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猪圆环病毒3型衣壳蛋白的原核表达和鉴定
被引量:
4
1
作者
李潇南
柳
迦
鹏
+3 位作者
胡蝶
石玉佩
高雅
周双海
《北京农学院学报》
2021年第2期63-66,共4页
【目的】表达出猪圆环病毒3型(PCV3)衣壳蛋白(Cap),为PCV3免疫学检测方法建立基础。【方法】用PCR技术扩增PCV3-Cap基因片段,与pET-32a原核表达载体定向连接,构建重组原核表达质粒。经大肠杆菌表达后,通过SDS-PAGE来检测目的蛋白的大小...
【目的】表达出猪圆环病毒3型(PCV3)衣壳蛋白(Cap),为PCV3免疫学检测方法建立基础。【方法】用PCR技术扩增PCV3-Cap基因片段,与pET-32a原核表达载体定向连接,构建重组原核表达质粒。经大肠杆菌表达后,通过SDS-PAGE来检测目的蛋白的大小与存在方式,并用小鼠抗PCV3-Cap抗体进行Western blot检测。【结果】用pET-32a原核表达系统成功表达出重组PCV3-Cap融合蛋白,其多以包涵体形式存在,纯化后的融合蛋白能与小鼠抗PCV3-Cap血清发生特异性结合,显示出良好的免疫反应性。【结论】原核表达出具有良好免疫反应性的PCV3-Cap。
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关键词
猪圆环病毒3型
衣壳蛋白
原核表达
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职称材料
1株猪圆环病毒3型全基因组克隆与序列分析
被引量:
4
2
作者
胡胜云
刘鑫宇
+3 位作者
柳
迦
鹏
王阳
石玉佩
周双海
《北京农学院学报》
2019年第1期66-69,共4页
【目的】克隆获得1株猪圆环病毒3型(PCV3)全基因组序列并进行序列分析。【方法】以PCV3阳性临床样品为模板,用PCR技术扩增PCV3全基因组片段,随后进行克隆、序列测定与分析。【结果】扩增出1株PCV3全基因组片段,序列测定结果显示,这株PCV...
【目的】克隆获得1株猪圆环病毒3型(PCV3)全基因组序列并进行序列分析。【方法】以PCV3阳性临床样品为模板,用PCR技术扩增PCV3全基因组片段,随后进行克隆、序列测定与分析。【结果】扩增出1株PCV3全基因组片段,序列测定结果显示,这株PCV3全基因组大小为2 000bp,与其他国内外14株PCV3的核苷酸同源性均达98.6%以上,表明获得1株PCV3全基因组序列,且不同PCV3之间的全基因组核苷酸有非常高的同源性。PCV3与PCV1、PCV2之间的全基因组核苷酸同源性都低于50%。系统发育显示,3种PCV分别处于明显不同的分支,表明各自属于不同的基因型。【结论】获得1株PCV3全基因组序列,其与其他PCV3毒株之间的核苷酸同源性很高。
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关键词
猪圆环病毒3型
全基因组
基因克隆
序列分析
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职称材料
猪圆环病毒3型7个ORFs不能诱导PK-15细胞凋亡
被引量:
1
3
作者
柳
迦
鹏
刘鑫宇
+3 位作者
胡胜云
王阳
石玉佩
周双海
《北京农学院学报》
2019年第2期67-70,共4页
【目的】为了探明猪圆环病毒3型的致病机制。【方法】用PCR技术扩增PCV3的ORF1-ORF7基因片段并克隆到pEGFP-C1载体,构建7个真核表达质粒后分别转染PK-15细胞,在转染后不同时间观察细胞中荧光表达情况,并检测Caspase-3活性变化。【结果】...
