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地衣芽孢杆菌CP-16脂类水解酶的研究 被引量：3
1
作者 李爽 张铁鹰 +3 位作者 廖朝勇 梁争文 马霞飞 刘俊丽 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期4048-4057,共10页
本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CP-16的脂类水解酶,并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板,扩增脂类水解酶基因,转化入大肠杆菌中表达,获得重组酶L-4。研究重组酶... 本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CP-16的脂类水解酶,并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板,扩增脂类水解酶基因,转化入大肠杆菌中表达,获得重组酶L-4。研究重组酶L-4的适宜p H、p H稳定性、适宜温度、温度稳定性以及有机溶剂和金属离子对其相对活性的影响,同时探究其对角蛋白酶K水解天然羽毛角蛋白的作用。结果显示,获得的脂类水解酶基因大小为747 bp,编码248个氨基酸,在大肠杆菌中成功表达出重组酶L-4,其分子质量约为28.3 ku,酯酶活性为0.42 U/m L,适宜p H为6.5,适宜温度为50℃;在p H 6.5~9.5条件下处理30 min相对活性保持80%以上,在低于50℃温度条件下处理30 min相对活性保持70%以上。二价铁离子(Fe^(2+))、钠离子(Na^+)、锰离子(Mn^(2+))、钙离子(Ca^(2+))对重组酶L-4相对活性具有激发作用,钡离子(Ba^(2+))、锌离子(Zn^(2+))、铜离子(Cu^(2+))、镍离子(Ni^(2+))对重组酶L-4相对活性具有抑制作用。当有机溶剂浓度为30%时,重组酶L-4在二甲基亚砜(DMSO)和甲醇中保存97%和85%的相对活性,在丙酮、乙醇中保存45%以上的相对活性,在异丙醇中保存不到20%的相对活性,而在乙腈中相对活性基本完全丧失。用重组酶L-4预处理天然羽毛底物,可提高角蛋白酶K对底物的水解效率,促进率为4.32%。由此可见,脂类水解酶可降解羽毛表层脂质,可在促进角蛋白酶水解羽毛角蛋白中发挥作用。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 脂类水解酶 角蛋白 羽毛脂质 克隆表达
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饲用蛋白酶体外评价方法的建立 被引量：2
2
作者 白燕 高爱琴 +2 位作者 梁争文 邹林源 张铁鹰 《饲料工业》 北大核心 2015年第11期35-39,共5页
在畜禽日粮中添加蛋白酶是提高其蛋白消化的重要手段,探明不同蛋白酶对饲料蛋白消化的影响及建立科学评价方法是饲用蛋白酶科学应用的关键。试验选用31日龄肉仔鸡,根据实际测定的消化道参数设定体外消化法中的p H值、消化酶和含水量水平... 在畜禽日粮中添加蛋白酶是提高其蛋白消化的重要手段,探明不同蛋白酶对饲料蛋白消化的影响及建立科学评价方法是饲用蛋白酶科学应用的关键。试验选用31日龄肉仔鸡,根据实际测定的消化道参数设定体外消化法中的p H值、消化酶和含水量水平,同时,通过比较3种产物分离方法的变异系数,筛选了用于评价蛋白酶作用效果的适宜参数,为了明确是否添加抗生素,还观测了微生物的生长情况。结果表明,适用于评价蛋白酶对31日龄肉仔鸡作用效果的最适参数为:嗉囊阶段p H值为4.91,含水量为80%;胃阶段p H值为3.39,含水量83%,胃蛋白酶水平54.89 U/g食糜鲜重;小肠段p H值为6.20,含水量97%,胰蛋白酶、糜蛋白酶、淀粉酶活性水平为10.21、0.76和2 381.36 U/g食糜鲜重;产物分离方式宜选用磺基水杨酸沉淀蛋白后离心测定粗蛋白体外消化率;为了抑制微生物的生长,有必要在消化体系中运用抗生素。试验建立了一套适合于评价饲用蛋白酶对肉仔鸡作用效果的体外评价方法。 展开更多
