幽门螺旋杆菌检测方法及其应用价值的研究进展 被引量：5

1

作者 常明珠 李雨澎 +1 位作者 母润红 朱建宇 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期253-260,共8页

幽门螺旋杆菌(Hp)是一种定植于人类胃部并对机体造成一定损害的病原菌。多年来针对Hp的各类检测技术不断被研发改进并被应用于临床Hp感染的诊断中,以组织病理切片法为代表的侵入性检测方法因有创性而使其应用范围受限,以^(13/14)C呼气... 幽门螺旋杆菌(Hp)是一种定植于人类胃部并对机体造成一定损害的病原菌。多年来针对Hp的各类检测技术不断被研发改进并被应用于临床Hp感染的诊断中,以组织病理切片法为代表的侵入性检测方法因有创性而使其应用范围受限,以^(13/14)C呼气试验为代表的非侵入性检测方法因无创和简便等特点更易被患者接受,但不同检测方法均存在一定的局限性,因此需考虑患者年龄、既往史、当地医疗条件、检测方法的可靠性和检测成本等因素选择适合患者的Hp检测方法,可以帮助临床医生及时并准确地做出诊断。近年来对于Hp检测技术的研究已不仅局限于Hp的定性检测,定量检测、基因检测和分型检测方法也在不断探索和更新,家用检测试剂盒的开发也为Hp检测带来了更多的可能性。现从侵入性和非侵入性2个方面就近年来Hp检测方法的检测原理、检测灵敏度和特异度等进行综述,为Hp感染的临床诊疗和科学研究提供参考。 展开更多

关键词 幽门螺旋杆菌 检测方法 侵入性 非侵入性

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RNAi沉默survivin和HIF-1α基因对胃癌BGC-823细胞体外增殖和凋亡的影响 被引量：8

2

作者 王淼 母润红 +1 位作者 李明成 李洪杰 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期753-758,893,共7页

目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制胃癌BGC-823细胞中survivin和HIF-1α基因的表达,探讨其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别设计并合成经过化学修饰的靶向survivin和HIF1αmRNA的小干扰RNA(siRNAs),同时合成错义RNA(SCR),采... 目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制胃癌BGC-823细胞中survivin和HIF-1α基因的表达,探讨其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别设计并合成经过化学修饰的靶向survivin和HIF1αmRNA的小干扰RNA(siRNAs),同时合成错义RNA(SCR),采用HifectinⅡ真核体外转染胃癌BGC-823细胞,将转染siRNA-survivin、siRNA-HIF-1α和SCR的各组细胞分别命名为sis组、siH组和SCR组,同时设空白对照组(无血清培养基),RT-PCR法检测各组细胞中survivin和HIF-1αmRNA表达水平。将胃癌BGC-823细胞分为单干扰组(survivin-siRNA,sis组)、联合干扰组(survivin-siRNA+HIF1α-siRNA,sis+siH组)、非靶向特异性组(SCR组)和空白对照组(无血清培养基),MTT法检测各组细胞增殖活性,Western blotting法检测各组细胞中survivin和HIF-1α蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,sis组细胞中survivin mRNA表达水平和siH组细胞中HIF-1αmRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,SCR组细胞增殖活性无明显变化(P>0.05),sis组和sis+siH组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);与sis组比较,sis+siH组细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,sis+siH组细胞中surviving和HIF-1α蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:联合靶向沉默survivin和HIF-1α基因可下调靶基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖,促进细胞凋亡,RNAi基因沉默技术有望成为治疗胃癌的新方法。 展开更多

关键词 人胃癌BGC-823细胞 小干扰RNA SURVIVIN 缺氧诱导因子1Α 细胞增殖 细胞凋亡

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紫杉醇及其联合用药抗肿瘤的研究进展 被引量：8

3

作者 李雨澎 林睿 母润红 《吉林医药学院学报》 2021年第6期440-442,共3页

紫杉醇是一种从天然短叶红豆杉树皮中提取分离得到的四环二萜类有机化合物,因其具有特殊的抗癌机制,被称为癌症治疗的重大进展之一。本文综述了紫杉醇的研究历史、作用机制及其与其他抗肿瘤药物联合作用情况,旨在为肿瘤的临床治疗提供... 紫杉醇是一种从天然短叶红豆杉树皮中提取分离得到的四环二萜类有机化合物,因其具有特殊的抗癌机制,被称为癌症治疗的重大进展之一。本文综述了紫杉醇的研究历史、作用机制及其与其他抗肿瘤药物联合作用情况,旨在为肿瘤的临床治疗提供新的方向。 展开更多