【目的】为了探明猪圆环病毒3型的致病机制。【方法】用PCR技术扩增PCV3的ORF1-ORF7基因片段并克隆到pEGFP-C1载体,构建7个真核表达质粒后分别转染PK-15细胞,在转染后不同时间观察细胞中荧光表达情况,并检测Caspase-3活性变化。【结果】7个真核表达质粒转染PK-15细胞后均可观察到荧光,表明PCV3的ORF1-ORF7基因均可在PK-15细胞中获得表达,但在表达丰度方面存在差异。与单独的PK-15细胞和pEGFP-C1载体转染的PK-15细胞相比,7个真核表达质粒转染PK-15细胞后都未出现Caspase-3活性的显著(P>0.05)变化,表明均未引起PK-15细胞发生凋亡。【结论】PCV3的ORF1-ORF7基因均无诱导PK-15细胞发生凋亡的作用。
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关键词
猪圆环病毒3型
开放阅读框
CASPASE-3
细胞凋亡
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职称材料
3株猪流行性腹泻病毒M基因克隆与序列分析
被引量:
1
4
作者
贾超伟
柳
迦
鹏
+3 位作者
张喜喜
刘芊麟
周双海
宋勤叶
《北京农学院学报》
2018年第3期53-56,共4页
【目的】了解近年来京津冀地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株M基因的变异情况。【方法】用RT-PCR技术从京津冀地区部分仔猪腹泻样品中扩增与克隆3株PEDV流行株M基因全长序列,并进行序列测定和分析。【结果】基因序列结果显示,3株PEDV的...
【目的】了解近年来京津冀地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株M基因的变异情况。【方法】用RT-PCR技术从京津冀地区部分仔猪腹泻样品中扩增与克隆3株PEDV流行株M基因全长序列,并进行序列测定和分析。【结果】基因序列结果显示,3株PEDV的M基因全长均为681nt,其核苷酸同源性达99.7%以上,在系统发育进化方面属于同一簇。M基因系统发育进化关系显示,虽然这3株PEDV与中国以前PEDV流行毒株及疫苗株CV777属于不同的簇,但其与国内外其他PEDV参考毒株的核苷酸同源性均达96.5%以上。【结论】M基因仍然是检测PEDV的良好目的基因。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
M基因
基因克隆
序列分析
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职称材料
2个厂家不同剂量猪瘟疫苗临床免疫效果比较
被引量:
1
5
作者
李满
刘鑫宇
+3 位作者
李守菊
柳
迦
鹏
胡胜云
周双海
《北京农学院学报》
2018年第1期69-73,共5页
【目的】比较2个厂家不同剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果。【方法】将60头断奶空怀母猪随机平均分为2组,一组接种较高剂量猪瘟疫苗E(E组),另一组接种较低剂量猪瘟疫苗A(A组);当母猪产仔后,所产仔猪在20d与60d时分别接种1次;采集不同阶段的...
【目的】比较2个厂家不同剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果。【方法】将60头断奶空怀母猪随机平均分为2组,一组接种较高剂量猪瘟疫苗E(E组),另一组接种较低剂量猪瘟疫苗A(A组);当母猪产仔后,所产仔猪在20d与60d时分别接种1次;采集不同阶段的母猪、仔猪与生长猪的血清,用阻断ELISA方法检测猪瘟病毒抗体。【结果】在断奶空怀母猪阶段,两组之间无差异。在其他阶段,E组猪瘟病毒抗体阻断率一直高于A组,各个阶段均达到显著(P<0.05)水平;除35d与56d仔猪外,E组猪瘟病毒抗体阻断率变异系数都小于A组;E组猪瘟病毒抗体阳性率都高于A组,其中在35d仔猪达到显著水平。抗体检测结果显示,E组猪瘟免疫抗体数据优于A组,表明猪瘟疫苗E的临床免疫效果优于疫苗A。【结论】较高剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果好于较低剂量疫苗,为剂量存在差异的不同厂家猪瘟疫苗的临床选用提供了试验依据。
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关键词
