通过人参水提液(water extract of Ginseng,WEG)、人参多糖(Ginseng polysaccharides,GPS)、人参皂苷(Ginseng total saponins,GTS)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)与肿瘤细胞共培养体系中肺癌A549细胞增殖、迁...通过人参水提液(water extract of Ginseng,WEG)、人参多糖(Ginseng polysaccharides,GPS)、人参皂苷(Ginseng total saponins,GTS)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)与肿瘤细胞共培养体系中肺癌A549细胞增殖、迁移和细胞骨架的影响研究,探讨人参抗肿瘤的作用机制。建立THP-1诱导的TAMs体外模型,采用上清液共培养体系,以肺癌A549细胞为研究对象,并采用MTT法观察不同浓度的WEG、GPS、GTS作用于共培养体系中对肺癌A549细胞增殖的影响及量效关系;通过实时细胞分析技术(RTCA)检测WEG、GPS、GTS对共培养体系中肺癌A549细胞迁移能力的影响,免疫荧光高内涵细胞分析系统(HCS)检测细胞骨架蛋白F-actin的表达。结果显示:WEG能明显抑制共培养体系中A549细胞的增殖、迁移能力和减少骨架面积及微丝数量(P<0.01);GPS能明显抑制共培养体系中A549细胞迁移能力、骨架面积和微丝数量(P<0.01),但对A549细胞的增殖作用无明显影响;GTS能明显抑制共培养体系中A549细胞的增殖(P<0.01),而对A549细胞的迁移能力、骨架面积和微丝无影响。通过对WEG、GPS、GTS的研究对比,发现人参及两种主要成分对TAMs共培养体系中肺癌A549细胞都有影响,但作用存在差异,提示人参抗肿瘤作用与其多成分对肿瘤免疫微环境调控相关,且不同成分间可能存在协同关系。展开更多
目的进行人参总皂苷(ginseng total saponins,GTS)多克隆抗体的制备,并用不同方法进行验证。方法首先在D101大孔吸附树脂纯化的基础上,采用阴阳离子交换树脂的方法进行人参皂苷高纯提取物的制备,香草醛-硫酸比色法估测人参总皂苷的含量...目的进行人参总皂苷(ginseng total saponins,GTS)多克隆抗体的制备,并用不同方法进行验证。方法首先在D101大孔吸附树脂纯化的基础上,采用阴阳离子交换树脂的方法进行人参皂苷高纯提取物的制备,香草醛-硫酸比色法估测人参总皂苷的含量;然后通过过碘酸钠法构建人参总皂苷和牛血清白蛋白(BSA)的偶联物作为抗原制备得到人参总皂苷多抗;使用Protein A/G琼脂糖纯化和抗原柱双纯化抗体;最后用免疫细胞化学和生物膜层干涉(biological membrane layer interference,BLI)技术验证抗体。结果得到高纯度的人参总皂苷;SDS-PAGE表明抗原GTS-BSA偶联物制备成功;ELISA法检测受试组效价为(29.52±4.31),亲和树脂纯化后得到较纯多抗;生物膜层干涉技术表明人参总皂苷多抗与人参总皂苷、人参皂苷Re、Rg1、Rh1、Rh2、原人参二醇、F1、化合物K、原人参三醇的亲和力分别为3.99×10^(-7)、4.69×10^(-9)、2.59×10^(-9)、2.40×10^(-6)、1.62×10^(-4)、2.64×10^(-7)、1.66×10^(-10)、1.08×10^(-7)和1.32×10^(-6);免疫细胞化学(ICC)从细胞学水平上验证了抗体的有效性。结论人参总皂苷多抗的效价和特异性较高,可为下一步研究人参总皂苷在脑中的分布做好铺垫。展开更多
文摘通过人参水提液(water extract of Ginseng,WEG)、人参多糖(Ginseng polysaccharides,GPS)、人参皂苷(Ginseng total saponins,GTS)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)与肿瘤细胞共培养体系中肺癌A549细胞增殖、迁移和细胞骨架的影响研究,探讨人参抗肿瘤的作用机制。建立THP-1诱导的TAMs体外模型,采用上清液共培养体系,以肺癌A549细胞为研究对象,并采用MTT法观察不同浓度的WEG、GPS、GTS作用于共培养体系中对肺癌A549细胞增殖的影响及量效关系;通过实时细胞分析技术(RTCA)检测WEG、GPS、GTS对共培养体系中肺癌A549细胞迁移能力的影响,免疫荧光高内涵细胞分析系统(HCS)检测细胞骨架蛋白F-actin的表达。结果显示:WEG能明显抑制共培养体系中A549细胞的增殖、迁移能力和减少骨架面积及微丝数量(P<0.01);GPS能明显抑制共培养体系中A549细胞迁移能力、骨架面积和微丝数量(P<0.01),但对A549细胞的增殖作用无明显影响;GTS能明显抑制共培养体系中A549细胞的增殖(P<0.01),而对A549细胞的迁移能力、骨架面积和微丝无影响。通过对WEG、GPS、GTS的研究对比,发现人参及两种主要成分对TAMs共培养体系中肺癌A549细胞都有影响,但作用存在差异,提示人参抗肿瘤作用与其多成分对肿瘤免疫微环境调控相关,且不同成分间可能存在协同关系。