关键词 紫杉醇 抗癌药物 联合配伍

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PCR-核酸试纸条检测方法鉴别蛤蚧真伪 被引量：3

4

作者 迟凯月 马玉贺 +8 位作者 马秋贺 刘悦 李涛 刘馨悦 高丽君 母润红 李明成 夏薇 曲永梅 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1484-1493,共10页

目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组DNA,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应... 目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组DNA,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应条件。结果:通过PCR-核酸试纸条对蛤蚧进行定性分析,正品蛤蚧在PCR-核酸试纸条上均出现2条带,伪品以及阴性对照均出现1条带。结论:PCR-核酸试纸条检测方法可实现短时间内蛤蚧可视化检测,操作方便,结果准确,可以为蛤蚧的DNA分子鉴别提供技术保障。 展开更多

关键词 蛤蚧 真伪 鉴别 核酸试纸条 靶基因 聚合酶链式反应(PCR)

原文传递

微滴式数字聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌 被引量：6

5

作者 母润红 聂丹丹 +1 位作者 赵明 马丽 《吉林医药学院学报》 2021年第2期81-83,共3页

目的采用微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)技术快速检测饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌,以满足对猪饲料中病原体精准检测需求。方法通过已建立的荧光定量PCR方法中引物和探针,建立优化ddPCR条件,梯度稀释质粒,进行特异性、敏感性... 目的采用微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)技术快速检测饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌,以满足对猪饲料中病原体精准检测需求。方法通过已建立的荧光定量PCR方法中引物和探针,建立优化ddPCR条件,梯度稀释质粒,进行特异性、敏感性、重复性实验以及市售10种样品的本底检测。结果ddPCR法检测金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌具有良好的特异性,最低可检测到88 copies/μL,SD为19.7,RSD为2.03%。稳定性测试组间RSD小于6.5%。结论ddPCR法特异性好,灵敏性较强,具有良好的重复性,可以作为分子生物学方法来诊断饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 蜡样芽孢杆菌 微滴数字聚合酶链反应

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血清中新型冠状病毒抗体检测技术的研究进展

6

作者 母润红 常明珠 +4 位作者 崔云鹤 李亭昱 李志萍 郭笑 朱建宇 《吉林医药学院学报》 2024年第3期220-225,共6页

抗体检测与核酸检测的联合诊断方式在新冠疫情早期流调溯源、感染确诊等方面发挥着重要作用。目前国内外针对新型冠状病毒抗体检测产品的开发主要基于酶联免疫吸附技术、免疫层析技术及化学发光免疫分析技术进行研究,每种检测方法各有... 抗体检测与核酸检测的联合诊断方式在新冠疫情早期流调溯源、感染确诊等方面发挥着重要作用。目前国内外针对新型冠状病毒抗体检测产品的开发主要基于酶联免疫吸附技术、免疫层析技术及化学发光免疫分析技术进行研究,每种检测方法各有优势与不足,在检测性能上也各有差异,相关检测产品相继问世并不断更新优化。本文介绍相关检测方法的检测性能、研究进展等,为临床方法选择、新型抗体检测产品的研究与发展提供参考,推进新型冠状病毒抗体检测产品的应用与研发。 展开更多

关键词 新冠病毒 抗体检测 酶联免疫 免疫层析 化学发光

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桦褐孔菌品质鉴定及抗氧化活性研究

7

作者 常明珠 李亭昱 +3 位作者 崔云鹤 刘腾达 郭笑 母润红 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2024年第1期35-39,共5页

