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人羊膜间充质干细胞的分离及分化潜能的研究 被引量：13
1
作者 朴正福 丁淑芹 +4 位作者 张海燕 小林护 加茂功 樱川宣男 李宁 《生物医学工程与临床》 CAS 2010年第1期15-19,F0002,共6页
目的建立人羊膜间充质干细胞(hAMC)的分离培养方法及探讨其在再生医学中的潜在应用性。方法取38～40周孕妇剖宫产术后人羊膜,用多种酶消化法制备hAMC悬浮液,并用免疫细胞化学方法探讨其多分化潜能如hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达... 目的建立人羊膜间充质干细胞(hAMC)的分离培养方法及探讨其在再生医学中的潜在应用性。方法取38～40周孕妇剖宫产术后人羊膜,用多种酶消化法制备hAMC悬浮液,并用免疫细胞化学方法探讨其多分化潜能如hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达;荧光激活细胞仪分离法(FACS)检测主要组织相容性复合体(MHC)家族分子,同时探讨其致瘤性。结果从人羊膜中分离出高纯度hAMC,并摸索出其最适合的培养条件;细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1～3个核仁,易贴壁,生长繁殖快,在体外可连续培养20代以上。免疫细胞化学结果显示:神经发生相关蛋白(Musashi-1、Nestin、Vimentin)阳性及肝脏发生相关蛋白[Flt-1、Integrinβ1、HNF(3β、4α、1α)、C/EBPα、Albumin、AAT]等阳性;人MHC ClassⅡ阴性,人MHC ClassⅠ弱阳性;癌化实验显示hAMC无致瘤性。结论人羊膜中分离提纯的hAMC中至少包含向神经及肝脏细胞分化的干细胞样的细胞群,具有低免疫原性、无致瘤性等特点。这些结果支持hAMC作为新的、安全的细胞来源可用于再生医学研究。 展开更多
关键词 羊膜 羊膜间充质干细胞 生物学特性 再生医学
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人羊膜间充质干细胞的生物学特性鉴定 被引量：7
2
作者 朴正福 张海燕 +6 位作者 丁淑芹 小林护 佐佐木幸司 菊池爱子 加茂功 樱川宣男 李宁 《国际生物医学工程杂志》 CAS 北大核心 2010年第3期157-162,I0004,共7页
目的分离提纯的人羊膜间充质干细胞的生物学特性鉴定。方法剥去38～40周孕妇剖腹产术后羊膜，用消化酶消化后制备人羊膜间充质细胞（hAMCs）悬浮液。利用流式细胞分选技术从hAMCs中分离提纯干细胞（hAMC-SP细胞），并对于细胞抗原进行... 目的分离提纯的人羊膜间充质干细胞的生物学特性鉴定。方法剥去38～40周孕妇剖腹产术后羊膜，用消化酶消化后制备人羊膜间充质细胞（hAMCs）悬浮液。利用流式细胞分选技术从hAMCs中分离提纯干细胞（hAMC-SP细胞），并对于细胞抗原进行鉴定。结果从hAMCs中分离的hAMC-SP细胞，约占AMCs总数的0．3％。传代培养4～10代后的hAMC-SP细胞表达Nestin、Vimentin、整合素家属成员（CD49b、CD49c、CD49d、CD49e）、CD9、CD13、CD19、CD29、CD44、CD46、CD51、CD59、CD166及干细胞相关的Oct-3／4抗原。HLA-ABC、TRA-1-81及SSEA-4为弱表达；相反CD34、CD45、CD117、CD56、CD90、CD105、CD106、CD133、Fit-1、Musashi 1及HLA-DR无阳性结果，同样TRA-1-60及SSEA-3也表达阴性。体外转化实验表示hAMC-SP细胞在琼脂糖培养基上不形成细胞集落，但阳性对照组的HepG2形成多数细胞集落。结论hAMC-SP细胞表面标记符合骨髓及脂肪间充质等来源的干细胞特点；hAMC-SP细胞迅速而稳定扩增，无致瘤性。由于来源充足，hAMC-SP细胞在消除HLA-ABC阳性细胞亚群下，同种异体移植在内的广泛的再生医学领域中能成为理想的细胞来源。 展开更多
