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变异链球菌LuxS缺陷株甲基循环通路的恢复构建 被引量:2
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作者 王玉霞 高丽 +5 位作者 江文 马瑞 唐子圣 朱彩莲 何智妍 黄正蔚 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期385-390,共6页
目的:以变异链球菌LuxS缺陷株为模型,构建其密度感应缺陷的甲基循环恢复株。方法:以LuxS为阳性表达对照,通过在变异链球菌LuxS缺陷株中异源表达SahH,实现其代谢通路的恢复构建。通过Western印迹、反转录PCR和信号分子AI-2分泌检测,验证... 目的:以变异链球菌LuxS缺陷株为模型,构建其密度感应缺陷的甲基循环恢复株。方法:以LuxS为阳性表达对照,通过在变异链球菌LuxS缺陷株中异源表达SahH,实现其代谢通路的恢复构建。通过Western印迹、反转录PCR和信号分子AI-2分泌检测,验证目的蛋白的表达。采用SAS8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Western印迹检测2种蛋白在大肠杆菌中均得到正确表达,验证了克隆载体的正常表达能力;反转录PCR验证了变异链球菌LuxS缺陷株中luxS及sahH mRNA的存在;发光实验证实LuxS阳性表达对照株AI-2的分泌能力恢复。结论:成功构建变异链球菌LuxS缺陷的代谢恢复株,为探讨LuxS的调控机制提供了分子生物学工具及实验对照。 展开更多
关键词 变异链球菌 生物膜 密度感应 LUXS SahH
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干细胞表面标志物在牙髓干细胞中的表达 被引量:2
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作者 高丽 江文 +3 位作者 牛晨光 何智妍 朱彩莲 黄正蔚 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2015年第3期257-262,共6页
目的:探讨磁珠分选后培养的人牙髓干细胞的表面标记抗原随培养代数增加的变化情况。方法:改良组织块法培养的人牙髓细胞,至第2代(P2)时,用磁珠方法分选出STRO-1阳性细胞,用流式细胞术分别检测P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8代的干细胞表面... 目的:探讨磁珠分选后培养的人牙髓干细胞的表面标记抗原随培养代数增加的变化情况。方法:改良组织块法培养的人牙髓细胞,至第2代(P2)时,用磁珠方法分选出STRO-1阳性细胞,用流式细胞术分别检测P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8代的干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105、CD166、STRO-1。取P3代细胞,分别进行成骨诱导和成脂诱导。21 d后,分别行茜素红染色和油红O染色,观察矿化物形成情况和脂滴形成情况,同时以未诱导细胞为对照。结果:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,CD73、CD90、CD105、CD166的表达比较稳定,茜素红染色可见矿化结节形成,油红O染色显示形成大量脂滴。结论:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,其他干细胞标志物比较稳定。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 磁珠分选 间充质干细胞 表面标志物
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转导hTERT基因致人牙髓干细胞永生化的研究 被引量:2
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作者 高丽 王玉霞 +3 位作者 江文 何智妍 朱彩莲 马瑞 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2015年第2期135-140,共6页
目的 :建立永生化人牙髓干细胞系(human dental pulp stem cell,h DPSC),供口腔医学临床和基础研究使用。方法:原代培养人牙髓细胞并筛选牙髓干细胞,以慢病毒为载体,导入端粒酶反转录酶基因(h TERT)全长c DNA,经筛选得到阳性克隆。体外... 目的 :建立永生化人牙髓干细胞系(human dental pulp stem cell,h DPSC),供口腔医学临床和基础研究使用。方法:原代培养人牙髓细胞并筛选牙髓干细胞,以慢病毒为载体,导入端粒酶反转录酶基因(h TERT)全长c DNA,经筛选得到阳性克隆。体外连续传代,应用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Western blot)检测h TERT的整合和表达情况。结果 :成功地将h TERT基因转入人牙髓干细胞,得到的转化细胞端粒酶表达阳性,增殖旺盛,至今已传至第35代。结论:转导外源性h TERT基因可以导致人牙髓干细胞永生化。 展开更多
关键词 端粒酶反转录酶基因 牙髓干细胞 永生化
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牙髓干细胞多项分化潜能的研究及应用进展
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作者 夏亮 江文 邹多宏 《医学综述》 CAS 2022年第11期2086-2091,共6页