目的确定桦褐孔菌多糖的最佳提取工艺,并对桦褐孔菌多糖的抗氧化活性进行评价。方法应用水提法、超声法、微波法和酶法分别对桦褐孔菌多糖进行3次提取;以VC为对照,测定桦褐孔菌多糖对FRAP、DPPH·、·OH和ABTS·的还原能力... 目的确定桦褐孔菌多糖的最佳提取工艺,并对桦褐孔菌多糖的抗氧化活性进行评价。方法应用水提法、超声法、微波法和酶法分别对桦褐孔菌多糖进行3次提取;以VC为对照,测定桦褐孔菌多糖对FRAP、DPPH·、·OH和ABTS·的还原能力。结果超声法在料液比m(g)∶V(mL)=1∶20、超声功率400 W、提取温度80℃、提取时间90 min时,多糖提取率最高,为10.35%;抗氧化活性研究结果显示,当桦褐孔菌的多糖浓度为400μg/mL时,其总抗氧化能力相当于244.04μmol/L的FeSO 4,对DPPH·的清除率较弱,对·OH和ABTS·的清除率均可达80%以上。结论超声法提取桦褐孔菌多糖效果最好,其抗氧化活性较高。 展开更多

关键词 桦褐孔菌 多糖 抗氧化

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基于“遗传标志物”紫河车DNA指纹-试纸条分子鉴定方法及试剂的研究

8

作者 王艳双 王艺潼 +1 位作者 母润红 张丽华 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1276-1284,共9页

目的:建立中药材紫河车遗传标志物DNA指纹-免疫胶体金试纸条快速分子鉴定方法,研发一体化质量控制基因检测试剂盒。方法:自主研发紫河车模板DNA提取的方法及试剂,根据人mtDNA cytb基因设计种属特异性引物,引物的5'端分别用FAM、Bio... 目的:建立中药材紫河车遗传标志物DNA指纹-免疫胶体金试纸条快速分子鉴定方法,研发一体化质量控制基因检测试剂盒。方法:自主研发紫河车模板DNA提取的方法及试剂,根据人mtDNA cytb基因设计种属特异性引物,引物的5'端分别用FAM、Biotin标记,筛选PCR最佳退火温度及循环次数,建立DNA指纹分子鉴定方法,研发PCR基因检测试剂预混液,采用分子克隆及基因测序技术制备对照药材DNA克隆液,利用免疫胶体金试纸条进行结果检测,开发出集“DNA提取试剂、PCR基因检测试剂预混液、对照药材DNA克隆液、空白对照液、试纸条”为一体的快速基因检测试剂盒,并进行特异性、重现性、灵敏性、稳定性的评价。结果:自主研发的DNA提取试剂提取的模板DNA质量浓度均在150~280 ng·μL^(-1),纯度均在1.8~1.9,琼脂糖凝胶电泳无拖尾。紫河车特异性引物在退火温度59℃、循环20次时;免疫胶体金试纸条显示:紫河车对照药材及正品出现2条红色条带,易混品及空白对照出现1条红的条带。琼脂糖凝胶电泳验证正确。对照药材DNA测序结果与人mtDNA cytb基因同源性100%。自主研发的一体化快速基因检测试剂盒的特异性强,重现性好,稳定性好,灵敏度为0.1 ng·μL^(-1)。结论:DNA指纹-免疫胶体金试纸条分子鉴定方法能够特异、准确、快速、可视化地对紫河车的真伪进行鉴定,一体化快速基因检测试剂盒为紫河车质量控制提供规范化、标准化的检测方式,更适合现场实地检测,可普遍推广使用。 展开更多

关键词 紫河车 遗传标志物 线粒体细胞色素B基因 PCR技术 DNA指纹 免疫胶体金试纸条 一体化试剂盒

原文传递

急性髓系白血病患者血清外泌体中miR-92a-3p的表达及其意义 被引量：1

9

作者 王涵 张亚丽 +3 位作者 全海薇 母润红 邹雨彤 夏薇 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期467-472,共6页

