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案例中心教学法(CBL)结合客观结构化临床考试(OSCE)在八年制妇产科实习中的应用 被引量:18
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作者 吴鹏 伶俐 +2 位作者 李科珍 章汉旺 马丁 《中国高等医学教育》 2012年第2期134-135,139,共3页
为加强医学生临床实践能力的培养,在八年制学生妇产科实习过程中,实行案例中心教学法(CBL)结合客观结构化临床考试(OSCE)考核方法,并对其测试过程、结果分析、工作建议等作较为全面的阐述。
关键词 客观结构化临床考试 案例中心教学法
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人胚神经干细胞的长期贴壁培养和鉴定 被引量:14
2
作者 祝畅 张传汉 +2 位作者 刘志恒 伶俐 高峰 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期322-324,共3页
目的:探讨人胚神经干细胞的长期贴壁培养条件及传代方法。方法:在多种培养条件下,分别从9周和16周人胚脑中分离培养神经干细胞,应用免疫细胞化学的方法对所分离细胞的巢蛋白表达、自我更新能力和多向分化潜能进行鉴定。结果:采用高密度... 目的:探讨人胚神经干细胞的长期贴壁培养条件及传代方法。方法:在多种培养条件下,分别从9周和16周人胚脑中分离培养神经干细胞,应用免疫细胞化学的方法对所分离细胞的巢蛋白表达、自我更新能力和多向分化潜能进行鉴定。结果:采用高密度悬浮培养法能有效地从两种胚龄的人胚脑或室管膜下区中分离出神经干细胞,而采用贴壁培养法的人胚神经干细胞能保持干细胞的特性稳定增殖4个月。结论:从大小胚龄的人胚中均可成功分离培养人胚神经干细胞,贴壁培养的人胚神经干细胞能稳定增殖,是进一步进行人胚神经干细胞转基因研究的良好模型。 展开更多
关键词 人胚胎 神经干细胞 细胞培养
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核因子-κB在神经干细胞中的作用 被引量:7
3
作者 伶俐 张传汉 《医学研究生学报》 CAS 2008年第1期79-81,85,共4页
核因子-κB(NF-κB)是一种功能多样的核转录因子,广泛存在于中枢神经系统。近年来研究表明,NF-κB也存在于神经干细胞(NSC)中,在NSC的增殖、迁移和分化等过程中发挥了重要的作用,现就该新兴研究领域的最新进展作一综述。
关键词 核因子-ΚB 神经干细胞 增殖 迁移 分化
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地氟烷对“非体外循环下”冠状动脉搭桥术患者心肾功能的影响 被引量:9
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作者 毕江江 樊龙昌 +7 位作者 姚文龙 祝畅 杨少兵 方刚 杜翔曦 伶俐 杨春 罗爱林 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期317-319,328,共4页
目的 观察地氟烷对“非体外循环下”冠状动脉搭桥术(OPCABG)患者的心、肾功能的影响。方法选取即将择期接受OPCABG术的患者79例,随机分为丙泊酚组( n =36)和地氟烷组( n =43)。所有患者术前1 h均肌注苯巴比妥0.1 g和吗啡5 mg;麻醉诱导:... 目的 观察地氟烷对“非体外循环下”冠状动脉搭桥术(OPCABG)患者的心、肾功能的影响。方法选取即将择期接受OPCABG术的患者79例,随机分为丙泊酚组( n =36)和地氟烷组( n =43)。所有患者术前1 h均肌注苯巴比妥0.1 g和吗啡5 mg;麻醉诱导:应用舒芬太尼1 μg/kg、依托咪酯0.3 mg/kg、罗库溴铵0.9 mg/kg;丙泊酚组麻醉维持:丙泊酚靶控输注(TCI)3.5~4.0 μg/min,舒芬太尼TCI 2~3 ng/mL,罗库溴铵0.04 mg/(kg·h);地氟烷组麻醉维持:地氟烷最低肺泡有效浓度(MAC)7%~8%,舒芬太尼TCI 2~3 ng/mL,罗库溴铵0.04 mg/(kg·h)。检测患者围术期血肌红蛋白(Mb)、高敏心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)、氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、血肌酐(Cr)水平及尿量变化,记录麻醉及手术时长、血管移植时长、术后机械通气时间、术后ICU留观时间及总住院时间,并观察心脏节段性室壁运动异常的发生率、心电图动态监测指标、血流动力学指标及术后并发症。结果地氟烷组患者术后24 h NT-proBNP水平明显低于丙泊酚组( P =0.033);地氟烷组术后3 d血Cr水平明显低于丙泊酚组( P <0.05);丙泊酚组术后3 d尿量明显低于地氟烷组( P <0.05);地氟烷组术后总住院天数明显少于丙泊酚组( P =0.035)。两组患者术后24 h肌红蛋白、cTnI、CK-MB水平、术后机械通气时间及ICU留观时间等差异均无统计学意义(均 P >0.05)。结论地氟烷吸入麻醉可改善患者OPCABG术后心功能及肾功能指标,减少术后住院天数,适用于心脏病手术麻醉。 展开更多
