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棕榈酸联合TGF-β1诱导脂肪性肝纤维化细胞模型 被引量:2
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作者 李雨 +3 位作者 李家瑞 李建宁 宋辉 杨怡 《宁夏医科大学学报》 2021年第6期549-555,共7页
目的通过使用不同浓度的棕榈酸(PA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)分别诱导人肝星状细胞(LX-2)与人肝癌细胞(HepG2)探讨制备脂肪性肝纤维化细胞模型的方法。方法选用人LX-2细胞与人HepG2细胞,分别给予100、200、400μmol·L^(-1) PA... 目的通过使用不同浓度的棕榈酸(PA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)分别诱导人肝星状细胞(LX-2)与人肝癌细胞(HepG2)探讨制备脂肪性肝纤维化细胞模型的方法。方法选用人LX-2细胞与人HepG2细胞,分别给予100、200、400μmol·L^(-1) PA处理及2、5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1处理,两组均处理24 h后利用MTT细胞毒性实验检测细胞存活率,通过油红O染色检测细胞脂肪变性,采用qRT-PCR与Western blot实验检测细胞α-平滑肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的mRNA及蛋白表达水平,了解细胞纤维化情况。结果MTT结果显示,不同实验组与对照组比较,PA分别诱导HepG2细胞与LX-2细胞24 h后,两组细胞存活率在100、200、400μmol·L^(-1) PA的诱导下出现不同程度降低(P均<0.01);TGF-β1分别诱导两组细胞24 h后,细胞存活率在5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导下出现不同程度降低(P均<0.05)。油红O染色结果显示,与对照组相比,不同浓度PA诱导24 h后,HepG2、LX-2细胞均随PA浓度的增大,脂滴形成增多,具有明显的浓度依赖性;不同浓度TGF-β1诱导24 h后,HepG2细胞内未见明显脂滴,2、5 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导后LX-2细胞内可见少量脂滴,10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导后可见LX-2细胞内脂滴明显增多。qRT-PCR结果显示,200、400μmol·L^(-1) PA诱导HepG2细胞内、400μmol·L^(-1) PA诱导LX-2细胞内α-SMA、CollagenⅠmRNA相对表达水平均上调(P均<0.01);10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导HepG2组细胞内CollagenⅠmRNA相对表达水平上调,5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导LX-2细胞内α-SMA、CollagenⅠmRNA相对表达水平均上调(P均<0.05)。Western blot结果显示,200、400μmol·L^(-1) PA及5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导后两组细胞内α-SMA及CollagenⅠ的蛋白相对表达水平均升高(P均<0.05)。结论200μmol·L^(-1) PA诱导HepG2细胞24 h、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导LX-2细胞与HepG2细胞24 h是成功构建脂肪性肝纤维化细胞模型的适宜条件。 展开更多
关键词 脂肪性肝纤维化模型 LX-2细胞 HEPG2细胞 TGF-Β1 棕榈酸
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调节小鼠ste20样激酶1的miRNA的筛选与功能验证
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作者 祁慧 李雨 +4 位作者 李家瑞 李建宁 宋辉 杨怡 《宁夏医科大学学报》 2020年第7期649-658,共10页
目的探讨哺乳动物ste20样激酶1(mammalian sterile20-like 1,MST1)基因的miRNAs对肝脏内脂质堆积的影响。方法利用高脂诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型小鼠与低脂对照组小鼠的肝脏及脂肪组织进行miRNAsequence分析,选取表达上调的miR... 目的探讨哺乳动物ste20样激酶1(mammalian sterile20-like 1,MST1)基因的miRNAs对肝脏内脂质堆积的影响。方法利用高脂诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型小鼠与低脂对照组小鼠的肝脏及脂肪组织进行miRNAsequence分析,选取表达上调的miRNAs,通过数据库miRDB、starBase筛选出可能靶向MST1靶基因3’UTR区的miRNAs进行研究,利用Western blot及双荧光素酶报告基因实验检测miRNAs对MST1的靶向效应。并在NAFLD细胞模型内进行MST1过表达或干扰,进一步验证miRNAs对MST1的表达调控作用。结果 Western blot实验显示得到mmu miR 149-5p和mmu miR 499-5p抑制鼠MST1基因蛋白水平的表达,Luciferases实验证明mmu miR 149-5p和mmu miR 499-5p靶向MST1能够增加AML-12细胞内的脂质堆积。结论mmu miR 149-5p、mmu miR 499-5p能够调控小鼠肝脏MST1表达并影响肝脏内脂质堆积。 展开更多
关键词 哺乳动物ste20样激酶1 非酒精性脂肪肝病 MIRNA
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