关键词 羊膜间充质细胞 羊膜干细胞 表面标记 再生医学
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羊膜干细胞分离方法及其细胞学特性鉴定 被引量：3
3
作者 朴正福 张海燕 +6 位作者 丁淑芹 小林护 佐佐木幸司 菊池爱子 加茂功 樱川宣男 李宁 《透析与人工器官》 2009年第1期1-5,共5页
目的按照Kobayashi方法从羊膜间充质细胞(AMCs)的侧群细胞(SP)中分离羊膜干细胞并予以细胞学特性鉴定。方法按文献法取剖腹产手术胎盘,用色素染色法和流式细胞分选技术从AMCs中分离羊膜干细胞进行原代培养,用PI染色DNA分析细胞周期,软... 目的按照Kobayashi方法从羊膜间充质细胞(AMCs)的侧群细胞(SP)中分离羊膜干细胞并予以细胞学特性鉴定。方法按文献法取剖腹产手术胎盘,用色素染色法和流式细胞分选技术从AMCs中分离羊膜干细胞进行原代培养,用PI染色DNA分析细胞周期,软琼脂培养法观察细胞体外集落,并与人肝癌细胞系HepG2比较。结果1.从AMCs中成功分离的(羊膜干细胞侧群细胞)AMCs-SP约占总AMCs的0.2%;2.细胞周期结果为AMC-SP细胞增殖缓慢或处于静止期;3.体外培养时细胞群体培增数达40以上,在软琼脂中AMC-SP不形成集落,与人肝癌细胞系HepG2可形成较大集落形成反差。结论AMC-SP具有细胞来源充足、稳定性好、安全性高、无伦理学争议,异体移植无急性免疫排外反应,无致瘤性的优点,可做为再生医学及急性损伤期疾病治疗的重要的人细胞来源应用于临床。 展开更多
关键词 干细胞 羊膜间充质细胞 侧群细胞 细胞治疗
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人羊膜上皮细胞对急性肝衰竭动物模型的治疗效果 被引量：2
4
作者 万红双 张海燕 +6 位作者 谢棒祥 樱川宣男 加茂功 陈德喜 卢实春 李宁 朴正福 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期302-306,共5页
目的探讨人羊膜上皮细胞（hAECs）对急性肝衰竭（ALF）大鼠模型的治疗效果。方法从剖腹产人胎盘中分离羊膜，经过0．1％Trypsin-0．02％EDTA处理分离hAECs。hAECs用PKH26荧光生物素标记后经腹腔、门静脉、尾静脉三种不同途径注射到大鼠... 目的探讨人羊膜上皮细胞（hAECs）对急性肝衰竭（ALF）大鼠模型的治疗效果。方法从剖腹产人胎盘中分离羊膜，经过0．1％Trypsin-0．02％EDTA处理分离hAECs。hAECs用PKH26荧光生物素标记后经腹腔、门静脉、尾静脉三种不同途径注射到大鼠体内，观察细胞在肝脏分布情况，筛选出合适移植途径。选择240—260g雄性大鼠，采用D一氨基半乳糖（D—gal）2g/kg体重腹腔注射法建立ALF大鼠模型。模型制备1d后随机分为对照组和细胞治疗组。治疗组经腹腔直接注射hAECs，对照组注射等量的生理盐水。观察21d内大鼠存活率、肝功能和组织病理变化。结果免疫组化检测显示hAECs表达白蛋白、糖原等肝细胞标记。经门静脉、尾静脉途径移植细胞后可见肝脏内移植细胞定居，经腹腔途径移植的细胞在肝脏内未见分布，但可将多量细胞植入体内且操作简便。由于尾静脉途径移植细胞数量有限，门静脉途径具有创伤且注射后产生微循环栓塞等情况，本课题组选择腹腔直接注射途径实施细胞治疗。细胞移植后大鼠存活率提高，肝功能及细胞因子指标有明显改善，肝脏组织病理逐渐恢复正常。结论通过腹腔途径移植的hAECs对ALF大鼠模型有明显治疗作用。 展开更多
关键词 人羊膜上皮细胞(hAECs) 细胞治疗 急性肝衰竭(ALF) 动物模型
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不同途径移植羊膜上皮细胞在肝脏的定居 被引量：1
