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四川部分地区猪流行性腹泻的分子流行病学调查 被引量：10
1
作者 阳酉萍 黄小波 +8 位作者 曹三杰 文心田 梁恩涛 张丹 张小会 段素芬 朱书全 文翼平 伍锐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期704-710,共7页
本研究对四川猪流行性腹泻病毒(PEDV)开展了分子流行病学调查。参照毒株CV777的M基因序列,设计1对特异性引物(预期扩增大小为392bp),建立了快速检测PEDV的RT-PCR技术,对四川9个地区规模化猪场的75份仔猪腹泻病料进行检测与分析。再根据... 本研究对四川猪流行性腹泻病毒(PEDV)开展了分子流行病学调查。参照毒株CV777的M基因序列,设计1对特异性引物(预期扩增大小为392bp),建立了快速检测PEDV的RT-PCR技术,对四川9个地区规模化猪场的75份仔猪腹泻病料进行检测与分析。再根据S基因的变异区域设计1对引物(扩增大小为947bp),选择扩增了四川9个地区的代表样品的S基因序列,并进行了进化与变异分析。结果显示,建立了检测PEDV的M基因的RT-PCR技术,并确定了最佳反应条件和反应体系,用该方法检测了四川75份腹泻病料,检出64份PEDV阳性,PEDV阳性检出率为86.67%,结果显示PEDV在四川地区发病季节除冬春季外,近年夏季也呈高发趋势。四川9株PEDV的S基因的核苷酸同源性为95.9%~100%,氨基酸同源性为95.1%~100%,四川毒株与14个国内外参考毒株的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为84.6%~99.5%和84.2%~99.5%;四川流行毒株的S基因(S蛋白)存在碱基(氨基酸)缺失和插入现象。结果表明,本研究从分子流行病学角度证实了四川部分地区PEDV的流行与变异情况,为指导该地区PEDV科学防控提供了依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 M基因 RT-PCR M基因 分子流行病学 序列分析
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携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的构建与鉴定 被引量：5
2
作者 梁恩涛 廖晓丹 +6 位作者 黄小波 文心田 曹三杰 阳酉萍 段素芬 张丹 张小会 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期264-270,共7页
为构建可有效抵抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)入侵的诱导黏膜免疫反应的核酸疫苗,采用RTPCR方法扩增了PEDV SC-L株的S基因主要抗原编码区域(简称S1),插入pMD19-T载体,构建载体pMD19-T-S1,再将S1基因片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构... 为构建可有效抵抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)入侵的诱导黏膜免疫反应的核酸疫苗,采用RTPCR方法扩增了PEDV SC-L株的S基因主要抗原编码区域(简称S1),插入pMD19-T载体,构建载体pMD19-T-S1,再将S1基因片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建了pVAXD-S1表达载体。经免疫荧光法鉴定S1基因可在COS-7细胞中正常表达后,将pVAXD-S1电转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,构建了携带S1基因的重组减毒沙门菌SL7207(pVAXD-S1),并对该重组菌株的生长曲线、携带质粒的稳定性、口服小鼠的安全性及目的基因在体内转录等特性进行了鉴定。结果显示,SL7207(pVAXD-S1)在含卡那霉素(100μg/mL)的培养环境中稳定性良好,以每只1×109 CFU口服免疫BALB/c小鼠具有良好的安全性,携带的S1基因能在小鼠回肠末端组织内正常转录及表达。本研究为深入开展减毒沙门菌疫苗菌株SL7207(pVAXD-S1)的免疫评价及构建PEDV与其他抗原基因联合免疫DNA疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 减毒鼠伤寒沙门茵 构建 鉴定
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减毒沙门氏菌递呈的TGEVS／N融合基因疫苗的口服免疫原性 被引量：2
3
作者 黄小波 张鑫淼 +4 位作者 曹三杰 文心田 李春松 梁恩涛 崔婷婷 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期594-600,共7页
目的研究携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合基因的重组减毒沙门氏菌的口服免疫原性。方法将真核质粒pVAX-S/N电转化鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得疫苗菌株SL7207(pVAX-S/N)。将菌株SL7207(pVAX-S/N)及对照组SL7207(pVAX-S)以1&#... 目的研究携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合基因的重组减毒沙门氏菌的口服免疫原性。方法将真核质粒pVAX-S/N电转化鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得疫苗菌株SL7207(pVAX-S/N)。将菌株SL7207(pVAX-S/N)及对照组SL7207(pVAX-S)以1×109 CFU/只灌胃免疫小鼠,测定免疫小鼠诱导的抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的血清IgG及肠道粘膜IgA抗体动态水平,同时测定42d免疫小鼠的干扰素水平。结果菌株SL7207(pVAX-S/N)构建成功,首免后2～6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌SL7207)的血清IgG,第4～6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的肠道粘膜IgA,SL7207(pVAX-S/N)诱导的IgG和IgA抗体最高滴度均略高于SL7207(pVAX-S),但差异不明显(P>0.05)。SL7207(pVAX-S/N)免疫42d小鼠诱导的干扰素浓度为659.45pg/mL,低于SL7207(pVAXD-S)组。结论 S/N融合基因疫苗SL7207(pVAX-S/N)具有良好的口服免疫原性,但与SL7207(pVAX-S)无明显差异。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 猪传染性胃肠炎病毒 融合双基因 构建 免疫原性
