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鸡传染性贫血病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用 被引量：14
1
作者 任志浩 房立春 +5 位作者 栾怀彪 李阳 王一新 崔治中 常爽 赵鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1459-1464,共6页
为了更快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒(CIAV)的污染,根据CIAV基因组保守序列设计合成了引物及TaqMan探针,通过优化反应条件建立了快速检测CIAV的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,建立的检测方法灵敏度可达10拷贝·... 为了更快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒(CIAV)的污染,根据CIAV基因组保守序列设计合成了引物及TaqMan探针,通过优化反应条件建立了快速检测CIAV的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,建立的检测方法灵敏度可达10拷贝·μL^(-1),比常规PCR灵敏度高100倍。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克病病毒等病毒基因均无交叉反应,具有很好的特异性;批内重复和批间重复显示变异系数均小于2%,呈现良好的可重复性。在模拟试验中,该方法能够检测到1 000羽份弱毒疫苗中1个EID50的低剂量污染,应用该方法从送检的39种(批)商品化禽用弱毒疫苗中检测到2份为CIAV阳性。上述结果表明,本研究建立的荧光定量PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于检测疫苗中CIAV低剂量的污染。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 实时荧光定量PCR 弱毒疫苗 污染
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3株马立克氏病病毒的分离鉴定及其主要致病基因分析 被引量：8
2
作者 刘英楠 孟凡峰 +7 位作者 李阳 孙鹏 栾怀彪 苏红芹 崔贺 常爽 赵鹏 崔治中 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1479-1484,1500,共7页
为了解国内鸡群马立克病(MD)毒株目前的流行情况,在我国3个已免疫MD疫苗的白羽肉种鸡场暴发MD的鸡群中,通过临床剖检,组织病理学变化,病毒分离,IFA检测从发病鸡的淋巴细胞中分离到3株马立克氏病毒(MDV),并分别命名为SDAU1501、SDAU1502... 为了解国内鸡群马立克病(MD)毒株目前的流行情况,在我国3个已免疫MD疫苗的白羽肉种鸡场暴发MD的鸡群中,通过临床剖检,组织病理学变化,病毒分离,IFA检测从发病鸡的淋巴细胞中分离到3株马立克氏病毒(MDV),并分别命名为SDAU1501、SDAU1502和SDAU1503。采用PCR方法扩增3株MDV的vIL8、pp38、meq致病基因,所得氨基酸序列与已发表的参考毒株序列进行比较分析,结果显示SDAU1501和SDAU1502的致病基因与强毒株的同源性达到97%以上,具有强毒特征;而SDAU1503的meq基因在第194位具有与CVI988同样的缺失(P),但其没有CVI988中177个核苷酸的插入突变,其具有与弱毒疫苗株的特征。MDV新的变异在不断发生,出现了不同类型的变异株,因此,对MD的流行情况与基因监测应当继续下去;同时,在MDV疫苗的研制更新上还有待于进一步研究。 展开更多
关键词 马立克病病毒 病毒分离鉴定 致病基因分析
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中国三种不同地方品系鸡对J亚群禽白血病病毒NX0101株易感性的比较 被引量：7
3
作者 栾怀彪 王一新 +4 位作者 许书珍 房立春 崔治中 常爽 赵鹏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第3期40-46,共7页
为了研究不同中国地方品系鸡对J亚群禽白血病病毒(subgroup J Avian leukosis virus,ALV-J)的易感性和抵抗力,将ALV-J中国分离株NX0101分别通过鸡胚静脉和卵黄囊两种接种方式接种莱芜黑鸡、汶上芦花鸡、济宁百日鸡3种不同地方品系鸡,分... 为了研究不同中国地方品系鸡对J亚群禽白血病病毒(subgroup J Avian leukosis virus,ALV-J)的易感性和抵抗力,将ALV-J中国分离株NX0101分别通过鸡胚静脉和卵黄囊两种接种方式接种莱芜黑鸡、汶上芦花鸡、济宁百日鸡3种不同地方品系鸡,分析比较NX0101株对3种品系鸡的致病性。结果表明,NX0101株均可诱发3种品系鸡的髓样细胞瘤,并引起生长迟缓和免疫抑制等亚临床症状,但致病性的强度差异具有显著统计学意义。在两种不同接种方式下,莱芜黑鸡的死亡率和肿瘤发生率均明显低于另外两个品系,并且感染莱芜黑鸡的体重受抑制程度最低。济宁百日鸡对NX0101株的抵抗力在这3种品系鸡中最弱。因此,莱芜黑鸡可以作为ALV-J遗传抗性基因筛选和抗病育种的候选品系。 展开更多
关键词 丁亚群禽白血病病毒 地方品系鸡 易感性 遗传抗性
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禽弱毒疫苗中REV低剂量污染检测方法的比较 被引量：3
4
作者 任志浩 栾怀彪 +4 位作者 李阳 王一新 崔治中 常爽 赵鹏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1041-1045,共5页
使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批商品化... 使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批商品化新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗,提取核酸后分别以TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测、常规RT-PCR检测以及PCR产物结合核酸斑点杂交检测等不同方法进行检测。结果显示常规RTPCR检测仅可检测到10TCID50/羽份的REV污染,而另外两种方法均检测到1TCID50/羽份的低剂量REV污染。将人为污染1TCID50/羽份和2TCID50/羽份REV的NDV弱毒疫苗各接种10只SPF鸡,定期针对REV抗体及其核酸进行检测,结果显示在免疫污染疫苗后7周内REV抗体全部为阴性,而核酸检测均可以检测到一定比例的阳性,提示通过接种SPF鸡检测弱毒疫苗中REV污染时,仅仅通过抗体判定可能会对一些剂量较低的REV污染造成漏检,通过结合对病原的检测有助于降低漏检率。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 污染 REAL-TIME RT-PCR 核酸斑点杂交
