或无血清的DMEM培训基、WilliamsE培养基中 ,观测毛囊的生长速度及形态学改变。结果 :在含血清DMEM培养基中毛囊生长速度较慢 ,扭曲变形早 ;而无血清DMEM培养基毛囊的生长天数明显延长 ,毛囊的层次结构及形态可长时间保持不变 ,但前 3天生长速度与有血清培养时无明显差异 ;使用WlliamsE培养基毛囊在前 3天生长速度明显加快。结论 :含血清的DMEM培养基不利于毛囊的生长 ,而WilliamsE培养基较适用于游离毛囊的培养。 展开更多
关键词 实验室诊断 毛囊 游离毛囊培养 条件 DMEM
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一种大鼠蒸气烫伤模型的建立 被引量：23
7
作者 姚庆君 贾赤宇 +4 位作者 陈璧 汤朝武 徐明达 丁国斌 王洪涛 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 2004年第3期168-170,共3页
目的　建立一种可控深度及面积的大鼠烫伤模型。　方法　用高压蒸气消毒锅及自制烫伤支架制作高压蒸气烫伤装置 ,用压力为 0 .12MPa(1MPa=75 0 0mmHg)、直径 2 .6cm的致伤孔上分别在大鼠背部烫 3、4、5、6、7、8、9、10s,每时相点 5个... 目的　建立一种可控深度及面积的大鼠烫伤模型。　方法　用高压蒸气消毒锅及自制烫伤支架制作高压蒸气烫伤装置 ,用压力为 0 .12MPa(1MPa=75 0 0mmHg)、直径 2 .6cm的致伤孔上分别在大鼠背部烫 3、4、5、6、7、8、9、10s,每时相点 5个创面。伤后 2 4h取标本行组织学观察 ,用Photoshop软件测量烫伤深度 ,并观察有无毛囊、汗腺附件受损、烫伤区被毛生长及创面愈合情况。　结果　烫伤深度与烫伤时间的变化呈正相关 (r =0.99)。浅Ⅱ、深Ⅱ、Ⅲ度烫伤模型的致伤时间分别为 3、5、7s。烫伤 7～ 10s创面深度虽逐渐加重 ,愈合时间却相近。　结论　该模型可以控制烫伤深度、面积 ,烧伤深度划分准确且操作简便 ,是研究创伤修复机制及评价创面用药的较好模型。 展开更多
关键词 烧伤 蒸气 动物模型 创伤 修复机制
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熊果苷对体外培养的人黑素细胞的作用 被引量：16
8
作者 丁国斌 陈璧 汤朝武 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第20期1846-1848,共3页
目的　研究熊果苷对体外培养的正常人表皮黑素细胞的作用效应 .方法　利用碱性成纤维细胞生长因子为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系 ,MTT法测定熊果苷对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,比色法测... 目的　研究熊果苷对体外培养的正常人表皮黑素细胞的作用效应 .方法　利用碱性成纤维细胞生长因子为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系 ,MTT法测定熊果苷对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,比色法测定黑素含量 ,并与曲酸及维生素 C磷酸酯的结果比较 .结果　熊果苷对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性呈浓度依赖性抑制 ,可显著减少黑素生成量 ,对黑素细胞活力影响很小 .结论　熊果苷对体外培养的人黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有显著抑制作用 。 展开更多
关键词 熊果苷 黑素细胞 一元酚单氧酶 黑素类 生物合成 体外培养 退色素药
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烧伤早期及丹参对中性粒细胞化学发光的影响 被引量：14
9
作者 朱雄翔 汤朝武 陈璧 《第四军医大学学报》 1999年第10期S060-S062,共3页
