期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到3篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
弓形虫TR与ROP18双基因缺失及对NF-κB-IL-12-ROS信号通路相关因子的影响
1
作者 耿小玲 陈芸 +4 位作者 刘旗 张曼玉 蒋蔚 段倩玉 王权 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期1-12,共12页
为探究弓形虫的TR与ROP18基因对NF-κB-IL-12-ROS信号通路的影响和抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TR与ROP18双基因敲除株(TR-ROP18-KO)。通过检测TR/ROP18单、双基因缺失株氧化应激水平以及对小鼠巨... 为探究弓形虫的TR与ROP18基因对NF-κB-IL-12-ROS信号通路的影响和抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TR与ROP18双基因敲除株(TR-ROP18-KO)。通过检测TR/ROP18单、双基因缺失株氧化应激水平以及对小鼠巨噬细胞活性氧(ROS)水平影响的研究发现,TR-ROP18-KO株引发的氧化应激水平极显著高于RH株(P<0.01),但与TR单基因缺失株无显著差异(P>0.05);利用RT-PCR检测TR/ROP18单、双基因缺失株感染小鼠巨噬细胞产生的NF-κB、IL-12 mRNA水平和ELISA检测小鼠血清中IL-12的水平发现,TR-ROP18-KO株感染组虽然极显著高于RH株感染组(P<0.01),但TR-ROP18-KO株感染组却未显著高于TR-KO株感染组(P>0.05),表明弓形虫TR与ROP18基因在抗宿主ROS损伤中不存在协同作用。本研究利用TR与ROP18双基因缺失株能够明确解析这两个基因在抗宿主ROS损伤中有无协同作用,为深入研究这两个基因在I型弓形虫免疫逃避途径中的协同作用奠定基础,这也为后续弓形虫双基因功能协同作用的研究提供了一个新思路。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 CRISPR/Cas9 TR ROP18 免疫逃避
下载PDF
弓形虫RH株CDPK1蛋白表达及鉴定
2
作者 张曼玉 蒋蔚 +4 位作者 陈芸 刘旗 段倩玉 耿小玲 王权 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期181-188,共8页
为了研究刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)CDPK1的生物学功能,并深入了解其在免疫保护中所发挥的作用,本试验以弓形虫RH株cDNA为模板,表达CDPK1基因并鉴定其生物学功能。本研究将截短的CDPK1基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中后,转... 为了研究刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)CDPK1的生物学功能,并深入了解其在免疫保护中所发挥的作用,本试验以弓形虫RH株cDNA为模板,表达CDPK1基因并鉴定其生物学功能。本研究将截短的CDPK1基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中后,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析;利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白,以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰兔,制备抗CDPK1多克隆抗体;通过蛋白质印迹技术(Western blot)及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定重组蛋白的免疫活性。结果显示:从弓形虫RH株cDNA中扩增出489 bp截短的CDPK1基因片段,编码162个氨基酸,与GenBank中已知基因序列及氨基酸序列的同源性为100%;获得的重组蛋白CDPK1分子量约为44 kDa,且在37℃、180 rpm和IPTG浓度0.2 mmol/L条件下,重组蛋白可获得高效可溶性表达;Western blot分析发现,重组蛋白能被GST标签抗体识别,不能被感染弓形虫的犬阳性血清识别,说明此重组蛋白不具有反应原性;IFA结果显示,重组蛋白的抗血清能够识别刚地弓形虫的天然蛋白CDPK1,说明重组蛋白CDPK1具有良好的免疫原性,且证实其主要位于刚地弓形虫虫体的细胞质和细胞核。本研究成功获得重组蛋白CDPK1及CDPK1多克隆抗体,为CDPK1特性与功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 弓形虫 CDPK1 原核表达 多克隆抗体 免疫保护
下载PDF
弓形虫RH株ROP18基因的原核表达及鉴定 被引量：1
3
作者 段倩玉 蒋蔚 +3 位作者 陈芸 张曼玉 曹敬政 王权 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第5期48-54,共7页
为了研究刚地弓形虫ROP18的生物学功能,并深入了解其在抵抗宿主天然免疫方面所发挥的作用,本研究进行了弓形虫RH株ROP18基因的表达与鉴定。采用PCR方法扩增ROP18的截短基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中后,转化大肠埃希菌BL21(D... 为了研究刚地弓形虫ROP18的生物学功能,并深入了解其在抵抗宿主天然免疫方面所发挥的作用,本研究进行了弓形虫RH株ROP18基因的表达与鉴定。采用PCR方法扩增ROP18的截短基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中后,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,通过Western blot及IFA鉴定重组蛋白的免疫活性。结果表明:以弓形虫RH株基因组DNA为模板,成功扩增出长约678 bp的ROP18截短基因,并构建了原核表达质粒pET-30a-ROP18,测序结果与GenBank参考序列比对,同源性为100%;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白ROP18以包涵体形式存在,分子质量约为31 kDa,且在IPTG终浓度为0.2 mmol/L、37℃诱导表达6 h时,表达量最高;Western blot结果显示重组蛋白ROP18可被感染弓形虫的犬阳性血清识别,表明ROP18有良好的反应原性;IFA结果显示,ROP18主要分布于弓形虫速殖子的胞浆内,且棒状体常存在的部位呈现较强荧光。本研究成功获得重组蛋白ROP18及针对ROP18蛋白的多克隆抗体,为ROP18特性与功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 弓形虫 ROP18 原核表达 多克隆抗体
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部