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孔子治国思想体系述评 被引量：3
1
作者 岳强 樊志浩 《党政干部学刊》 2017年第9期16-19,共4页
孔子的治国思想是一个有着内在逻辑的体系,礼法并用、德治为本构成其主要特征,并形成了一整套治国方略。在孔子那里,治国的最高理想就是圣人的"太上"之治,即"以德教民,而以礼齐之"。法作为社会秩序的最后防线,是礼... 孔子的治国思想是一个有着内在逻辑的体系,礼法并用、德治为本构成其主要特征,并形成了一整套治国方略。在孔子那里,治国的最高理想就是圣人的"太上"之治,即"以德教民,而以礼齐之"。法作为社会秩序的最后防线,是礼教等社会规范不能发挥作用情况下的最后治理手段。理解孔子的治国思想,我们需要注意德、礼、法都具有特定的内涵,它们与当时的分封制度紧密相连,都主张君臣民的界限不可逾越,而且包含着特定的习俗内容。 展开更多
关键词 孔子 治国 德治 礼法
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非洲猪瘟病毒衣壳五邻体顶点蛋白(H240R)原核表达及免疫原性研究 被引量：1
2
作者 王国强 张怡青 +8 位作者 李果 苏运芳 李玉林 尚立芝 毕胜利 樊志浩 李生涛 张振强 王云龙 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第9期2038-2044,共7页
【目的】原核表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)次要衣壳五邻体顶点蛋白(H240R),并研究其免疫原性。【方法】运用生物信息学软件初步预测分析H240R蛋白的理化性质、二级和三级结构。目的基因序列密码子优化后全基因合... 【目的】原核表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)次要衣壳五邻体顶点蛋白(H240R),并研究其免疫原性。【方法】运用生物信息学软件初步预测分析H240R蛋白的理化性质、二级和三级结构。目的基因序列密码子优化后全基因合成,利用基因重组技术构建重组载体pET28a/H,通过原核系统表达目的蛋白,筛选最优的诱导温度和诱导时间。目的蛋白(包涵体)通过含2M尿素洗涤缓冲液洗涤和亲和层析进行纯化。利用梯度透析对纯化的目的蛋白进行复性,Western和Dot-ELISA鉴定复性的目的蛋白。复性蛋白和佐剂ISA201乳化后免疫小鼠,评价H240R蛋白免疫原性及其在小鼠体内诱导的抗体消长规律。【结果】生物信息学分析显示H240R蛋白分子量约为27 kDa,等电点为9.40,无跨膜结构域,抗原指数较高。成功构建大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)/pET28a/H,在不同温度诱导条件下H240R蛋白均以包涵体形式表达。包涵体蛋白经过洗涤和亲和层析纯化后,纯度达85%以上。大约65%纯化蛋白可通过梯度透析进行复性。Western显示His抗体可以和融合蛋白结合显色,表明目的蛋白表达正确,Dot-ELISA显示阳性血清和复性的目的蛋白反应,表明复性的H240R蛋白具有正确的构象。复性蛋白免疫小鼠后,可刺激小鼠产生抗体,二免后10 d达到平台期,可以稳定持续30 d左右。【结论】ASFV衣壳五邻体顶点蛋白H240R在原核系统中以包涵体形式表达,纯化复性的目的蛋白具有良好的免疫原性,并且可以和阳性血清反应。这些可为进一步研究H240R蛋白的结构和功能,以及ASFV亚单位疫苗研制提供参考和思路。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 衣壳蛋白 五邻体顶点蛋白H240R 包涵体
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陆地棉衰老相关基因GhSAG101的克隆及抗病功能分析
3
作者 吴健锋 樊志浩 +4 位作者 武连杰 胡晓旺 韩知里 高巍 龙璐 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期187-197,共11页
【目的】挖掘棉花抗病相关基因,为创制抗病棉新品种提供理论依据和候选基因。【方法】以陆地棉(Gossypium hirsutum)TM-1为研究对象,克隆了棉花衰老相关基因GhSAG101(senescence-associated gene 101)。通过实时荧光定量聚合酶链式反应... 【目的】挖掘棉花抗病相关基因,为创制抗病棉新品种提供理论依据和候选基因。【方法】以陆地棉(Gossypium hirsutum)TM-1为研究对象,克隆了棉花衰老相关基因GhSAG101(senescence-associated gene 101)。通过实时荧光定量聚合酶链式反应分析GhSAG101在棉花幼苗不同组织中的表达量,以及在黄萎病菌诱导下表达量的变化;通过蛋白序列分析预测了GhSAG101的保守位点和活性位点;利用病毒诱导的基因沉默技术沉默棉花中GhSAG101,以空载体作为对照,通过棉花整株接种和离体叶片接种黄萎病菌研究GhSAG101沉默对黄萎病抗性的影响。【结果】GhSAG101基因编码区长度为1764 bp,编码587个氨基酸残基的蛋白质,包含水解酶家族、EDS1(enhanced disease susceptibility 1)家族的保守结构域和亲核位点。GhSAG101在根中表达量最高,茎中次之,在叶片中表达量最低,黄萎病菌侵染中后期GhSAG101在根中被诱导上调表达。在棉花中沉默GhSAG101基因降低了黄萎病菌在寄主体内的扩展速度,减缓了病害发生过程。【结论】GhSAG101负调控棉花对黄萎病的抗性,可作为棉花抗病育种的候选基因。 展开更多
关键词 陆地棉 GhSAG101 黄萎病抗性 衰老相关基因 抗病育种 负调控
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新型冠状病毒N蛋白的原核表达与纯化
4
作者 樊志浩 李玉林 +2 位作者 张恒 王旭东 王云龙 《轻工学报》 北大核心 2022年第4期34-40,共7页
采用生物信息学方法对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N蛋白)进行亲疏水性、抗原表位预测及多序列对比分析,构建重组质粒pET28a/N,在大肠杆菌原核表达体系下通过调整诱导温度和时间,提升蛋白溶解度和表达量,并对表达出的重组N蛋白... 采用生物信息学方法对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N蛋白)进行亲疏水性、抗原表位预测及多序列对比分析,构建重组质粒pET28a/N,在大肠杆菌原核表达体系下通过调整诱导温度和时间,提升蛋白溶解度和表达量,并对表达出的重组N蛋白进行纯化和鉴定。结果表明:SARS-CoV-2 N蛋白编码419个氨基酸,等电点(PI)为10.10,无跨膜区,无信号肽序列,局部亲水性较强,全长蛋白抗原指数较高,高度保守,与SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白同源性为90.5%;采用大肠杆菌原核表达体系发酵,工程菌BL21(DE3)/pET28a/N在IPTG终浓度为0.2 mmol/L、16℃低温条件下诱导20 h,蛋白呈可溶性表达,且此时蛋白的表达量最高,占总蛋白表达量的70%;通过Ni-NTA亲和层析、凝胶过滤层析纯化后的目的蛋白纯度达90%,分子质量为55 kDa,具有特异性。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 N蛋白 抗原表位 可溶性表达
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