目的： 探讨烧伤早期患者血清（ＥＢＰＳ）调理的中性粒细胞（ＰＭＮ）对血管内皮细胞的损伤机制及丹参的保护作用，并对ＥＢＰＳ和丹参注射液（ＳＭ）调理ＰＭＮ的氧化活性及吞噬活性进行了研究． 方法： 以１００ ｍ Ｌ／ＬＥＢＰＳ，... 目的： 探讨烧伤早期患者血清（ＥＢＰＳ）调理的中性粒细胞（ＰＭＮ）对血管内皮细胞的损伤机制及丹参的保护作用，并对ＥＢＰＳ和丹参注射液（ＳＭ）调理ＰＭＮ的氧化活性及吞噬活性进行了研究． 方法： 以１００ ｍ Ｌ／ＬＥＢＰＳ， １００ ｍ Ｌ／ＬＥＢＰＳ加１０ ｍ Ｌ／ＬＳＭ 及１００ｍ Ｌ／Ｌ正常血清（ＮＨＳ）分别与健康人全血ＰＭＮ 孵育不同时间，检测ＰＭＮ 生物化学发光（ＰＭＮ－ＣＬ）． 结果： １００ｍ Ｌ／ＬＥＢＰＳ调理ＰＭＮ ０～１５ ｍ ｉｎ 与ＮＨＳ作用组比较，可促进ＰＭＮ－ＣＬ本底值和峰值；作用３０ｍ ｉｎ，两组无差异；作用１ ｈ，可抑制其本底值和峰值． ＳＭ 可明显降低ＰＭＮ－ＣＬ峰值． 结论： ＥＢＰＳ与ＰＭＮ作用，早期可激活ＰＭＮ 产生大量的氧自由基，进一步作用可抑制其氧化活性，由于早期烧伤血清调理ＰＭＮ可以产生大量的氧自由基，可能是造成血管内皮细胞损伤的重要原因，丹参可抑制其氧化活性． 展开更多
关键词 烧伤 中性粒细胞 化学发光 氧自由基 丹参
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复合皮片移植的实验研究 被引量：22
10
作者 陈璧 汤朝武 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第1期29-30,共2页
关键词 皮片移植 异体真皮 自体皮
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P物质上调正常人真皮成纤维细胞TGF-β_1的mRNA表达 被引量：13
11
作者 胡大海 陈璧 +3 位作者 朱雄翔 陶克 汤朝武 王剑波 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期234-236,共3页
目的　探讨神经肽P物质 (SubstanceP ,SP)与瘢痕形成间的调控关系。方法　体外分离培养正常人真皮成纤维细胞 ,分别加入SP及其受体特异性拮抗剂L 70 3,6 0 6乙酸盐 ,MTT法测定细胞生长增殖量 ;采用细胞爬片法培养细胞 ,加入SP对细胞作用... 目的　探讨神经肽P物质 (SubstanceP ,SP)与瘢痕形成间的调控关系。方法　体外分离培养正常人真皮成纤维细胞 ,分别加入SP及其受体特异性拮抗剂L 70 3,6 0 6乙酸盐 ,MTT法测定细胞生长增殖量 ;采用细胞爬片法培养细胞 ,加入SP对细胞作用后 ,应用TGF β1 mRNA特异性探针行细胞原位杂交 ,计算细胞的TGF β1 mRNA阳性表达率 ,并经图像分析测定阳性细胞TGF β1 mRNA的表达强度 ,分析SP与真皮成纤维细胞TGF β1 mRNA表达间的关系。结果　SP可促进体外培养的正常人真皮成纤维细胞的生长 ,其作用与SP浓度呈现依赖关系 ,当浓度达到 2 5ng ml时 ,刺激细胞生长的速率达最大值 ,可使细胞较对照组提前 4d融合 ;正常人真皮成纤维细胞受 2 5ng ml的SP刺激后TGF β1 mRNA的表达明显上调 ,4 8h后即可见细胞表达TGF β1 mRNA的阳性率及强度均显著增加 ;SP对正常人真皮成纤维细胞的上述效应 ,均可被其受体拮抗剂L 70 3,6 0 6乙酸盐所抑制。结论SP可促进正常人真皮成纤维细胞的生长增殖 ,同时上调细胞的TGF β1 mRNA表达 ; 展开更多
关键词 P物质 真皮成纤维细胞 TGF-Β1 MRAN 瘢痕增生
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降钙素基因相关肽对培养的血管内皮细胞缺氧再给氧的影响 被引量：10
12
作者 任雨笙 吴宗贵 +4 位作者 俞世强 马挺光 崔芳 汤朝武 汪钢 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期101-103,共3页
目的 :观察降钙素基因相关肽 (CGRP)对培养的人脐静脉血管内皮细胞缺氧再给氧损伤的影响。方法 :用培养的人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧再给氧模型 ,观察血管内皮细胞在缺氧再给氧状态下台盼兰摄取率、细胞内乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,钙... 目的 :观察降钙素基因相关肽 (CGRP)对培养的人脐静脉血管内皮细胞缺氧再给氧损伤的影响。方法 :用培养的人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧再给氧模型 ,观察血管内皮细胞在缺氧再给氧状态下台盼兰摄取率、细胞内乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,钙、镁含量和丙二醛 (MDA)含量的变化以及CGRP对培养的血管内皮细胞的影响。结果 :1× 10 -8mol/LCGRP可降低缺氧再给氧时血管内皮细胞的台盼兰摄取率、钙含量及MDA含量 ,降低LDH活性 ,减少细胞内镁的丢失。结论 :CGRP对缺氧再给氧的血管内皮细胞具有直接保护作用 ,其作用可能与CGRP具有抗脂质过氧化 ,减轻细胞内钙超载以及减少镁与酶的丢失有关。 展开更多