关键词 “非体外循环下”冠状动脉搭桥术 地氟烷 心功能 肾功能
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APC-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点 被引量:4
5
作者 姚文龙 张传汉 +4 位作者 钱巍 邱瑾 柳璐 祝畅 伶俐 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2009年第13期1161-1164,共4页
目的:探讨细胞周期末期促进复合物(APC)-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点.方法:取健康成年雄性SD大鼠脑组织制作冰冻切片,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位;免疫荧光双标检测Cdh1表达的细胞定位情况.取出生24h内乳鼠,原代培养神经元... 目的:探讨细胞周期末期促进复合物(APC)-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点.方法:取健康成年雄性SD大鼠脑组织制作冰冻切片,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位;免疫荧光双标检测Cdh1表达的细胞定位情况.取出生24h内乳鼠,原代培养神经元及神经干细胞,免疫组化检测NeuN进行神经元鉴定;Nestin染色进行神经干细胞初步鉴定;采用GFAP,MAP2免疫组化染色鉴定NSC分化特性.分别提取神经干细胞与神经元总RNA,采用实时定量PCR检测APC2个调节亚基Cdh1与CDC20的表达.结果:大鼠脑片免疫组化DAB染色显示Cdh1在海马、皮层均有大量表达,免疫荧光双标显示Cdh1表达主要定位于神经元中,星形胶质细胞表达较少.与神经干细胞相比,神经元中Cdh1 mRNA表达升高[(1.00±0.05)vs(2.10±0.07),P<0.05],但CDC20 mRNA几乎没有表达(1.00±0.04,0.02±0.01,P<0.05).结论:APC-Cdh1在大鼠脑组织中有大量表达,主要定位于神经元,且神经元中Cdh1表达高于神经干细胞. 展开更多
关键词 细胞周期末期促进复合物 神经元 神经干细胞
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曲古抑菌素A诱导Hela细胞凋亡过程中端粒酶逆转录酶表达的变化 被引量:1
6
作者 吴鹏 奚玲 +6 位作者 陈刚 伶俐 王蓓蓓 罗丹枫 卢运萍 周剑锋 马丁 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期421-425,共5页
目的:观察Trichostatin A(TSA)对子宫颈癌细胞株Hela细胞的体外作用,探讨TSA对子宫颈癌细胞的作用机制,以及细胞凋亡与端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)之间的关系。方法:倒置相差显微镜观察细胞形态变化... 目的:观察Trichostatin A(TSA)对子宫颈癌细胞株Hela细胞的体外作用,探讨TSA对子宫颈癌细胞的作用机制,以及细胞凋亡与端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)之间的关系。方法:倒置相差显微镜观察细胞形态变化;磺酰罗丹明B(sulforhodamine B;SRB)法检测药物动力学特征;流式细胞仪检测药物作用前后Hela细胞凋亡情况;RT-PCR检测hTERT和p21Waf1基因变化;免疫荧光检测TSA作用前后hTERT表达变化。结果:在0.5~2.0μmol/LTSA作用下,Hela细胞生长明显受抑制。倒置相差显微镜检测Hela细胞经TSA处理后形态发生明显变化。2.0μmol/LTSA作用于Hela细胞,48h以前表现细胞周期的变化,48h后则出现明显的凋亡。hTERT经1.0μmol/LTSA诱导后表达下调,呈时效关系。免疫荧光检测hTERT蛋白经1μmol/LTSA处理后表达下降;结论:一定浓度的TSA可以诱导子宫颈癌细胞株Hela凋亡,其作用机制可能与下调hTERT表达有关。 展开更多
关键词 曲古抑菌素A 宫颈癌 凋亡 端粒酶逆转录酶
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MDT模式下心胸外科麻醉规培教学的探索与实践 被引量:5
7
作者 祝畅 姚文龙 +1 位作者 伶俐 张传汉 《中国继续医学教育》 2020年第16期21-23,共3页
