目的对上海市1例输入性华支睾吸虫病例进行实验室检测与基因溯源分析。方法收集该病例的临床资料,并进行流行病学调查。对患者的粪便样本分别采用饱和盐水漂浮法和改良加藤厚涂片法进行制片,显微镜镜检并计数虫卵,计算感染度。使用QIAam...目的对上海市1例输入性华支睾吸虫病例进行实验室检测与基因溯源分析。方法收集该病例的临床资料,并进行流行病学调查。对患者的粪便样本分别采用饱和盐水漂浮法和改良加藤厚涂片法进行制片,显微镜镜检并计数虫卵,计算感染度。使用QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit提取患者粪样DNA,根据核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS-2)合成特异性CS1/CS2引物,对模板DNA进行PCR扩增,并对扩增产物测序比对后应用Neighborjoining方法构建系统发育树,使用Bootstrap方法进行评估。结果饱和盐水漂浮法和改良加藤厚涂片法镜下均查见大量华支睾吸虫卵,改良加藤厚涂片法中计数虫卵数量,每克粪便虫卵数(EPG)=45912个虫卵/克粪便,为重度感染。用引物CS1/CS2对患者粪样DNA进行ITS-2基因扩增,得到315 bp条带,与预期的ITS-2基因CS1/CS2片段大小一致。扩增产物片段序列与华支睾吸虫序列相似性为100%。基于ITS基因序列构建的系统发育树显示,上海患者感染虫株与华支睾吸虫均聚到一个分支上,且与来源地为广西壮族自治区南宁市虫株亲缘关系最近。结论根据基因序列和流行病学分析,明确该病例的病原体为广西壮族自治区南宁市华支睾吸虫虫株,为输入性病例。应加强食源性寄生虫病的监测和管理。展开更多
文摘目的对上海市1例输入性华支睾吸虫病例进行实验室检测与基因溯源分析。方法收集该病例的临床资料,并进行流行病学调查。对患者的粪便样本分别采用饱和盐水漂浮法和改良加藤厚涂片法进行制片,显微镜镜检并计数虫卵,计算感染度。使用QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit提取患者粪样DNA,根据核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS-2)合成特异性CS1/CS2引物,对模板DNA进行PCR扩增,并对扩增产物测序比对后应用Neighborjoining方法构建系统发育树,使用Bootstrap方法进行评估。结果饱和盐水漂浮法和改良加藤厚涂片法镜下均查见大量华支睾吸虫卵,改良加藤厚涂片法中计数虫卵数量,每克粪便虫卵数(EPG)=45912个虫卵/克粪便,为重度感染。用引物CS1/CS2对患者粪样DNA进行ITS-2基因扩增,得到315 bp条带,与预期的ITS-2基因CS1/CS2片段大小一致。扩增产物片段序列与华支睾吸虫序列相似性为100%。基于ITS基因序列构建的系统发育树显示,上海患者感染虫株与华支睾吸虫均聚到一个分支上,且与来源地为广西壮族自治区南宁市虫株亲缘关系最近。结论根据基因序列和流行病学分析,明确该病例的病原体为广西壮族自治区南宁市华支睾吸虫虫株,为输入性病例。应加强食源性寄生虫病的监测和管理。