关键词 内皮 低氧 降钙素基因相关肽
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兔电击伤后全血中性粒细胞化学发光值的改变和意义 被引量：16
13
作者 汤朝武 陈壁 +1 位作者 钟德才 李艳 《第四军医大学学报》 1994年第5期354-355,共2页
目的：作者采用兔电击伤模型，对兔电击伤后全血中性粒细胞化学发光（ＰＭＮ－ＣＬ）的变化进行了检测，并对病情的自然变化进行了观察．方法：分别于电击伤前和电击伤后不同时间采取静脉血，测ＰＭＮ－ＣＬ的峰值，同时做白细胞及分类... 目的：作者采用兔电击伤模型，对兔电击伤后全血中性粒细胞化学发光（ＰＭＮ－ＣＬ）的变化进行了检测，并对病情的自然变化进行了观察．方法：分别于电击伤前和电击伤后不同时间采取静脉血，测ＰＭＮ－ＣＬ的峰值，同时做白细胞及分类计数．结果：电击伤后１～１５ｄＰＭＮ－ＣＬ持续在一个高水平上，与电击前相比上升非常显著（Ｐ＜０．０１）．结论：电击伤后中性粒细胞（ＰＭＮ）的免疫吞噬功能并未降低；由于ＰＭＮ产生过多的活性氧，可能造成对机体的再损伤． 展开更多
关键词 电击伤 中性粒细胞 化学发光 氧
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复合皮肤移植实验猪动物模型的建立 被引量：16
14
作者 姜笃银 陈璧 +1 位作者 汤朝武 白刚 《第四军医大学学报》 1996年第6期452-454,共3页
目的：为提高复合皮移植质量，寻找一种新的真皮替代物．方法：采用７头猪，１９块异体乳猪真皮加自体表皮（Ａ＋Ｃ），７块异体小猪真皮加自体表皮（Ｂ＋Ｃ）和８块自体表皮（Ｃ）三个组共３４块皮作移植实验，经２年多时间观察．结果... 目的：为提高复合皮移植质量，寻找一种新的真皮替代物．方法：采用７头猪，１９块异体乳猪真皮加自体表皮（Ａ＋Ｃ），７块异体小猪真皮加自体表皮（Ｂ＋Ｃ）和８块自体表皮（Ｃ）三个组共３４块皮作移植实验，经２年多时间观察．结果：三种皮片移植效果依次下降，其中经酶处理的冷冻异体乳猪真皮＋自体刃厚表皮复合移植成活率高，无明显排斥反应，皮片外观近似正常． 展开更多
关键词 皮肤移植 自体表皮 异体真皮 动物模型
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人胎儿表皮干细胞的体外分离培养及基因转染 被引量：13
15
作者 丁国斌 陈璧 +2 位作者 韩军涛 汤朝武 王波涛 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 2003年第1期18-21,共4页
目的　探讨人胎儿表皮干细胞体外分离培养的方法以及作为体外基因转染靶细胞的可行性。　方法　利用Ⅳ型胶原快速贴附法分离人胎儿表皮干细胞 ,以人胎儿成纤维细胞条件培养液配制表皮干细胞培养基 ,通过角蛋白 19(K19)和整合素 β1免疫... 目的　探讨人胎儿表皮干细胞体外分离培养的方法以及作为体外基因转染靶细胞的可行性。　方法　利用Ⅳ型胶原快速贴附法分离人胎儿表皮干细胞 ,以人胎儿成纤维细胞条件培养液配制表皮干细胞培养基 ,通过角蛋白 19(K19)和整合素 β1免疫组化染色、细胞周期分析及克隆形成率测定 ,对培养细胞进行鉴定。采用脂质体介导法 ,以含血管内皮细胞生长因子 16 5 (VEFG16 5 )基因片段的真核表达载体 pcDNA3 .1( pcDNA3.1/VEGF16 5 )转染培养细胞 ;采用病毒载体介导法 ,以含报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)的重组腺相关病毒载体 (raav/GFP)转染培养细胞。应用免疫组化染色及荧光显微镜观察检测转染效果。　结果　人胎儿表皮干细胞呈明显克隆性生长 ,克隆形成率高 ,G1期细胞比例明显高于普通基底层角质细胞 ,K19和整合素 β1免疫组化染色呈强阳性。pcDNA3 .1/VEGF16 5转染的表皮干细胞VEGF16 5免疫组化染色阳性 ,raav/GFP转染的表皮干细胞呈现强荧光。　结论　利用Ⅳ型胶原快速贴附法及人胎儿成纤维细胞条件培养基 ,可初步实现人胎儿表皮干细胞的分离培养。以脂质体为介导或以腺相关病毒为载体进行人胎儿表皮干细胞的体外基因转染是可行的。 展开更多