目的探讨多学科诊疗模式(MDT)在麻醉科住院医师规范化培训心胸外科麻醉教学模式改革中的应用效果。方法选取医院2018年10月-2019年4月在麻醉科轮转心胸外科的规范化培训医师40人,随机分为MDT教学模式组和传统教学模式组接受培训,每组20... 目的探讨多学科诊疗模式(MDT)在麻醉科住院医师规范化培训心胸外科麻醉教学模式改革中的应用效果。方法选取医院2018年10月-2019年4月在麻醉科轮转心胸外科的规范化培训医师40人,随机分为MDT教学模式组和传统教学模式组接受培训,每组20人,对比两组学员出科考试成绩、学员及团队成员满意度。结果 MDT教学模式组和传统教学模式组出科考试成绩,学习兴趣,教学组织模式的喜爱程度,自评对培养临床逻辑思维能力的益处,对教学过程的综合满意度的差异均无统计学意义(P> 0.05);学员对MDT教学模式的适应程度略差于传统教学模式组,但MDT教学模式组的教学内容更切合临床需要,学员和团队合作人员的满意度也高于传统教学模式组,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论 MDT教学模式能提高教学效率,同时提高学员及团队合作成员的临床合作满意度。 展开更多
关键词 麻醉 心脏手术 住院医师规范化培训 多学科诊疗模式 教学改革 临床教学 应用效果
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问题为基础教学法在住院医师培训椎管内麻醉教学中的应用 被引量:3
8
作者 伶俐 吴鹏 +1 位作者 高峰 张传汉 《中国继续医学教育》 2017年第11期11-13,共3页
目的拟在住院医师培训椎管内麻醉教学中实行问题为基础教学法(PBL)。方法选取住院医师培训学员25名,应用PBL教学法进行椎管内麻醉培训。首先由教师编制病例,提前交给学生,通过设置的问题引导学生自学,收集资料,尝试解决问题。课堂教学... 目的拟在住院医师培训椎管内麻醉教学中实行问题为基础教学法(PBL)。方法选取住院医师培训学员25名,应用PBL教学法进行椎管内麻醉培训。首先由教师编制病例,提前交给学生,通过设置的问题引导学生自学,收集资料,尝试解决问题。课堂教学分为导出病案、学员讨论及汇报和教师总结等环节。教学结束后进行问卷调查。结果相对于讲授为基础的教学,学员对PBL教学法更为满意;认为PBL教学法对教学效果起到了良好的作用;在培养临床思维,提高病史总结、甄别和诊断能力,激发学习兴趣,提高表达能力和信息获取与处理能力等方面起到了良好作用;学生愿意进行更多的PBL授课。结论在住院医师培训椎管内麻醉教学中应用PBL教学法,取得了良好的教学效果。 展开更多
关键词 教育 教学 麻醉学
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非病毒载体负载增强型绿色荧光蛋白转染永生化神经前体细胞 被引量:3
9
作者 伶俐 刘志恒 +1 位作者 张传汉 高峰 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第7期589-592,共4页
目的:寻找能高效转染永生化神经前体细胞(IN-PC)的非病毒载体,观察转染后增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.方法:用阳离子脂质体Lipofectamine 2000,TRANS-fection或阳离子聚合物Sofast分别负载质粒EGFP-C1转染INPC,利用荧光显微镜检测... 目的:寻找能高效转染永生化神经前体细胞(IN-PC)的非病毒载体,观察转染后增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.方法:用阳离子脂质体Lipofectamine 2000,TRANS-fection或阳离子聚合物Sofast分别负载质粒EGFP-C1转染INPC,利用荧光显微镜检测转染后24h的转染效率.对转染效率最高的一种载体,观察其转染后12,24,48和72h转染效率,确定EGFP表达最高峰.用台盼蓝排斥试验检测转染和未转染细胞的活力.质粒EGFP-C1转染INPC后,经G418筛选,挑选细胞克隆,命名为INPC/EGFP,观察其EGFP阳性率.应用巢蛋白抗体鉴定INPC/EGFP.50mL/L胎牛血清诱导IN-PC/EGFP分化,观察分化后细胞的形态及EGFP表达.结果:Lipofectamine 2000,TRANSfection和Sofast转染INPC后24h,转染效率分别为(25.5±2.9)%,(4.0±1.7)%,(7.9±1.4)%.Lipofectamine 2000的转染效率最高.其转染后12,24,48和72h的转染效率分别为(17.1±0.7)%,(25.5±2.9)%,(19.4±0.9)%,(15.6±1.4)%,EGFP在转染后24h表达最高.INPC/EGFP中,EGFP阳性率约为95%.INPC/EGFP巢蛋白表达阳性,其分化后呈神经元或星形胶质细胞样,且胞体及突起中仍可见绿色荧光.结论:Lipofectamine2000可高效转染INPC.EGFP是INPC理想的示踪方法之一. 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白质类 基因表达 转染 神经前体细胞
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RNA干扰技术抑制smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响 被引量:3