目的:检测急性髓系白血病(AML)患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p)表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法:选取AML患者51例(AML组)和34名同期健康体检志愿者(对照组)作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清... 目的:检测急性髓系白血病(AML)患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p)表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法:选取AML患者51例(AML组)和34名同期健康体检志愿者(对照组)作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和Western blotting法鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象血清外泌体中miR-92a-3p表达水平;根据血清外泌体中miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(AUC),确定其临界值,根据灵敏度和特异度评估miR-92a-3p表达水平对AML的诊断效能。结果:在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构,纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为30~100 nm,Western blotting法在提取外泌体中检测到CD63和CD9蛋白表达。与对照组比较,AML组患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平明显降低(P<0.01);ROC曲线分析,血清外泌体miR-92a-3p诊断AML的最佳临界值为0.51,灵敏度为76.47%,特异度为94.12%,AUC为0.913,AUC 95%置信区间(CI)为(0.856,0.971)(P<0.001)。结论:AML患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平诊断AML的灵敏度和特异度较高,可应用于早期AML的临床诊断。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 外泌体 微小RNA-92a-3p 肿瘤标志物

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水产品中食源性病原菌多重PCR快速检测方法的建立 被引量：5

10

作者 母润红 聂丹丹 +4 位作者 李明成 马丽 赵明 高丽君 刘晓蓉 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2020年第6期756-760,共5页

目的建立一种同时鉴定沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌和霍乱弧菌的多重PCR快速检测技术,为水产品中食源性病原菌检测提供新思路.方法基于沙门氏菌invA基因、单核细胞增生李斯特菌prfA、副溶血性弧菌tlh和霍乱弧菌ompW4... 目的建立一种同时鉴定沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌和霍乱弧菌的多重PCR快速检测技术,为水产品中食源性病原菌检测提供新思路.方法基于沙门氏菌invA基因、单核细胞增生李斯特菌prfA、副溶血性弧菌tlh和霍乱弧菌ompW4靶基因保守序列设计特异性引物,进行单重PCR扩增和敏感性试验;优化多重PCR反应体系中退火温度,进行多重PCR特异性、敏感性和人工添加目的菌污染鱿鱼检测试验;建立多重PCR检测技术.结果建立优化后的多重PCR对4种目标菌的单一或混合基因组DNA进行特异性扩增,而非目标菌金黄色葡萄球菌、猪霍乱沙门氏菌、普通变形杆菌、小肠耶尔森菌、大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌、粪肠球菌、蜡样芽孢杆菌、志贺氏菌、阴沟肠杆菌等其他菌株的基因组DNA均未见任何条带;沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌和霍乱弧菌的最低检出限为10^4 cfu/mL,副溶血性弧菌最低检出限为10^7 cfu/mL.应用多重PCR对人工添加目标菌和非目标菌的鱿鱼进行检测,其结果可信.结论本研究建立沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌和霍乱弧菌的多重PCR检测,具有快速、简便、灵敏、准确等优点,可为水产品食源性病原菌检测及其防疫检疫检验部门提供一种高效、准确的检测手段. 展开更多

关键词 多重PCR 快速检测 沙门氏菌 单核细胞增生李斯特菌 副溶血性弧菌 霍乱弧菌

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特异性干扰survivin基因表达对人舌癌Tca8113细胞体外增殖和侵袭性的影响 被引量：4

11

作者 母润红 马方 +1 位作者 刘永超 王湘茗 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1310-1314,共5页