关键词 人胎儿 表皮干细胞 体外分离 体外培养 基因转染
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冷冻异体胎儿真皮-自体表皮复合移植在Ⅲ度烧伤切痂创面的应用 被引量：11
16
作者 姜笃银 陈璧 +1 位作者 徐明达 汤朝武 《第四军医大学学报》 1997年第5期461-463,共3页
目的：为观察异体胎儿真皮临床应用的可行性．方法：通过１９例经胰蛋白酶处理的冷冻异体胎儿真皮与自体表皮重组复合皮，并以单纯自体表皮为对照，作移植实验和动态观察．结果：复合皮移植后抗感染力强，成活率与自体表皮移植组无显著... 目的：为观察异体胎儿真皮临床应用的可行性．方法：通过１９例经胰蛋白酶处理的冷冻异体胎儿真皮与自体表皮重组复合皮，并以单纯自体表皮为对照，作移植实验和动态观察．结果：复合皮移植后抗感染力强，成活率与自体表皮移植组无显著性差异（Ｐ＞０．０５），且可防止组织收缩和疤痕形成．同时提出异体胎儿真皮移植首先应满足血型的一致，否则对复合皮质量产生影响．结论：经胰蛋白酶处理的冷冻异体胎儿真皮可作自体表皮移植的载体，是理想的真皮替代物．临床应用异体胎儿真皮一次性完成复合皮移植术，提高了植皮外形效果，节省了患者的皮源，可以临床推广应用． 展开更多
关键词 烧伤 切痂创面 皮肤移植 胎儿 异体真皮 表皮
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野生型p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及代谢影响的实验研究 被引量：12
17
作者 韩军涛 陈璧 +1 位作者 刘淑娟 汤朝武 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 2003年第4期226-228,共3页
目的　探讨野生型 p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞 (keloidfibroblasts,KFb)生长增殖及DNA合成代谢的影响。　方法　构建含p16cDNA片段的真核表达载体 pcDNA3 p16 ,采用脂质体介导的基因转染法 ,将其导入体外培养的KFb中 ,并用G4 18筛... 目的　探讨野生型 p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞 (keloidfibroblasts,KFb)生长增殖及DNA合成代谢的影响。　方法　构建含p16cDNA片段的真核表达载体 pcDNA3 p16 ,采用脂质体介导的基因转染法 ,将其导入体外培养的KFb中 ,并用G4 18筛选阳性克隆。随后对已转染及未转染的KFb进行免疫细胞化学染色 ,观察p16蛋白的表达 ,并通过绘制细胞生长曲线及采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷 (3 H TdR)掺入法 ,比较转染前后细胞在生长增殖及DNA合成代谢方面的变化。结果　经酶切鉴定证实 ,pcDNA3 p16构建成功。已转染的KFb经G4 18筛选 ,出现阳性克隆 ,并有 p16蛋白表达 ;与正常KFb比较 ,其生长增殖速度明显减缓 ,DNA合成代谢能力明显减弱 (P <0 .0 5 )。　结论　p16基因对KFb的生长增殖及DNA合成代谢有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 野生型p16基因 人瘢痕疙瘩 成纤维细胞生长 实验 DNA合成代谢 细胞增殖
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培养的自体角朊细胞膜片与异体真皮重组复合皮移植的实验研究 被引量：13
18
作者 崔正军 陈璧 +2 位作者 汤朝武 姜笃银 施新猷 《中华整形烧伤外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期109-111,161,共3页