10
作者 吴鹏 田媛 +4 位作者 伶俐 陈刚 卢运萍 周剑锋 马丁 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期167-171,共5页
目的:探讨用RNA干扰技术下调smad 4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:用DNA重组技术将针对人smad 4基因不同部位所设计的三对短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4 shRNA表达载体pGe... 目的:探讨用RNA干扰技术下调smad 4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:用DNA重组技术将针对人smad 4基因不同部位所设计的三对短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4 shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测抑制smad4基因对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:成功构建分别携带三段shRNA及空载体对照的重组质粒pGenesil-smad4-shRNA1、2、3和pGenesil-con,三种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4 mRNA及smad4蛋白表达,筛选出的HeLa/shRNA2细胞增殖能力明显增强。结论:应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断smad 4基因表达及功能的shRNA,smad 4基因表达下调能明显促进宫颈癌细胞生长。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 RNA干扰 基因表达调控 基因 SMAD4
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局灶性脑缺血大鼠永生化神经前体细胞移植的可行性 被引量:1
11
作者 姚文龙 张传汉 +3 位作者 钱巍 祝畅 伶俐 刘志恒 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第45期36-38,I0004,共4页
目的:观察局灶性脑缺血大鼠移植永生化神经前体细胞在脑内的存活情况,为进一步研究细胞移植及转基因治疗脑缺血提供有意义的数据及图像资料。方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室进行。①选取... 目的:观察局灶性脑缺血大鼠移植永生化神经前体细胞在脑内的存活情况,为进一步研究细胞移植及转基因治疗脑缺血提供有意义的数据及图像资料。方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室进行。①选取健康雄性SD大鼠18只,随机数字表法分为假手术组、脑缺血对照组、细胞移植组,6只/组。②脑缺血对照组、细胞移植组采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉缺血模型。假手术组仅分离血管,不进行脑缺血处理。③应用无血清Neurobasal培养基进行INPC培养,移植前加入BrdU,使终浓度为10μmol/L,标记3d,然后取出细胞爬片,无水甲醇固定10min,SP法检测BrdU标记细胞阳性率。④将BrdU标记3d的永生化神经前体细胞用胰蛋白酶消化,离心重悬后使细胞密度达到2×1010L-1,细胞移植组于大鼠脑缺血后3d取5μL永生化神经前体细胞移植到右侧纹状体缺血半暗带区,以前囟为零点,即A:-0.5mm,R:2.5mm,V:-4.5mm。脑缺血对照组仅注射等量磷酸盐缓冲液。⑤各组分别于缺血后6h,1d,3d及细胞移植后1周对大鼠进行Longa神经功能评价(0~4分,分数越高表示神经功能损伤越严重),缺血后6h神经功能评分≥1分视为模型成功。⑥细胞移植后1周处死各组大鼠,取脑组织制作冰冻切片,通过免疫组织化学SP法检测BrdU的表达,观察移植的永生化神经前体细胞在脑内缺血半暗带区的存活情况。结果:18只大鼠均进入结果分析。①体外检测移植细胞BrdU标记阳性率:永生化神经前体细胞加入BrdU标记3d后,免疫组化检测阳性细胞胞核呈棕黄色,细胞阳性率达95%以上。②造模后不同时间点各组大鼠神经功能评价:缺血后6h,脑缺血对照组与细胞移植组每只大鼠神经功能Longa评分均≥1分,表明造模成功,且Longa评分均明显高于假手术组[(1.70±0.48)分,(1.60±0.52)分,0分,P<0.05]。缺血后6h,1d,3d及细胞移植后1� 展开更多
关键词 抗原 多瘤病毒转化 干细胞 脑缺血 移植 大鼠
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转IκBα突变型基因永生化神经前体细胞株的构建 被引量:2
12