目的:探讨应用RNAi技术特异性沉默survivin基因表达对人舌癌细胞Tca8113增殖、凋亡、迁移的影响,阐明survivin在Tca8113细胞生物学行为中的作用。方法:取对数生长期的Tca8113细胞,分为干扰组、阴性对照组及空白对照组。采用RT-PCR和West... 目的:探讨应用RNAi技术特异性沉默survivin基因表达对人舌癌细胞Tca8113增殖、凋亡、迁移的影响,阐明survivin在Tca8113细胞生物学行为中的作用。方法:取对数生长期的Tca8113细胞,分为干扰组、阴性对照组及空白对照组。采用RT-PCR和Western blot方法检测Tca8113细胞中survivin基因的mRNA及蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖状况;流式细胞术检测各组Tca8113细胞凋亡率;划痕实验检测Tca8113细胞的迁移状况。结果:RT-PCR显示舌癌Tca8113细胞中survivin的mRNA表达水平明显低于空白对照组(P<0.05),Western blot蛋白免疫印迹结果显示,与空白对照组比较,survivin蛋白表达水平减少(P<0.05)。survivin干扰组Tca8113细胞的增殖能力降低(P<0.05);细胞划痕实验发现转染Tca8113细胞48 h后干扰组细胞的迁移距离明显短于空白对照组(P<0.05)。结论:特异性沉默siRNA-survivin的表达可有效抑制舌癌Tca8113细胞的体外迁移能力,可能与survivin表达减少有关,有望成为口腔舌癌生物治疗的潜在靶点。 展开更多

关键词 SURVIVIN SIRNA 增殖 凋亡 迁移

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快速鉴定鹿茸真伪及其种属检测试剂的试验研究

12

作者 徐宁 马玉贺 +4 位作者 马秋贺 艾金霞 母润红 高丽君 夏薇 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1435-1445,共11页

目的:建立1种双重PCR检测体系,根据琼脂糖凝胶电泳目的条带位置及数量快速鉴定花鹿茸、马鹿茸及常见伪品驯鹿茸。方法:采用碱变性法提取鹿茸样品基因组DNA,以鹿科动物Cytb和COI基因为靶序列,应用Primer 3.0,根据SNP位点设计特异性鉴别引... 目的:建立1种双重PCR检测体系,根据琼脂糖凝胶电泳目的条带位置及数量快速鉴定花鹿茸、马鹿茸及常见伪品驯鹿茸。方法:采用碱变性法提取鹿茸样品基因组DNA,以鹿科动物Cytb和COI基因为靶序列,应用Primer 3.0,根据SNP位点设计特异性鉴别引物(Cy-1、COI-1),并摸索及优化PCR反应体系及条件,同时,采用克隆及测序验证检测结果的准确性。结果:建立的双重PCR扩增体系显示,花鹿茸在电泳图谱408 bp及146 bp处可见2条扩增条带,马鹿茸则在146 bp处见1条目的条带,而伪品鹿茸则无扩增条带,与质粒克隆测序验证的结果一致。且市售鹿茸样品的检测结果与鉴定结果相吻合。结论:本试验自主构建的双重PCR检测体系简便、迅速,检测试剂结果准确,稳定性良好,在分子水平实现一步法鉴定花鹿茸、马鹿茸及其常见伪品,具有较大实用价值。 展开更多

关键词 花鹿茸 马鹿茸 双重聚合酶链式反应 位点特异性 检测试剂

原文传递

酥制蛤蚧炮制工艺及质量标准研究

13

作者 韩宇 赵明会 +2 位作者 杨思广 母润红 王艳双 《中国药品标准》 CAS 2023年第4期403-410,共8页

目的:以酥制蛤蚧的厂家炮制工艺为基础,结合《中国药典》2020年版四部炮制通则的要求明确具体的相关工艺参数,优化炮制工艺;遵循药材和饮片检定通则,制订质量标准。方法:收集样品,确定考察因素,将酥制蛤蚧的工艺进行优化。以《中国药典... 目的:以酥制蛤蚧的厂家炮制工艺为基础,结合《中国药典》2020年版四部炮制通则的要求明确具体的相关工艺参数,优化炮制工艺;遵循药材和饮片检定通则,制订质量标准。方法:收集样品,确定考察因素,将酥制蛤蚧的工艺进行优化。以《中国药典》2020年版一部蛤蚧的质量标准为基础,通过方法学考察,制订性状、鉴别和浸出物的质量标准和限度;增加聚合酶链式反应法、重金属及有害元素、黄曲霉毒素三项检验项目。结果与结论:经过生产企业验证,酥制蛤蚧的炮制工艺可行,更加规范化;新制订的质量标准能够有效控制酥制蛤蚧饮片的质量。 展开更多

