文摘目的:研究环状RNA circ-Crebbp对Schwann细胞增殖和迁移的影响。方法:(1)采用生物信息学技术对circ-Crebbp序列特性进行分析。(2)提取大鼠坐骨神经总RNA,用RNase R消化,进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳以证实circ-Crebbp为环状RNA。(3)通过核质分离和实时定量PCR(quantitative real time PCR,qRT-PCR)检测circ-Crebbp在原代Schwann细胞核质中的分布。使用qRT-PCR检测损伤后不同时间点(0、1、4、7、14 d)坐骨神经中circ-Crebbp的表达变化。(4)通过5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU)实验和transwell迁移实验观察circ-Crebbp对Schwann细胞增殖、迁移的影响。结果:(1)circ-Crebbp全长710 nt,由Crebbp基因的2号外显子独立环化形成,主要在Schwann细胞的细胞质中表达。(2)在坐骨神经损伤后,circ-Crebbp表达逐渐升高,到第7天达到最高峰,之后逐渐回复到基础水平。(3)干扰circ-Crebbp的表达后促进了Schwann细胞的增殖、迁移。结论:Circ-Crebbp可以调控坐骨神经损伤后Schwann细胞的增殖和迁移。