作者 刘志恒 祝畅 +2 位作者 伶俐 姚文龙 张传汉 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期756-759,共4页
目的掏建转IΚBα突变型基因水生化神经前体细胞抹(INPCs)。方法限制性内切酶双酶切含IΚBα突变型基因的质粒pBluescript/CNP/IΚBαM,得到目的基因片断IΚBα突变型基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,酶切反应及DNA测序鉴定莆组载体... 目的掏建转IΚBα突变型基因水生化神经前体细胞抹(INPCs)。方法限制性内切酶双酶切含IΚBα突变型基因的质粒pBluescript/CNP/IΚBαM,得到目的基因片断IΚBα突变型基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,酶切反应及DNA测序鉴定莆组载体pcDNA3.1/IΚBαM。利用脂质体介导的基因转染技术分别将载体pcDNA3.1及pcDNA3.1/IΚBαM转染INPCs.经G418(150μg/ml)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养.2周后用RT-PCR和Western blot检测阳性细胞株中IΚBα的表达,用受NF-ΚB特异性启动表达的荧光素酶报告基因检测阳性细胞株中NF-κB的活性。结果经限制性酶切分析及DNA测序证实重组载体pcDNA3.1/IκBαM中含有IκBα突变型基因.转pcDNA3.1/IκBαM永生化神经前体细胞中IκBα的总mRNA表达增高,Western blot可检测到突变型IκBα蛋白的表达,且细胞中NF-κB活性下降。结论成功构建了,转IκBα突变型基因INPCs。 展开更多
关键词 I—κB 神经元 基因表达
原文传递
Cdh1小干扰RNA载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 柳璐 姚文龙 +2 位作者 祝畅 伶俐 张传汉 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第17期1544-1546,共3页
目的:构建Cdh1小干扰RNA载体,并将其转染至Hela细胞进行鉴定.方法:根据pENTRTM/H1/TO中间载体要求,设计Cdh1小干扰RNA载体的干扰序列及无干扰作用的对照序列,合成相应的DNA单链,退火后连接到pENTRTM/H1/TO线性载体,形成完整载体,进行测... 目的:构建Cdh1小干扰RNA载体,并将其转染至Hela细胞进行鉴定.方法:根据pENTRTM/H1/TO中间载体要求,设计Cdh1小干扰RNA载体的干扰序列及无干扰作用的对照序列,合成相应的DNA单链,退火后连接到pENTRTM/H1/TO线性载体,形成完整载体,进行测序鉴定.分别将测序鉴定成功的Cdh1小干扰RNA载体及对照载体采用脂质体法转染Hela细胞,转染后48h提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用实时定量PCR和WesternBlot检测Cdh1的表达.结果:经测序鉴定成功构建Cdh1小干扰RNA载体和对照载体,分别命名为pENTR/shCdh1和pENTR/shcontrol.与未转染及转染pENTR/shcontrol的Hela细胞相比,转染pENTR/shCdh1的Hela细胞Cdh1表达降低(P<0.05).结论:成功构建Cdh1小干扰RNA载体,并能下调Hela细胞Cdh1的表达. 展开更多
关键词 细胞周期 细胞分裂 RNA 小干扰 HELA细胞
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smad4 shRNA真核表达质粒的构建及鉴定 被引量:2
14
作者 吴鹏 田媛 +4 位作者 伶俐 陈刚 卢运萍 周剑锋 马丁 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期553-556,643,共5页
目的针对smad4基因的不同部位,构建不同smad4shRNA表达质粒载体,在转录后水平抑制smad4的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenes... 目的针对smad4基因的不同部位,构建不同smad4shRNA表达质粒载体,在转录后水平抑制smad4的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。结果3个smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westernblotting均证实:3种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4mRNA丰度及smad4蛋白表达。结论成功构建了smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3,并筛选出特异而高效地阻断smad4表达的克隆。此实验结果为进一步研究smad4蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 宫颈癌 SHRNA SMAD4