再生医学通过利用干细胞分化为特定细胞类型的能力来替代和恢复组织功能。干细胞是具有自我更新和无限克隆能力的原始细胞,参与组织发育、维持稳态及组织缺损修复等多种生理过程。牙髓内含有丰富的牙源性成体干细胞即牙髓干细胞(DPSC),... 再生医学通过利用干细胞分化为特定细胞类型的能力来替代和恢复组织功能。干细胞是具有自我更新和无限克隆能力的原始细胞,参与组织发育、维持稳态及组织缺损修复等多种生理过程。牙髓内含有丰富的牙源性成体干细胞即牙髓干细胞(DPSC),其具有增殖活跃和自我更新能力。DPSC具有很强的多谱系分化能力,包括成骨分化、牙源性分化、成脂分化、成软骨分化、神经源性分化等,目前已经广泛应用于组织工程及再生医学领域。 展开更多
关键词 再生医学 干细胞 牙髓干细胞 组织工程
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变形链球菌LuxS调控功能的甲基代谢机制研究 被引量:1
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作者 王玉霞 高丽 +3 位作者 江文 朱彩莲 何智妍 黄正蔚 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期530-534,共5页
目的 研究甲基代谢通路在变形链球菌LuxS相关调控功能中的作用,为探讨变形链球菌LuxS调控机制及临床生物膜防龋策略的制定提供依据.方法 以构建的变形链球菌代谢SmUA159野生株(WT)及LuxS缺陷株(KO)、甲基代谢恢复株(KO-S)、空质... 目的 研究甲基代谢通路在变形链球菌LuxS相关调控功能中的作用,为探讨变形链球菌LuxS调控机制及临床生物膜防龋策略的制定提供依据.方法 以构建的变形链球菌代谢SmUA159野生株(WT)及LuxS缺陷株(KO)、甲基代谢恢复株(KO-S)、空质粒对照株(KO-P)为研究模型,实时PCR观察生物膜及耐酸相关基因转录水平;甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法和共聚焦显微镜分别观察生物膜数量和结构;以不同pH环境下变形链球菌生物膜量的变化为指标,观察不同生物膜状态下各菌株的耐酸能力.结果 实时PCR结果发现,4种被检测基因smu.44、smu.46、smu.238及gtfD在野生株WT的表达水平分别为1.289±0.051、1.694±0.140、1.565±0.107及1.667±0.196,在缺陷株KO中的表达水平分别为1.001±0.045、1.007±0.151、1.000±0.021及1.012±0.196,4种基因在KO中的表达均显著下调(P<0.05);4种基因在KO-S中的表达水平分别为4.662±0.091、5.019±0.258、3.462± 0.029及3.071 ±0.136,均显著高于KO及WT中的表达水平(P<0.05).4种菌株形成的生物膜数量(A值)分别为WT:1.592±0.213、KO:0.939±0.029、KO-S:2.177±0.226、KO-P:1.020±0.093,KO及KO-P的生物膜数量均显著小于WT (P<0.05),KO-S的生物膜数量显著高于其他3种菌株(P<0.05).WT生物膜结构均匀致密,KO、KO-S的生物膜可见大量较大团块及宽而长的沟裂,KO-S生物膜中大团块消失,代之以致密小颗粒,沟裂数量变少且较窄而短.耐酸实验显示,pH=4.3时KO及KO-P的生物膜减少量大于WT及KO-S.结论 与野生株相比,变形链球菌LuxS缺陷株生物膜形成及耐酸能力在基因及生理水平均存在异常;甲基代谢循环恢复后,被检测基因变化恢复,生物膜数量完全恢复,生物结构部分恢复,耐酸能力得到恢复;甲基代谢循环通路在LuxS对变形链球菌生物膜及耐酸能力的调控中发挥重要作用. 展开更多
关键词 链球菌 变异 生物膜 基因表达调控 细菌 甲基代谢循环
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sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内表达对胞外多糖合成的影响 被引量:1
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作者 胡戌琛 王玉霞 +3 位作者 江文 牛晨光 林文珍 黄正蔚 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期254-258,共5页
目的·研究sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内的表达对其胞外多糖合成的影响。方法·以构建的LuxS缺陷株转有sahH基因的sahH+LuxS-SmUA159、LuxS缺陷株转有空质粒的PIB169+LuxS-SmUA159(背景对照)及变异链球菌SmUA159野生株为... 目的·研究sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内的表达对其胞外多糖合成的影响。方法·以构建的LuxS缺陷株转有sahH基因的sahH+LuxS-SmUA159、LuxS缺陷株转有空质粒的PIB169+LuxS-SmUA159(背景对照)及变异链球菌SmUA159野生株为研究模型。实时荧光定量PCR观察胞外多糖合成相关基因的转录水平,蒽酮法观察生物膜胞外多糖合成情况。结果·与SmUA159和PIB169+LuxS-SmUA159菌株相比,sahH基因转入株sahH+LuxS-SmUA159的4种被检测基因(gtfA、gtfB、gtfC、gtfD)中,gtfA和gtfD转录水平有显著差异(均P<0.05),而gtfB和gtfC无明显差异。SmUA159、PIB169+LuxS-SmUA159和sahH+LuxS-SmUA159胞外多糖合成量无明显差异。结论·sahH基因转入可影响变异链球菌胞外多糖合成相关基因的表达,但不影响细菌总体胞外多糖合成量。 展开更多
关键词 变异链球菌 胞外多糖 基因表达 细菌 sahH基因
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