关键词 酥制蛤蚧 炮制工艺 质量标准 聚合酶链式反应 重金属及有害元素 黄曲霉毒素

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麸炒青皮炮制工艺及品质鉴定技术的研究

14

作者 付凌燕 赵明会 +2 位作者 孙立丽 母润红 王艳双 《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》 2023年第7期0009-0014,共6页

通过对青皮炮制工艺的研究及优化,建立麸炒青皮的炮制规范,并制定质控项目及指标。方法 通过对麸炒青皮炮制规范的研究,建立麸炒青皮炮制方法:取青皮片或丝,照麸炒法(《中国药典》2020年版 四部 通则0213)炒至颜色加深,取出,筛去麸皮,... 通过对青皮炮制工艺的研究及优化,建立麸炒青皮的炮制规范,并制定质控项目及指标。方法 通过对麸炒青皮炮制规范的研究,建立麸炒青皮炮制方法:取青皮片或丝,照麸炒法(《中国药典》2020年版 四部 通则0213)炒至颜色加深,取出,筛去麸皮,放凉。(每100kg青皮,用麸皮10kg。);通过对麸炒青皮品质鉴定技术的研究,从性状、鉴别、检查、含量测定等方面制定质控项目,并制定相应控制指标。结果 建立的炮制工艺及质量标准可行,麸炒青皮的各项检测指标相对稳定。结论 本方法建立的麸炒青皮炮制规范及质量标准可行,为麸炒青皮的临床应用及成药制剂提供检验依据。 展开更多

关键词 麸炒青皮 炮制工艺 质量标准 薄层色谱法 高效液相色谱法

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中药材蛤蚧PCR-试纸条快速分子鉴定方法及检测试剂的研究

15

作者 王艺潼 马梓宸 +2 位作者 王艳双 母润红 张丽华 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第24期2274-2281,共8页

目的建立中药材蛤蚧聚合酶链反应(PCR)-免疫胶体金试纸条快速分子鉴定方法,研发快速基因检测试剂盒。方法筛选提取基因组DNA的方法及试剂,根据蛤蚧mtDNA cytb基因设计种属特异性引物并标记,筛选最佳反应条件,研发PCR基因检测试剂,采用... 目的建立中药材蛤蚧聚合酶链反应(PCR)-免疫胶体金试纸条快速分子鉴定方法,研发快速基因检测试剂盒。方法筛选提取基因组DNA的方法及试剂,根据蛤蚧mtDNA cytb基因设计种属特异性引物并标记,筛选最佳反应条件,研发PCR基因检测试剂,采用分子克隆及基因测序技术制备对照药材DNA克隆液,利用免疫胶体金试纸条进行结果检测。进而,开发出一体化快速基因检测试剂盒,并对特异性、重现性、灵敏性、稳定性进行评价。结果基因组DNA的完整性、浓度、纯度均满足PCR的要求,引物在退火温度63℃时,循环20次时,免疫胶体金试纸条显示:蛤蚧对照药材及正品出现两条红色条带,易混品及空白对照出现一条红的条带。琼脂糖凝胶电泳验证正确。对照药材克隆测序结果于蛤蚧mtDNA cytb基因同源性100%。一体化快速基因检测试剂盒的特异性强、重现性好、稳定性好、灵敏度高于琼脂糖凝胶电泳10倍。结论PCR-免疫胶体金试纸条鉴定方法能够特异、准确、快速、可视化地鉴定蛤蚧的真伪,一体化快速检测试剂盒使鉴定方法更加规范化、标准化,更适合实地现场检测、适合普遍推广使用。 展开更多

关键词 蛤蚧 聚合酶链反应 免疫胶体金试纸条 分子克隆 基因测序

原文传递

PRDX6过表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制 被引量：4

16

作者 母润红 刘馨竹 +4 位作者 林睿 李雨澎 王璐瑶 王春雨 郭笑 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期559-565,共7页