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部分全麻药对突触发生期中枢神经系统发育的影响及机制 被引量:2
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作者 燕琳 伶俐 张传汉 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第4期430-433,共4页
近年的研究表明,在未成熟哺乳动物突触发生期,短暂性拮抗N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-methyl-D-asparate,NMDA)受体或过度激动γ-氨基丁酸A(gamma-amino butyric acid,GABAA)受体可诱发大脑神经细胞的大量凋亡、脊髓凋亡性退变。这些药物... 近年的研究表明,在未成熟哺乳动物突触发生期,短暂性拮抗N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-methyl-D-asparate,NMDA)受体或过度激动γ-氨基丁酸A(gamma-amino butyric acid,GABAA)受体可诱发大脑神经细胞的大量凋亡、脊髓凋亡性退变。这些药物主要有全身麻醉药、抗惊厥药及乙醇等。人类突触发生高峰期为妊娠后3个月到出生后3年。妊娠晚期、新生儿及婴幼儿刚好处在这个时间窗,因此该类药物对脑发育的影响成为人们研究的热点,其机制的阐明可能对新生儿、婴幼儿以及孕产妇临床合理用药及新药的开发有指导意义。文中就部分全麻药对突触发生期中枢神经系统发育的影响及机制作一综述。 展开更多
关键词 全身麻醉药 NMDA受体拮抗剂 GABAA受体激动剂 突触发生期 凋亡
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人与鼠神经干细胞体外培养特性的比较 被引量:2
16
作者 祝畅 刘志恒 +2 位作者 伶俐 高峰 张传汉 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1216-1218,I0001,共4页
目的:比较分析人及鼠神经干细胞体外培养的生长特性。方法:实验于2004-04/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科实验室完成。孕14d及新生Wistar大鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,孕9周及孕16周水囊引产胎儿经胎... 目的:比较分析人及鼠神经干细胞体外培养的生长特性。方法:实验于2004-04/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科实验室完成。孕14d及新生Wistar大鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,孕9周及孕16周水囊引产胎儿经胎儿家属同意捐赠,用1×1010L-1或1×108L-1的起始密度分离培养人和鼠神经干细胞。原代培养出现大量悬浮神经干细胞球后,一部分细胞继续悬浮培养,另一部分细胞种入用0.001%多聚鸟氨酸和0.2%明胶包被的培养瓶中贴壁培养。在培养9代左右的人神经干细胞及4代左右的鼠神经干细胞培养液中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷或5%胎牛血清继续培养1周。应用抗巢蛋白及抗5-溴脱氧尿嘧啶核苷作为人及鼠神经干细胞初步鉴定,应用抗神经胶质酸性蛋白、微管相关蛋白2和2,3-环核苷酸磷酸二脂酶抗体检测其分化,SABC法进行免疫细胞化学染色。结果:①用较高(1×1010L-1)起始密度可有效的分离培养原代人神经干细胞,较低(1×108L-1)的起始密度对鼠神经干细胞分离有利,贴壁培养的人及鼠神经干细胞保持干细胞的特性长期增殖。②人神经干细胞自发聚集能力强、培养维持时间长,相比较而言,鼠神经干细胞单个细胞体积大、分裂增殖快、对起始密度依赖性小、贴壁能力强。③悬浮培养及贴壁培养的人和鼠神经干细胞,经抗巢蛋白及抗5-溴脱氧尿嘧啶核苷免疫细胞化学染色,均显示阳性。血清诱导分化后,免疫细胞化学染色可显示出微管相关蛋白2、神经胶质酸性蛋白染色阳性的细胞,人与鼠神经干细胞分化后2,3-环核苷酸磷酸二脂酶的染色效果不佳。结论:人神经干细胞和鼠神经干细胞体外培养时生长特性有较大差异。表现为前者需要较高的起始培养密度、聚集能力强、培养维持时间长,后者单个细胞体积大、分裂增殖较快、贴壁能力强。 展开更多
关键词 神经科学 干细胞 细胞培养技术
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人NF-κB亚基p65、p50基因重组逆转录病毒表达载体及包装细胞株的建立和鉴定 被引量:2
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作者 伶俐 刘志恒 +2 位作者 张传汉 祝畅 高峰 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期97-100,108,共5页