关键词 蛋白酶 体外消化法 评价 肉仔鸡 消化率
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羽毛中脂质对羽毛角蛋白降解的影响 被引量：2
3
作者 王德山 张铁鹰 +1 位作者 梁争文 邹林源 《饲料工业》 北大核心 2014年第19期26-29,共4页
研究旨在探讨羽毛结构中的脂质对地衣芽孢杆菌CP-16降解羽毛的影响。通过制备天然羽毛粉和脱脂羽毛粉,比较地衣芽孢杆菌CP-16发酵液和该菌产4种蛋白酶(P-Glu、P-Alk、P-Trx、P-Ker)角蛋白酶活性的变化,发现羽毛的脱脂处理可明显提高蛋... 研究旨在探讨羽毛结构中的脂质对地衣芽孢杆菌CP-16降解羽毛的影响。通过制备天然羽毛粉和脱脂羽毛粉,比较地衣芽孢杆菌CP-16发酵液和该菌产4种蛋白酶(P-Glu、P-Alk、P-Trx、P-Ker)角蛋白酶活性的变化,发现羽毛的脱脂处理可明显提高蛋白酶水解角蛋白速度,其中,CP-16发酵液、P-Alk、P-Ker均提高近1倍,P-Glu和P-Trx提高了约2倍,并发现地衣芽孢杆菌CP-16发酵上清液和胞内液均有脂肪酶活性,分别为6.8 U/ml和1.1 U/ml。添加外源脂肪酶对CP-16菌降解天然羽毛有抑制作用,而对降解脱脂羽毛无影响。这说明地衣芽孢杆菌CP-16可能存在分泌脂类水解酶水解脂质降解羽毛的机制。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌CP-16 脂质 角蛋白 角蛋白酶
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植物角质降解菌的种属鉴定、发酵条件优化及酶学性质研究 被引量：2
4
作者 梁争文 张铁鹰 +1 位作者 李爽 刘俊丽 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期3567-3575,共9页
本试验旨在通过角质降解菌株X8P的种属鉴定、发酵条件优化和酶学性质研究,探讨降解植物表面角质层,进一步改善动物对植物纤维利用的可能新方案。试验通过形态观察和16S rDNA测序鉴定菌株X8P种属,并对其产酶所需碳源、氮源、发酵温度与... 本试验旨在通过角质降解菌株X8P的种属鉴定、发酵条件优化和酶学性质研究,探讨降解植物表面角质层,进一步改善动物对植物纤维利用的可能新方案。试验通过形态观察和16S rDNA测序鉴定菌株X8P种属,并对其产酶所需碳源、氮源、发酵温度与时间进行优化,其发酵液经硫酸铵盐析沉淀获得其胞外蛋白粗酶,并对其粗酶催化的适宜pH和pH稳定性、温度和温度稳定性,以及有机溶剂、表面活性剂和金属离子对其活性的影响进行研究。结果表明：1）菌株X8P经形态观察和分子鉴定为东方醋杆菌（Acetobacter orientalis）。2）菌株X8P适宜产酶发酵条件为溶菌肉汤（LB）培养基中37℃发酵4 d,1%橄榄油和1%葡萄糖明显促进菌株产酶,而1%可溶性淀粉明显抑制菌株产酶。3）该菌株胞外粗酶催化适宜pH和温度分别为6.5和45℃,且表现出一定pH稳定性,但在有机溶剂中不稳定,仅甘油中可保留全部活性,在二甲基亚砜（50%）中活性可保留66%。吐温（Tween）-20（1 mmol/L）、Tween-80（1 mmol/L）和聚乙二醇辛基苯基醚（1和10 mmol/L）可使菌株X8P粗酶活性提高3%-35%。金属离子钾离子（K^＋）、锰离子（Mn^2＋）（1和10 mmol/L）可使菌株X8P粗酶活性提高2%-20%。由此可见,菌株X8P具有一定的产角质酶潜力和应用前景,可进一步深入研究。 展开更多
关键词 角质 角质酶 角质降解菌 发酵条件优化 酶学性质
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