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异质性耐药对结核分枝杆菌表型和基因型耐药检测结果的影响 被引量：36
1
作者 高旭 李静 +3 位作者 柳清云 沈鑫 梅建 高谦 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期260-265,共6页
目的 研究异质性耐药对MTB基因型耐药检测结果的影响.方法 选择上海市疾病预防控制中心在2009年收集的80株氧氟沙星临床耐药菌株,利用基因测序检测菌株在gyrA和gyrB耐药决定区的基因突变情况,再用分子克隆和荧光定量PCR探针熔解曲线法,... 目的 研究异质性耐药对MTB基因型耐药检测结果的影响.方法 选择上海市疾病预防控制中心在2009年收集的80株氧氟沙星临床耐药菌株,利用基因测序检测菌株在gyrA和gyrB耐药决定区的基因突变情况,再用分子克隆和荧光定量PCR探针熔解曲线法,分析经基因测序未检测到耐药突变的菌株中是否存在异质性耐药现象.结果 基因测序报告显示,80株氧氟沙星耐药菌株中有15株未发现已知gyrA或gyrB耐药决定区的基因突变.测序图谱及分子克隆和探针熔解曲线法分析结果表明,其中14株菌株含有已知gyrA耐药突变,即存在异质性耐药现象.纳入异质性耐药的菌株后,基因型与表型耐药检测的符合率从81.3％（65/80）提高到98.8％（79/80）.结论 异质性耐药是导致表型和基因型耐药检测结果不符的重要原因.为排除异质性耐药对耐药基因检测的影响,提高基因型与表型耐药检测结果的一致性,需要开发应用更敏感的基因型耐药检测技术,以提高耐药结核病快速检测水平. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 遗传异质性 耐药快速检测
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结核分枝杆菌(MTB)异质性耐药研究进展 被引量：20
2
作者 柳清云 孙刚 高谦 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-4,共4页
异质性耐药,是指在同一样本中同时存在耐药菌和敏感菌的现象,这体现了细菌群体从部分耐药向完全耐药转变的过程。研究异质性耐药对于认识耐药结核病的发展过程,以及评估治疗方案和指导临床用药具有重要的意义。本文对结核分枝杆菌(Mycob... 异质性耐药,是指在同一样本中同时存在耐药菌和敏感菌的现象,这体现了细菌群体从部分耐药向完全耐药转变的过程。研究异质性耐药对于认识耐药结核病的发展过程,以及评估治疗方案和指导临床用药具有重要的意义。本文对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)异质性耐药的产生及其对临床的影响进行了综述。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(MTB) 异质性耐药 耐药结核病
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耐药结核分枝杆菌的适应性代价与补偿性进化 被引量：11
3
作者 皮锐 柳清云 高谦 《微生物与感染》 2017年第6期362-368,共7页
结核病耐药率的攀升是目前全球结核病防控面临的重大挑战。结核分枝杆菌主要通过其基因组中耐药相关基因发生点突变而获得耐药性。由于耐药相关基因通常具有重要的生理功能,其突变往往会导致结核分枝杆菌自身适应性下降,即产生"适... 结核病耐药率的攀升是目前全球结核病防控面临的重大挑战。结核分枝杆菌主要通过其基因组中耐药相关基因发生点突变而获得耐药性。由于耐药相关基因通常具有重要的生理功能,其突变往往会导致结核分枝杆菌自身适应性下降,即产生"适应性代价"。然而,耐药结核分枝杆菌可通过进一步积累其他特定突变来回复其适应性,这种能使其适应性上升的突变称为"补偿性突变"。耐药结核分枝杆菌的补偿性进化被认为是耐药结核病广泛传播与流行的生物学基础。近年来,在结核病分子流行病学和基础研究领域,针对耐药结核分枝杆菌的补偿性进化开展了大量研究。本文从结核分枝杆菌的耐药分子机制、耐药突变的适应性代价与补偿性进化,以及补偿性进化如何影响耐药结核病传播等方面,综述耐药结核分枝杆菌补偿性进化的研究进展。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药突变 适应性代价 补偿性进化 异位显性
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不同可变数目串联重复序列组合鉴定结核分枝杆菌临床菌株分型的效果 被引量：8
4
作者 刘梅 罗涛 +2 位作者 杨崇广 柳清云 高谦 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期746-750,共5页
目的 探讨不同可变数目串联重复序列（VNTR）组合鉴定MTB临床菌株分型的效果并在全国推广使用.方法 连续收集国内5个区县的891株MTB菌株样本,通过计算不同VNTR组合的分辨力指数（HGI）,系统评估目前常用的VNTR分型组合,包括国外推荐的1... 目的 探讨不同可变数目串联重复序列（VNTR）组合鉴定MTB临床菌株分型的效果并在全国推广使用.方法 连续收集国内5个区县的891株MTB菌株样本,通过计算不同VNTR组合的分辨力指数（HGI）,系统评估目前常用的VNTR分型组合,包括国外推荐的12个散在分布重复单位（MIRU）位点组合（MIRU-12）、15/24 VNTR位点组合（VNTR-15/VNTR-24）、24 VNTR位点加4个高变位点组合（VNTR“24＋4”）以及国内吕冰等建立的15位点组合（VNTR-L15）和本课题组筛选的VNTR“9＋3”组合.结果 分辨力由高至低依次为VNTR“24＋4”（0.999 2）、VNTR“9＋3”（0.998 9）、VNTR-24 （0.992 9）、VNTR-15 （0.988 4）、VNTR-L15 （0.970 9）、MIRU-12（0.924 8）.VNTR“9＋3”的分型能力不仅超过VNTR-15,且高于VNTR-24,与分辨力最高的VNTR“24 ＋4”组合分型结果一致的菌株数为822株,一致率达到96.6％ （822/851）.结论 VNTR“9＋3”的分辨力和分型结果均与VNTR“24＋4”相当,且具有位点数少、工作量小,易于推广的优点.建议将VNTR“9＋3”组合作为我国MTB基因型分型的推荐方案推广应用. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 串联重复序列 基因型