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减毒沙门氏菌投递的TGEVS基因疫苗口服免疫猪的动态规律 被引量：2
4
作者 张小会 张丹 +6 位作者 梁恩涛 余敏 黄小波 曹三杰 文心田 文翼平 伍锐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期33-38,共6页
目的研究TGEV S基因疫苗SL7207(PVAXD-TS)口服免疫仔猪后的动态免疫诱导规律。方法将口服疫苗SL7207(PVAXD-TS)、空载体菌株SL7207(PVAXD)以1.6×1011 CFU/头的剂量口服接种20日龄仔猪,以PBS为空白对照,2周后以2.0×1011 CFU的... 目的研究TGEV S基因疫苗SL7207(PVAXD-TS)口服免疫仔猪后的动态免疫诱导规律。方法将口服疫苗SL7207(PVAXD-TS)、空载体菌株SL7207(PVAXD)以1.6×1011 CFU/头的剂量口服接种20日龄仔猪,以PBS为空白对照,2周后以2.0×1011 CFU的剂量加强免疫。分别测定0、2、4、6和8周的血清IgG、IgA、TGEV中和抗体、细胞免疫反应IL-4、IFN-γ、外周血淋巴细胞增殖情况。结果仔猪口服免疫后第4周即可检测抗TGEV的特异性IgG和粪黏液IgA抗体;在免疫后第6周IgA、IgG、IL-4、IFN-γ抗体和外周血T淋巴细胞增殖与SL7207(PVAXD)、PBS间均存在统计学差异(P<0.01),并在第6周达到最高值;中和实验显示该疫苗诱导的血清IgG具有中和活性。结论证实以减毒沙门菌为载体的TGEV S基因疫苗口服免疫仔猪有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎 减毒沙门氏菌 S基因 仔猪 免疫原性
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OPCO自动润滑系统在悬挂输送机上的应用
5
作者 梁恩涛 徐蕾 赵子越 《设备管理与维修》 1997年第11期31-32,共2页
一汽集团公司二铸厂于1990年采用美国WEBB公司的先进技术,由承德矿山机械厂专门生产出WTJ6积放式悬挂输送机。该机共有七条各自独立的输送链组成运输系统。其用途是:(1)输送二铸厂生产出来的全部铸件和浇冒口及废铸件;(2)完成铸件、浇... 一汽集团公司二铸厂于1990年采用美国WEBB公司的先进技术,由承德矿山机械厂专门生产出WTJ6积放式悬挂输送机。该机共有七条各自独立的输送链组成运输系统。其用途是:(1)输送二铸厂生产出来的全部铸件和浇冒口及废铸件;(2)完成铸件、浇冒口分类,按生产指令把不同的铸件、浇冒口发至各自的工位;(3)完成铸件的冷却工艺,使温度很高的铸件在输送机上得到充分的冷却;(4)输送机具有贮存铸件功能。 展开更多
关键词 悬挂输送机 铸件 自动润滑系统 润滑器
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三株递呈猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的生物学特性研究
6
作者 梁恩涛 陈杰 +4 位作者 黄小波 文心田 曹三杰 吴学婧 朱书权 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期279-287,共9页
为了探究减毒沙门菌递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性,本研究对3株携带不同长度S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估。主要进行了对所构建的重组减毒沙门菌菌株SL7207(pVAX-S499-650)(长456bp,编码S蛋白N... 为了探究减毒沙门菌递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性,本研究对3株携带不同长度S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估。主要进行了对所构建的重组减毒沙门菌菌株SL7207(pVAX-S499-650)(长456bp,编码S蛋白N末端499—650位氨基酸)、SL7207(pVAX-S499-789)(长873bp,编码S蛋白N末端499—789位氨基酸)和前期构建的菌株SL7207(pVAXD-S1-789)(长2 367bp,编码S蛋白N末端1—789位氨基酸)的生物学特性研究,包括生长曲线测定、携带质粒的体内/外稳定性、回肠组织内的转录、在小鼠体内动态增殖规律、小鼠口服的安全性等。结果表明:SL7207(pVAX-S499-650)、SL7207(pVAX-S499-789)、SL7207(pVAXDS1-789)3种口服菌株均具有较高的稳定性;携带的目的基因可在肠道组织内转录;菌株在小鼠肝、脾中增殖约5周后逐渐被机体清除;小鼠口服具有良好的安全性。本研究结果表明减毒鼠伤寒沙门菌SL7207可递呈不同长度的S基因抗原片段,为后续开展3种菌株的实际口服免疫效果比较研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 减毒鼠伤寒沙门菌 口服 生物学特性
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