5
作者 张海燕 朴正福 +4 位作者 丁淑芹 任锋 加茂功 樱川宣男 李宁 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 2012年第5期775-778,共4页
背景:细胞移植对肝脏疾病具有一定的疗效,与肝脏移植相比有其自身的优点,但有诸多问题尚待解决。目的:探讨不同途径移植的人羊膜上皮细胞在肝脏内定居情况。方法:从剖腹产后的人胎盘羊膜中分离人羊膜上皮细胞,PKH26荧光标记后计数1×... 背景:细胞移植对肝脏疾病具有一定的疗效,与肝脏移植相比有其自身的优点,但有诸多问题尚待解决。目的:探讨不同途径移植的人羊膜上皮细胞在肝脏内定居情况。方法:从剖腹产后的人胎盘羊膜中分离人羊膜上皮细胞,PKH26荧光标记后计数1×107细胞通过大鼠腹腔、门静脉、尾静脉及肝脏内直接注入方式移植入大鼠体内。结果与结论:门静脉、尾静脉及肝脏直接注入途径移植的细胞均在肝脏内定居,但移植细胞数过量时造成局部肝组织的缺血坏死等不良反应。腹腔途径移植入体内的细胞未转移肝脏内。通过门静脉移植入体内的人羊膜上皮细胞在大鼠肝脏内维持存活至少16d。移植细胞过量时,导致肝脏血管堵塞及坏死。证明人羊膜上皮细胞至少在大鼠肝脏中存活2周,提示低免疫原性的羊膜来源细胞可成为肝脏病治疗的候选细胞之一。 展开更多
关键词 羊膜上皮细胞 细胞移植 肝脏 生物材料 终末期肝病
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脱细胞人羊膜支架材料对羊膜源性干细胞增殖作用的影响
6
作者 渠亚超 殷继明 +6 位作者 任锋 樱川宣男 加茂功 鲍旭丽 陈德喜 李宁 朴正福 《西部医学》 2022年第5期639-643,共5页
目的研究脱细胞人羊膜支架材料的制备及其对羊膜源性干细胞增殖作用的影响。方法利用38~40周孕妇剖宫产术后的羊膜,洗净后用物理及酶消化的方法清除羊膜细胞成分,得到脱细胞人羊膜支架材料,并制备了不同浓度的包被培养皿。剥离剖宫产后... 目的研究脱细胞人羊膜支架材料的制备及其对羊膜源性干细胞增殖作用的影响。方法利用38~40周孕妇剖宫产术后的羊膜,洗净后用物理及酶消化的方法清除羊膜细胞成分,得到脱细胞人羊膜支架材料,并制备了不同浓度的包被培养皿。剥离剖宫产后的羊膜利用流式细胞分选技术从中分离干细胞,并在包被培养皿上探讨细胞增殖活性,与其他生物材料包被培养皿做比较。结果羊膜源性干细胞在脱细胞人羊膜支架材料的包被培养皿上增殖速度明显增强,且与包被浓度明显相关。与常用的支架材料相比其对干细胞增殖效果更强,差异显著。结论脱细胞人羊膜支架材料有望成为干细胞研究与再生医疗领域中的新型生物材料。 展开更多
关键词 羊膜 脱细胞人羊膜支架 羊膜源性干细胞 生物材料 再生医学
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人羊膜间充质细胞的分离培养及其生物学特性探讨
7
作者 丁淑芹 樱川宣男 《医学理论与实践》 2015年第14期1824-1827,共4页
目的:对人羊膜间充质细胞(hAMC)的分离培养及其生物学特性进行探讨。方法:取38~40周孕妇剖腹产术后羊膜,用多种酶消化分离提纯hAMC,观察其体外生长的特征和形态学;用免疫细胞化学方法检测hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达;同时探讨... 目的:对人羊膜间充质细胞(hAMC)的分离培养及其生物学特性进行探讨。方法:取38~40周孕妇剖腹产术后羊膜,用多种酶消化分离提纯hAMC,观察其体外生长的特征和形态学;用免疫细胞化学方法检测hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达;同时探讨其致瘤性。结果:从羊膜中分离出高纯度hAMC,并摸索出其最适合的培养条件;细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1~3个核仁,易贴壁,生长繁殖快,在体外可连续培养10代以上。