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双通道实时荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌药物耐药相关基因突变 被引量：6
5
作者 柳清云 罗涛 +2 位作者 李静 梅建 高谦 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期63-67,共5页
目的基于双标记荧光探针熔解曲线分析技术，建立一种利用实时荧光PCR快速检测结核分枝杆菌耐药突变的方法。方法根据结核分枝杆菌一线药物常见耐药突变位点（包括rpoB81bp耐药决定区、inhA启动子、katG315、ahpC启动子以及embB306）设计... 目的基于双标记荧光探针熔解曲线分析技术，建立一种利用实时荧光PCR快速检测结核分枝杆菌耐药突变的方法。方法根据结核分枝杆菌一线药物常见耐药突变位点（包括rpoB81bp耐药决定区、inhA启动子、katG315、ahpC启动子以及embB306）设计6条荧光双标记探针和对应引物，通过PCR扩增耐药突变位点所在基因片段，在扩增完成后通过熔解曲线检测分析实现对耐药突变的快速检测。通过对2008年上海市疾控中心收集的76株临床耐多药（MDR）菌株进行检测，验证本方法的敏感度和特异度。结果本方法成功从76株MDR菌株中检测出相关耐药突变，各种突变对应△Tm值范围为1．8～14．4℃。将检测结果和测序结果对比表明该方法检测敏感度和特异度都为100％（rpoB，80／80；inhA，7／7；katG315，59／59；ahpC，8／8；embB306，27／27）。本方法可以成功从最低浓度为100拷贝／μl的结核分枝杆菌DNA样本中准确地检测耐药突变。结论双通道实时荧光PCR熔解曲线法可以快速灵敏地检测结核分枝杆菌常见耐药突变。该方法具有检测迅速准确、结果易判读、交叉污染概率低等特点，可用于快速检测临床结核耐药相关的基因突变，并对结核耐药情况进行评估。（中华检验医学杂志．2013．36：63-67） 展开更多
关键词 实时聚合酶链反应 分枝杆菌 结核 突变
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结核分枝杆菌利福平耐药菌株补偿性突变的系统性鉴定 被引量：2
6
作者 左天宇 柳清云 +1 位作者 甘明宇 高谦 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期207-212,共6页
目的系统性鉴定MTB利福平耐药菌株rpoA、rpoB及rpoC基因补偿性突变的类型，评估不同rpoB基因耐药突变类型及MTB遗传背景对补偿性突变发生的影响。方法搜索并下载已发表的MTB全基因组测序数据，根据已知的利福平耐药突变从中鉴定出利福... 目的系统性鉴定MTB利福平耐药菌株rpoA、rpoB及rpoC基因补偿性突变的类型，评估不同rpoB基因耐药突变类型及MTB遗传背景对补偿性突变发生的影响。方法搜索并下载已发表的MTB全基因组测序数据，根据已知的利福平耐药突变从中鉴定出利福平耐药的MTB株，构建系统发育树并利用平行进化的筛选标准鉴定出可能的补偿性突变；统计不同rpoB基因耐药突变类型和不同型的利福平耐药菌株携带补偿性突变的比例，利用卡方检验进行统计学分析。结果从欧洲核酸序列数据库共获得全球8 453株MTB全基因组测序数据（覆盖12个国家），其中1 749株为利福平耐药菌株。通过系统发育分析共鉴定出60种补偿性突变类型（rpoA基因上的突变6种，rpoB基因上的突变16种，rpoC基因上的突变38种）；携带rpoB S450L突变的利福平耐药菌株（41.7%，279/669）比其他利福平耐药突变积累补偿性突变的比例更高[8.0%（31/388），χ2＝378.5，P〈0.000 1]；2型的利福平耐药菌株（34.0%）比其他型的菌株积累补偿性突变的比例更高[1型：4.7%（2/43），3型：12.5%（4/32），4型：15.1%（78/517）；χ2＝238.5，P〈0.000 1]。结论本研究系统性鉴定了MTB利福平耐药相关的补偿性突变类型，并发现携带rpoB基因S450L突变或属于2型的利福平耐药菌株更容易积累补偿性突变。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 抗药性 利福平 突变
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建筑预结算的常见问题及其解决对策 被引量：2
7
作者 柳清云 《建材与装饰》 2019年第18期146-147,共2页
预结算作为建筑工程投资中具有预知性的环节,它的精准程度直接影响工程的践行水平。伴随我国建筑项目地逐步增多,许多的预结算隐患也日益显露,严重阻碍了工程的整体进度及项目质量的水平。对此,笔者将详尽地阐述建筑工程预结算中现存的... 预结算作为建筑工程投资中具有预知性的环节,它的精准程度直接影响工程的践行水平。伴随我国建筑项目地逐步增多,许多的预结算隐患也日益显露,严重阻碍了工程的整体进度及项目质量的水平。对此,笔者将详尽地阐述建筑工程预结算中现存的问题,同时再提出几点具有针对性的解决对策,希望能够进一步地推进我国建筑行业的深度发展。 展开更多
关键词 建筑工程 预结算 审计 解决对策
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