目的:探讨过表达过氧化物氧化还原蛋白6(PRDX6)基因对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:人肝癌HepG2和Hep3B细胞分为过表达PRDX6组(转染过表达质粒PIRES-EGFP-PRDX6)和空载体组(转染对照质粒PIRES)。实时... 目的:探讨过表达过氧化物氧化还原蛋白6(PRDX6)基因对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:人肝癌HepG2和Hep3B细胞分为过表达PRDX6组(转染过表达质粒PIRES-EGFP-PRDX6)和空载体组(转染对照质粒PIRES)。实时荧光定量PCR(RTqPCR)和Western blotting法检测2组肝癌细胞中PRDX6 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测2组肝癌细胞增殖活性,划痕实验检测2组肝癌细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测2组肝癌细胞的侵袭细胞数。Western blotting法检测2组细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:RT-qPCR和Western blotting法检测,过表达PRDX6组肝癌细胞中PRDX6 mRNA和蛋白表达水平明显高于空载体组(P<0.05)。MTT法检测,过表达PRDX6组肝癌细胞的增殖活性明显高于空载体组(P<0.05)。划痕实验和Tanswell小室实验检测,与空载体组比较,过表达PRDX6组肝癌细胞划痕愈合率和侵袭细胞数升高(P<0.05)。Western blotting检测,与空载体组比较,过表达PRDX6组肝癌细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:PRDX6过表达可增强肝癌HepG2和Hep3B细胞体外增殖、侵袭及迁移能力,其作用机制可能与PRDX6过表达调控MMP-2和MMP-9蛋白表达水平有关。 展开更多

关键词 肝肿瘤 过氧化物氧化还原蛋白6 细胞增殖 细胞侵袭 细胞迁移

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幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagT基因的克隆表达及其重组蛋白对SGC-7901细胞增殖和分泌细胞因子功能的影响 被引量：2

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作者 崔蕾蕾 邵世和 +5 位作者 李良菊 王华 母润红 鞠小丽 董苏荣 钟桥 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期452-458,共7页

【目的】初步研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H．pylori）NCTC 11637 cagT（HP0532）基因对SGC-7901细胞增殖和白细胞介素-8（IL-8）分泌的影响。【方法】应用PCR技术从H．pylori基因组DNA中扩增cagT编码基因片段，将其定向插入p... 【目的】初步研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H．pylori）NCTC 11637 cagT（HP0532）基因对SGC-7901细胞增殖和白细胞介素-8（IL-8）分泌的影响。【方法】应用PCR技术从H．pylori基因组DNA中扩增cagT编码基因片段，将其定向插入pQE30载体中，双酶切鉴定筛选阳性克隆。测序分析确认后，IPTG诱导表达，表达蛋白以Ni^2＋-NTA柱进行纯化，并经Western blot鉴定，纯化的蛋白作用于SGC-7901细胞，提取细胞总RNA，RT-PCR扩增IL-8，并用MTT法检测蛋白对细胞增殖的影响。【结果】成功克隆了cagT基因，全长843bp（GenBank登录号为EF114758），编码280个氨基酸，与GenBank公布的其他H．pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97％-99％。工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带，相对分子质量约为32kDa，经Ni^2＋-NTA柱纯化后可获得纯度为98％重组蛋白。经透析复性后的蛋白（终浓度10μg／mL）作用于SGC-7901细胞后，可诱导细胞因子IL-8在mRNA水平上的表达。不同浓度CagT蛋白与SGC-7901细胞作用，细胞增殖的程度随着蛋白浓度的增加逐渐降低，细胞的增殖受到抑制。【结论】CagT蛋白可刺激SGC-7901细胞IL-8的表达，并抑制细胞增殖，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 cagT 表达 白细胞介素-8 增殖

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常规RT-PCR快速检测诺如病毒方法的建立 被引量：3

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作者 曲莉 王洪艳 +2 位作者 李环 母润红 王艳双 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2020年第2期188-190,共3页