猪瘟疫苗
厂家
疫苗剂量
猪瘟病毒抗体
免疫效果
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职称材料
题名
猪圆环病毒3型衣壳蛋白的原核表达和鉴定
被引量:
4
1
作者
李潇南
柳
迦
鹏
胡蝶
石玉佩
高雅
周双海
机构
北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室
出处
《北京农学院学报》
2021年第2期63-66,共4页
基金
北京市科技计划课题(D171100002117002)
北京农学院本科生科研训练项目(2019)。
文摘
【目的】表达出猪圆环病毒3型(PCV3)衣壳蛋白(Cap),为PCV3免疫学检测方法建立基础。【方法】用PCR技术扩增PCV3-Cap基因片段,与pET-32a原核表达载体定向连接,构建重组原核表达质粒。经大肠杆菌表达后,通过SDS-PAGE来检测目的蛋白的大小与存在方式,并用小鼠抗PCV3-Cap抗体进行Western blot检测。【结果】用pET-32a原核表达系统成功表达出重组PCV3-Cap融合蛋白,其多以包涵体形式存在,纯化后的融合蛋白能与小鼠抗PCV3-Cap血清发生特异性结合,显示出良好的免疫反应性。【结论】原核表达出具有良好免疫反应性的PCV3-Cap。
关键词
猪圆环病毒3型
衣壳蛋白
原核表达
Keywords
porcine circovirus type 3
capsid protein
prokaryotic expression
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
1株猪圆环病毒3型全基因组克隆与序列分析
被引量:
4
2
作者
胡胜云
刘鑫宇
柳
迦
鹏
王阳
石玉佩
周双海
机构
北京农学院动物科学技术学院
出处
《北京农学院学报》
2019年第1期66-69,共4页
基金
北京市科技计划课题(D171100002117002)
文摘
【目的】克隆获得1株猪圆环病毒3型(PCV3)全基因组序列并进行序列分析。【方法】以PCV3阳性临床样品为模板,用PCR技术扩增PCV3全基因组片段,随后进行克隆、序列测定与分析。【结果】扩增出1株PCV3全基因组片段,序列测定结果显示,这株PCV3全基因组大小为2 000bp,与其他国内外14株PCV3的核苷酸同源性均达98.6%以上,表明获得1株PCV3全基因组序列,且不同PCV3之间的全基因组核苷酸有非常高的同源性。PCV3与PCV1、PCV2之间的全基因组核苷酸同源性都低于50%。系统发育显示,3种PCV分别处于明显不同的分支,表明各自属于不同的基因型。【结论】获得1株PCV3全基因组序列,其与其他PCV3毒株之间的核苷酸同源性很高。
关键词
猪圆环病毒3型
全基因组
基因克隆
序列分析
Keywords
PCV3
complete genome
gene cloning
sequence analysis
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
猪圆环病毒3型7个ORFs不能诱导PK-15细胞凋亡
被引量:
1
3
作者
柳
迦
鹏
刘鑫宇
胡胜云
王阳
石玉佩
周双海
机构
北京农学院动物科学技术学院
出处
《北京农学院学报》
2019年第2期67-70,共4页
基金
北京市科技计划课题(D171100002117002)
文摘
【目的】为了探明猪圆环病毒3型的致病机制。【方法】用PCR技术扩增PCV3的ORF1-ORF7基因片段并克隆到pEGFP-C1载体,构建7个真核表达质粒后分别转染PK-15细胞,在转染后不同时间观察细胞中荧光表达情况,并检测Caspase-3活性变化。【结果】7个真核表达质粒转染PK-15细胞后均可观察到荧光,表明PCV3的ORF1-ORF7基因均可在PK-15细胞中获得表达,但在表达丰度方面存在差异。与单独的PK-15细胞和pEGFP-C1载体转染的PK-15细胞相比,7个真核表达质粒转染PK-15细胞后都未出现Caspase-3活性的显著(P>0.05)变化,表明均未引起PK-15细胞发生凋亡。【结论】PCV3的ORF1-ORF7基因均无诱导PK-15细胞发生凋亡的作用。
关键词
猪圆环病毒3型
开放阅读框
CASPASE-3
细胞凋亡
Keywords
porcine circovirus type 3
open reading frames
Caspase-3