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龙胜凤鸡中一株A亚群禽白血病病毒的基因组分析及其对SPF鸡的致病性研究 被引量：3
5
作者 许书珍 王一新 +4 位作者 李阳 栾怀彪 崔治中 常爽 赵鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期705-710,共6页
为了解中国地方品系鸡中禽白血病病毒(ALV)的基因组序列特征及其致病性,本研究通过DF-1细胞接种、间接免疫荧光和PCR等方法,从某龙胜凤鸡保种鸡群的种蛋中分离到一株A亚群ALV(ALV-A),命名为SDAU14A1株,并对其全基因组进行测序。将该序... 为了解中国地方品系鸡中禽白血病病毒(ALV)的基因组序列特征及其致病性,本研究通过DF-1细胞接种、间接免疫荧光和PCR等方法,从某龙胜凤鸡保种鸡群的种蛋中分离到一株A亚群ALV(ALV-A),命名为SDAU14A1株,并对其全基因组进行测序。将该序列与不同参考病毒株进行序列对比,结果显示SDAU14A1分离株与日本矮脚鸡分离株Tym S_90全基因组同源性最高,其U3区同源性达到100%,而与其它中国地方品系鸡分离株同源性较低。人工感染试验显示该病毒分离株感染SPF鸡后不仅引起感染鸡的生长迟缓和免疫抑制,还能够诱发淋巴细胞肿瘤,特别是具有较强的水平传播能力。本研究有助于了解我国地方品系鸡群中ALV-A的分子演变及其致病性,为我国地方品系中ALV净化提供参考依据。 展开更多
关键词 地方品系鸡 ALV—A 全基因组分析 致病性
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禽网状内皮组织增生症病毒LN1201株的全基因组序列分析及其U3区的独特性 被引量：2
6
作者 王一新 栾怀彪 +4 位作者 许书珍 李阳 常爽 崔治中 赵鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期855-859,共5页
为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示... 为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示,LN1201株前病毒基因组全长8 438 bp,具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构。与参考株相比,LN1201与国内分离株HLJR0901和疫苗污染病毒株MD-2同源性较高,但其U3区与不同病毒株的同源性相对较低,并且在U3区出现了罕见的14 bp碱基插入,显示该病毒株可能为LTR发生重组的病毒。本研究有助于了解我国鸡群中REV的基因组特性,提示有必要继续关注REV诱发的肿瘤及其基因变异。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 全基因组 序列分析 U3区
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核酸斑点杂交法与ELISA在SPF鸡检测弱毒疫苗中ALV污染的应用与比较 被引量：2
7
作者 栾怀彪 赵颖洁 +4 位作者 吕艳艳 徐颖 崔治中 常爽 赵鹏 《中国家禽》 北大核心 2016年第4期10-13,共4页
本研究对SPF鸡检查法在检测弱毒疫苗中低剂量禽白血病病毒(ALV)污染时的核酸斑点杂交法和ELISA进行了比较。分别以10 TCID_(50)/羽份和5 TCID50/羽份ALV-A人为污染一批商品化新城疫(ND)活疫苗,将污染ND疫苗各接种10只SPF鸡,以ELISA定期... 本研究对SPF鸡检查法在检测弱毒疫苗中低剂量禽白血病病毒(ALV)污染时的核酸斑点杂交法和ELISA进行了比较。分别以10 TCID_(50)/羽份和5 TCID50/羽份ALV-A人为污染一批商品化新城疫(ND)活疫苗,将污染ND疫苗各接种10只SPF鸡,以ELISA定期检测ALV抗体并利用PCR结合核酸斑点杂交法检测血液中ALV核酸。结果显示,在免疫污染疫苗后连续3周内ALV抗体全部为阴性,而核酸斑点杂交法检测表明自免疫后两周开始就出现ALV阳性。结果提示在利用经典的SPF鸡检查法检测弱毒疫苗中ALV污染时,结合对病原核酸的检测有助于节省检测时间和降低漏检率。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 弱毒疫苗 污染 SPF鸡
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利用核苷类逆转录酶抑制剂去除疫苗毒种中禽网状内皮组织增生症病毒污染
8
作者 苏红芹 李思菲 +6 位作者 任志浩 栾怀彪 孟凡峰 李阳 崔治中 常爽 赵鹏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1012-1017,共6页
使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗被认为是REV流行的原因之一,去除疫苗毒种中REV污染是生产合格疫苗的基础环节,本研究试图利用核苷类逆转录酶抑制剂类药物Azidothymidine(LAM)和Lamivudine(AZT)去除疫苗毒种中REV污... 使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗被认为是REV流行的原因之一,去除疫苗毒种中REV污染是生产合格疫苗的基础环节,本研究试图利用核苷类逆转录酶抑制剂类药物Azidothymidine(LAM)和Lamivudine(AZT)去除疫苗毒种中REV污染。首先通过在培养液中添加不同质量浓度AZT或LAM连续传代以及利用CCK-8测定细胞活性的方法,证实了在培养液中添加不超过5mg/L的抑制剂类药物对于DF-1细胞复制和活性没有影响。体外试验证实,当在培养液中分别添加5mg/L的AZT或LAM以及两者联合应用时均可以显著抑制REV在DF-1细胞上的复制,通过在新城疫弱毒疫苗中人为添加REV模拟AZT或LAM以及两者联合应用对疫苗毒种中REV污染的净化作用,结果显示经药物干预4代后即将REV去除,并且净化后毒种检验合格。本研究证实了AZT或LAM在体外对REV的抑制作用,并在人工模拟试验中成功净化了疫苗毒种中污染的REV。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 AZIDOTHYMIDINE LAMIVUDINE 抑制 弱毒疫苗
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