目的建立一种可同时检测GⅠ、GⅡ型诺如病毒(Norovirus,NOV)的常规RT-PCR方法.方法针对GⅠ、GⅡ型诺如病毒RdRp区域的基因进行引物设计,优化PCR反应体系及条件,评价该方法的灵敏度、特异度.结果该引物对诺如病毒的特异度强,同一体系内的... 目的建立一种可同时检测GⅠ、GⅡ型诺如病毒(Norovirus,NOV)的常规RT-PCR方法.方法针对GⅠ、GⅡ型诺如病毒RdRp区域的基因进行引物设计,优化PCR反应体系及条件,评价该方法的灵敏度、特异度.结果该引物对诺如病毒的特异度强,同一体系内的GⅠ、GⅡ型诺如病毒相互之间无干扰,与轮状病毒、星状病毒、肠道腺病毒、甲型肝炎病毒同时检测无交叉反应;对GⅠ、GⅡ型诺如病毒核酸的最低检测限值是10~3拷贝/μL.结论本研究建立常规RT-PCR检测方法对GⅠ、GⅡ型诺如病毒进行快速检测,具有很好的灵敏度和特异性. 展开更多

关键词 诺如病毒 双重RT-PCR GⅠ型 GⅡ型

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中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法及检测试剂的研究

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作者 吴楠 孟媛 +7 位作者 周童 张宇彤 李洋洋 刘琳 李亚茹 艾金霞 高丽君 母润红 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1053-1060,共8页

目的:建立中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法,研制三斑海马DNA检测试剂盒。方法:利用生物信息学对海马种属的Cytb基因进行分析,以该基因作为靶基因,设计特异性引物,研制三斑海马DNA提取及PCR快速检测试剂,应用分子克隆及测序技术,克隆三斑... 目的:建立中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法,研制三斑海马DNA检测试剂盒。方法:利用生物信息学对海马种属的Cytb基因进行分析,以该基因作为靶基因,设计特异性引物,研制三斑海马DNA提取及PCR快速检测试剂,应用分子克隆及测序技术,克隆三斑海马阳性对照药材,并对快速检测试剂盒的特异性、稳定性、重复性及灵敏度进行考察,对市售三斑海马样品进行真伪鉴定。结果:基于Cytb序列可对三斑海马及其混伪品进行区分。自主研发的三斑海马快速检测试剂提取的海马DNA纯度和浓度均可达到PCR的要求,在退火温度为61.5℃时引物特异性最强;克隆测序后三斑海马DNA序列与海马mtDNA Cytb特异指纹区段序列一致;自主研制的试剂重现性、稳定性良好,检测浓度最低限为10^(-3)ng·μL^(-1);对17个市售样品进行检测,合格率为88.2%。结论:建立了一种特异、准确的检测中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法;研制的三斑海马DNA检测试剂盒操作简便,灵敏度高,检测结果稳定。 展开更多

关键词 三斑海马 DNA指纹鉴定 CYTB 检测试剂 DNA提取方法 聚合酶链式反应 分子克隆

原文传递

SiRNA靶向干扰survivin基因对舌癌细胞系Tca8113侵袭性的影响 被引量：2

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作者 马方 母润红 +1 位作者 刘永超 王亚平 《全科口腔医学电子杂志》 2015年第2期94-96,98,共4页

目的应用RNAi技术抑制人口腔鳞癌细胞株Tca8113中survivin基因的的表达,观察survivin基因对Tca8113细胞增殖与凋亡的影响。方法化学合成靶向人类survivin基因的特异性si RNA,将其转染至Tca8113细胞中,采用RT-PCR法检测转染后Tca8113细胞... 目的应用RNAi技术抑制人口腔鳞癌细胞株Tca8113中survivin基因的的表达,观察survivin基因对Tca8113细胞增殖与凋亡的影响。方法化学合成靶向人类survivin基因的特异性si RNA,将其转染至Tca8113细胞中,采用RT-PCR法检测转染后Tca8113细胞中survivin的m RNA表达,应用MTT方法检测细胞的增殖状况,采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果 survivin靶向si RNA转染细胞后survivin基因的m RNA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),细胞增殖能力降低,凋亡增多。结论通过RNAi技术阻断Tca8113细胞survivin基因的表达可抑制细胞增殖并促进细胞的凋亡。 展开更多

关键词 口腔鳞癌 si RNA SURVIVIN 增殖 凋亡

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