目的构建分别携带人核因子-κB(NF-κB)亚基p65、p50基因的逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。方法以RcCMV-p65、RcCMV-p50质粒为模板,PCR扩增p65、p50基因编码区全长序列,分别克隆至逆转录病毒空载体pMSCVneo、pMSCVhyg,酶... 目的构建分别携带人核因子-κB(NF-κB)亚基p65、p50基因的逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。方法以RcCMV-p65、RcCMV-p50质粒为模板,PCR扩增p65、p50基因编码区全长序列,分别克隆至逆转录病毒空载体pMSCVneo、pMSCVhyg,酶切、测序鉴定。将重组载体及空载体分别转染包装细胞系PT67,以G418或潮霉素筛选产毒细胞株。收集病毒悬液,测定病毒滴度,并瞬时感染NIH3T3细胞及人神经干细胞,72h后分别采用RT-PCR和免疫细胞化学观察p65、p50的表达。结果重组逆转录病毒载体pMSCVneo-p65、pMSCVhyg-p50的酶切、测序鉴定正确。将筛选所得的高效产毒细胞株分别命名为PT67/pMSCVneo-p65、PT67/pMSCVneo、PT67/pMSCVhyg-p50及PT67/pMSCVhyg,测定病毒滴度分别为4×105、6×105、2×105及1×105cfu/ml。pMSCVneo-p65、pMSCVhyg-p50病毒悬液瞬时感染NIH3T3细胞72h后,细胞p65、p50亚基mRNA的表达明显升高;瞬时感染人神经干细胞(hNSC)72h后,部分细胞胞核呈p65和p50阳性染色。结论成功构建了分别携带人p65、p50基因的逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、正确生产逆转录病毒的细胞株。为探讨转NF-κB基因神经干细胞在缺血性卒中的运用前景奠定了实验基础。 展开更多
关键词 干细胞移植 脑缺血 核因子ΚB 逆转录病毒科
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慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元磷酸化突触素Ⅰ表达的变化 被引量:2
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作者 万里 伶俐 张传汉 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期155-158,共4页
目的观察慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元磷酸化突触素Ⅰ(p-Synapsin Ⅰ)表达的变化。方法雄性SD大鼠45只,体重150~180g,月龄1~2月,随机分为5组(n=9):假手术组(S组)、生理盐水组(NS组)、吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)... 目的观察慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元磷酸化突触素Ⅰ(p-Synapsin Ⅰ)表达的变化。方法雄性SD大鼠45只,体重150~180g,月龄1~2月,随机分为5组(n=9):假手术组(S组)、生理盐水组(NS组)、吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和吗啡+氯胺酮组(M+K组)。除S组外,所有大鼠均行鞘内置管,恢复3d后鞘内给药,NS组给予生理盐水40出,M组给予吗啡20μg,K组给予氯胺酮30μg,M+K组分别给予吗啡20μg及氯胺酮30μg,2次/d,连续7d。于给药前(T0,基础状态)、给药后1、3、5、7d及停药后1d(T1-5)时测定机械缩爪阈值(PWT)与热缩爪潜伏期(PWL),最后一次测定痛阈后处死大鼠,取L3~6脊髓背角,测定p-SynapsinⅠ(Sei603)的表达。结果与基础值比较,M组T1,2时PwT升高,T4,5时PWT降低,T1~3时PWL延长,T5时PWL缩短,M+K组T1~5时PWT升高,PWL延长(P〈0.05)。与S组和NS组比较,M组T1,2时PWT升高,T4,5时PWT降低,T1-3时PWL延长,T5时PWL缩短,M+K组T1~5时PWT升高,PWL延长(P〈0.05),K组PWT和PWL差异无统计学意义(P〉0.05)。与M组比较,M+K组T2-5时PWT升高,T3-5时PWL延长(P〈0.05)。与S组和NS组比较,M组和M+K组p-Synapsin Ⅰ(Set603)表达上调(P〈0.05),K组p-Synapsin Ⅰ(Ser603)表达差异无统计学意义(P〉0.05);与M组比较,M+K组p-Synapsin Ⅰ(Set603)表达下调(P〈0.05)。结论脊髓背角神经元Synapsin Ⅰ的磷酸化参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成,吗啡促进Synapsin Ⅰ磷酸化的部分机制与激活N-甲基-D-天冬氨酸受体有关。 展开更多