cell apoptosis
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
3株猪流行性腹泻病毒M基因克隆与序列分析
被引量:
1
4
作者
贾超伟
柳
迦
鹏
张喜喜
刘芊麟
周双海
宋勤叶
机构
北京农学院动物科学技术学院
门头沟区动物疫病预防控制中心
河北农业大学动物医学院
出处
《北京农学院学报》
2018年第3期53-56,共4页
基金
河北省科技厅计划项目(17226613D-2)
国家重点研发计划项目(2016YFD0500703)
文摘
【目的】了解近年来京津冀地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株M基因的变异情况。【方法】用RT-PCR技术从京津冀地区部分仔猪腹泻样品中扩增与克隆3株PEDV流行株M基因全长序列,并进行序列测定和分析。【结果】基因序列结果显示,3株PEDV的M基因全长均为681nt,其核苷酸同源性达99.7%以上,在系统发育进化方面属于同一簇。M基因系统发育进化关系显示,虽然这3株PEDV与中国以前PEDV流行毒株及疫苗株CV777属于不同的簇,但其与国内外其他PEDV参考毒株的核苷酸同源性均达96.5%以上。【结论】M基因仍然是检测PEDV的良好目的基因。
关键词
猪流行性腹泻病毒
M基因
基因克隆
序列分析
Keywords
PEDV
M gene
gene cloning
sequence analysis
分类号
O657.33 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
2个厂家不同剂量猪瘟疫苗临床免疫效果比较
被引量:
1
5
作者
李满
刘鑫宇
李守菊
柳
迦
鹏
胡胜云
周双海
机构
北京农学院动物科学技术学院
大兴区动物疫病预防控制中心
出处
《北京农学院学报》
2018年第1期69-73,共5页
基金
北京市农委"菜篮子"能力提升工程项目(20150203-13)
文摘
【目的】比较2个厂家不同剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果。【方法】将60头断奶空怀母猪随机平均分为2组,一组接种较高剂量猪瘟疫苗E(E组),另一组接种较低剂量猪瘟疫苗A(A组);当母猪产仔后,所产仔猪在20d与60d时分别接种1次;采集不同阶段的母猪、仔猪与生长猪的血清,用阻断ELISA方法检测猪瘟病毒抗体。【结果】在断奶空怀母猪阶段,两组之间无差异。在其他阶段,E组猪瘟病毒抗体阻断率一直高于A组,各个阶段均达到显著(P<0.05)水平;除35d与56d仔猪外,E组猪瘟病毒抗体阻断率变异系数都小于A组;E组猪瘟病毒抗体阳性率都高于A组,其中在35d仔猪达到显著水平。抗体检测结果显示,E组猪瘟免疫抗体数据优于A组,表明猪瘟疫苗E的临床免疫效果优于疫苗A。【结论】较高剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果好于较低剂量疫苗,为剂量存在差异的不同厂家猪瘟疫苗的临床选用提供了试验依据。
关键词
猪瘟疫苗
厂家
疫苗剂量
猪瘟病毒抗体
免疫效果
Keywords
CSF vaccine
manufacturer
vaccine dose
CSF virus antibody
immune effect
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒3型衣壳蛋白的原核表达和鉴定
李潇南
柳
迦
鹏
胡蝶
石玉佩
高雅
周双海
《北京农学院学报》
2021
4
下载PDF
职称材料
2
1株猪圆环病毒3型全基因组克隆与序列分析
胡胜云
刘鑫宇
柳
迦
鹏
王阳
石玉佩
周双海
《北京农学院学报》
2019
4
下载PDF
职称材料
3
猪圆环病毒3型7个ORFs不能诱导PK-15细胞凋亡
柳
迦
鹏
刘鑫宇
胡胜云
王阳
石玉佩
周双海
《北京农学院学报》
2019
1
下载PDF
职称材料
4
3株猪流行性腹泻病毒M基因克隆与序列分析
贾超伟
柳
迦
鹏
张喜喜
刘芊麟
周双海
宋勤叶
《北京农学院学报》
2018
1
下载PDF
职称材料
5
2个厂家不同剂量猪瘟疫苗临床免疫效果比较
李满
刘鑫宇
李守菊
柳
迦
鹏
胡胜云
周双海
《北京农学院学报》
2018
1
下载PDF
职称材料
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