免疫细胞化学结果显示:神经发生相关蛋白(Musashi-1、Nestin、Vimentin)阳性以及肝脏发生相关蛋白[Flt-1、Integrinβ1、HNF(3β、4α、1α)、C/EBPα、Albumin、AAT]等阳性;主要组织相容性复合体Ⅱ(Human MHC ClassⅡ)阴性,主要组织相容性复合体Ⅰ(Human MHC ClassⅠ)弱阳性;癌化实验显示hAMC无致瘤性。结论:羊膜中分离提纯的hAMC为一种具备多分化潜能的干细胞,至少可分化为神经及肝脏细胞。hAMC具有低免疫源性、无致瘤性等特点,为再生医学研究提供新的细胞来源。 展开更多
关键词 羊膜 羊膜间充质细胞 生物学特性 分化诱导
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可溶化羊膜制备方法的建立及其应用
8
作者 朴正福 张海燕 +5 位作者 任锋 谢棒祥 樱川宣男 加茂功 陈德喜 李宁 《山东医药》 CAS 2014年第1期27-28,共2页
目的探讨建立可溶化羊膜的制备方法及其对细胞增殖的影响。方法从胎盘分离完整的羊膜,用物理化学方法去除细胞成分,形成多种形式的可溶化羊膜,制备包被培养皿,进行细胞培养并分析其增殖活性。结果羊膜可加工成液体、膜状及颗粒状的可溶... 目的探讨建立可溶化羊膜的制备方法及其对细胞增殖的影响。方法从胎盘分离完整的羊膜,用物理化学方法去除细胞成分,形成多种形式的可溶化羊膜,制备包被培养皿,进行细胞培养并分析其增殖活性。结果羊膜可加工成液体、膜状及颗粒状的可溶化羊膜。用液体状的羊膜细胞外基质液制备不同浓度的包被培养皿,可进行间充质干细胞的培养。羊膜液包被培养皿比传统的生物材料包被培养皿细胞增殖活性明显增强,且增殖活性与包被浓度明显相关(P均<0.05)。结论去除细胞的可溶化羊膜可作为医学研究领域中重要的生物材料。 展开更多
关键词 羊膜 细胞外基质 生物材料
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可溶化人羊膜液、绒毛膜液和全羊膜液对间充质干细胞增殖的影响
9
作者 朴正福 郑荣领 +7 位作者 万红双 张海燕 任锋 谢棒祥 樱川宣男 加茂功 陈德喜 李宁 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2015年第2期197-200,共4页
目的探讨可溶化人羊膜液（solubilized-amnion product,SAP）、绒毛膜液（solubilized-chorial product,SCP）、全羊膜液（amniotic fluid,AF）对羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSC）的增殖影响。方法用... 目的探讨可溶化人羊膜液（solubilized-amnion product,SAP）、绒毛膜液（solubilized-chorial product,SCP）、全羊膜液（amniotic fluid,AF）对羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSC）的增殖影响。方法用物理化学方法提取可溶化羊膜液、绒毛膜液、全羊膜液,用CCK-8试剂盒检测不同浓度的羊膜液、绒毛膜液、全羊膜液对h AMSC的增殖作用。剥去38~40周孕妇剖腹产术后羊膜,用消化酶消化后制备h AMSC。结果 h AMSC在可溶化羊膜液、绒毛膜液中生长良好,细胞增殖明显大于对照组,且培养液中的浓度具有显著依存性。全羊膜液培养前期增殖效果不明显,但培养4 d后出现浓度依存性的细胞增殖效果。这些生物材料对Hep G2无明显效果。结论可溶化人羊膜液、绒毛膜液、全羊膜液对干细胞具有促进增殖生长作用,有望成为干细胞研究与再生医疗领域中的新型生物材料。 展开更多
关键词 羊膜 绒毛膜 细胞增殖 生物材料
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