关键词 吗啡 药物耐受性 脊髓 突触囊泡蛋白
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大鼠永生化神经前体细胞CDH1小干扰RNA真核载体的构建 被引量:1
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作者 姚文龙 张传汉 +4 位作者 柳璐 祝畅 邱瑾 伶俐 田玉科 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期919-921,共3页
目的构建大鼠永生化神经前体细胞(INPC)CDH1小干扰RNA(siRNA)真核载体。方法根据大鼠CDH1基因的编码序列设计3个小发夹RNA(shRNA)干扰序列及1个阴性对照序列,根据pENTR/H1/TO中间载体说明书设计并合成相应的DNA单链,退火后分... 目的构建大鼠永生化神经前体细胞(INPC)CDH1小干扰RNA(siRNA)真核载体。方法根据大鼠CDH1基因的编码序列设计3个小发夹RNA(shRNA)干扰序列及1个阴性对照序列,根据pENTR/H1/TO中间载体说明书设计并合成相应的DNA单链,退火后分别连接到pENTR/H1/TO线性载体上,形成完整载体,提取CDH1 siRNA真核载体后(分别为CDH1 siRNA1、CDH1 siRNA2、CDH1 siRNA3和CDH1 siRNA对照),进行DNA测序鉴定。采用Lipofectamine 2000法,分别将成功构建的CDH1 siRNA真核载体转染大鼠INPC,于转染24h和48h时计算INPC转染效率=INPC成功转染数/细胞总数,于转染48h时提取细胞总RNA,采用实时定量PCR法检测INPC CDH1 mRNA的表达。结果经DNA测序鉴定构建的3个CDH1 siRNA真核载体和1个阴性对照载体所插入的RNA干扰序列均正确,无碱基突变或缺失;INPC转染24h与48h时转染效率分别为(54±5)%和(36±4)%;CDH1 sinNA2转染INPC 48h时INPC CDH1 mRNA表达水平较CDH1 siRNA3降低,且两者均低于CDH1 siRNA1(P〈0.05)。结论本研究成功构建大鼠INPC CDH1 siRNA真核载体。 展开更多
关键词 细胞周期末期促进复合物 RNA 小干扰 干细胞
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GFAP特异性启动IκBα突变型基因真核表达载体的构建和鉴定 被引量:1
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作者 祝畅 刘志恒 +2 位作者 张传汉 姚文龙 伶俐 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2007年第1期14-17,共4页
目的构建GFAP特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体。方法用基因工程的方法将潮霉素抗性基因和GFAP特异性启动的IκBα突变型基因定向克隆入载体pBluescript-SK中,酶切反应鉴定重组载体SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM... 目的构建GFAP特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体。方法用基因工程的方法将潮霉素抗性基因和GFAP特异性启动的IκBα突变型基因定向克隆入载体pBluescript-SK中,酶切反应鉴定重组载体SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM。用脂质体法分别将载体SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM转入永生化星形胶质细胞株和PC12细胞株中,经潮霉素(150μg/mL)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养,Westernblot检测阳性细胞株中IκBα的表达,以NF-κB特异性启动表达的荧光素酶报告基因检测细胞中NF-κB的活性。结果限制性酶切分析证实重组载体成功,稳定转染SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM的PC12细胞内IκBα蛋白质表达及细胞中NF-κB活性无差异,稳定转染SK-hyg-GFAP/IκBαM的永生化星形胶质细胞内有突变型IκBα的蛋白质表达,而转染SK-hyg的永生化星形胶质细胞内则没有,且前者细胞内NF-κB活性下降。结论GFAP特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 启动子 胶原纤维酸性蛋白 基因表达 IKBΑ
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