目的探讨用自体培养的角朊细胞膜片(CKS)及异体真皮重组复合皮移植后的成活机理和组织学变化。方法以30只 SD 大鼠为实验动物,分为自体 CKS 组硬异体复合皮组。术后90天内定期检查并取活检标本作组织学检测,观察移植物存活情况,伤口愈合... 目的探讨用自体培养的角朊细胞膜片(CKS)及异体真皮重组复合皮移植后的成活机理和组织学变化。方法以30只 SD 大鼠为实验动物,分为自体 CKS 组硬异体复合皮组。术后90天内定期检查并取活检标本作组织学检测,观察移植物存活情况,伤口愈合,表皮-真皮连接区的重建和异体真皮的归宿等。结果自体角朊细胞膜片成活尚好,但其质地及组织学结构欠佳,且太薄易磨损和破溃;胶原纤维增生并排列错乱,创面明显收缩。异体复合皮组不仅移植物成活好,且质地、组织结构、创面收缩及抗磨损等方面均优于 CKS 组,移植后90天仍能看到异体真皮成分,未见明显的免疫排斥反应。结论体外培养的自体角朊细胞膜片不适用于全层皮肤缺损的创面,而异体真皮复合皮有潜在的发展前景。 展开更多
关键词 异体真皮 复合皮 CKS 皮肤移植 实验
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ADSCs培养上清液对成纤维细胞的生物学影响 被引量：12
19
作者 折涛 胡大海 +5 位作者 张万福 张军 刘佳琦 蔡维霞 朱华宇 汤朝武 《中国美容医学》 CAS 2008年第12期1766-1769,共4页
目的:分离培养脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),探讨其培养上清液对成纤维细胞的生物学作用。方法:从人腹部脂肪组织中分离、培养ADSCs,收集其上清液培养人成纤维细胞。MTT法测定成纤维细胞的增殖;AnexinⅤ/PI双染色法测... 目的:分离培养脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),探讨其培养上清液对成纤维细胞的生物学作用。方法:从人腹部脂肪组织中分离、培养ADSCs,收集其上清液培养人成纤维细胞。MTT法测定成纤维细胞的增殖;AnexinⅤ/PI双染色法测定成纤维细胞的凋亡;体外细胞划痕法测定其迁移能力。结果:培养获得ADSCs,ADSCs培养上清液实验组成纤维细胞的增殖及迁移均明显大于对照组(P<0.05或P<0.01);同时其凋亡率也低于对照组(P<0.05)。结论:ADSCs培养上清液能促进成纤维细胞的增殖、迁移及抑制凋亡发生。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 成纤维细胞 增殖 迁移 凋亡
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降钙素基因相关肽对缺氧状态下培养的血管内皮细胞的影响 被引量：6
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作者 俞世强 任雨笙 +3 位作者 汪钢 汤朝武 马挺光 刘维永 《第四军医大学学报》 2000年第5期630-632,共3页
目的　观察不同浓度的降钙素基因相关肽 ( CGRP)对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞的影响 .方法　用培养的人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧模型 ,观察血管内皮细胞在缺氧状态下细胞膜流动性 ,5 1铬释放率 ,台芬蓝摄取率和细胞内钙 ,镁含... 目的　观察不同浓度的降钙素基因相关肽 ( CGRP)对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞的影响 .方法　用培养的人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧模型 ,观察血管内皮细胞在缺氧状态下细胞膜流动性 ,5 1铬释放率 ,台芬蓝摄取率和细胞内钙 ,镁含量的变化以及 1× 10 - 9,1× 10 - 8,1× 10 - 7mol.L- 1 CGRP对血管内皮细胞的影响 .结果　 1× 10 - 9,1×10 - 8,1× 10 - 7mol.L- 1 CGRP可降低缺氧 12 0 min时细胞膜流动性 ,5 1 铬释放率 ,台芬蓝摄取率及减少细胞内镁的丢失 ,1× 10 - 8mol.L- 1 CGRP的效果最好 .结论　 CGRP对血管内皮细胞缺氧损伤具有直接保护作用 。 展开更多
关键词 缺氧 血管内皮细胞 降钙素基因相关肽
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