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镉对果蝇肠道上皮细胞损伤和调控中肠干细胞增殖、分化机制的研究 被引量:6
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作者 楼哲丰 曹琼洁 +5 位作者 冯钰淇 蔡慧敏 段银波 张岩 金龙金 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期602-608,共7页
重金属元素镉具有较强的生物毒性,是威胁人类健康的重要环境污染物质。为探索镉的过量摄入对生物消化系统的潜在影响,以果蝇中肠系统为实验模型,以不同浓度的氯化镉作为处理因素,探讨其对肠道细胞的损伤作用和调控中肠干细胞增殖、分化... 重金属元素镉具有较强的生物毒性,是威胁人类健康的重要环境污染物质。为探索镉的过量摄入对生物消化系统的潜在影响,以果蝇中肠系统为实验模型,以不同浓度的氯化镉作为处理因素,探讨其对肠道细胞的损伤作用和调控中肠干细胞增殖、分化的相应机制。通过透射电镜观察,发现镉对果蝇中肠上皮细胞超微结构具有损伤作用,并且损伤程度具有显著的浓度依赖性;免疫荧光结果证实,镉的过量摄入对中肠干细胞(intestinal stem cell,ISC)、成肠细胞(enteroblast,EB)和肠上皮细胞(enterocyte,EC)的数量和比例能够产生影响,且显著促进中肠干细胞的增殖;Real-time RT-PCR检测结果表明,肠道组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor recep-tor,EGFR)和JAK/STAT信号通路配体基因的转录水平显著提高,JAK/STAT信号通路同时被大幅度活化。结果显示:高浓度镉的摄入对果蝇中肠上皮细胞核膜、线粒体和微绒毛等超微结构造成损伤,该类损伤能够诱使果蝇肠道组织上调表达相关配体蛋白,从而激活干细胞的EGFR和JAK/STAT信号通路,从而促进ISC的增殖与分化能力,继而实现对肠道损伤组织进行及时的修复。然而,中肠干细胞增殖信号通路的持续激活以及干细胞的过度增殖同样具有诱发肠道肿瘤发生的潜在可能。 展开更多
关键词 果蝇 超微结构损伤 中肠 干细胞
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眼树莲提取物的体外抗肿瘤活性研究 被引量:6
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作者 洪家立 蔡彩虹 +8 位作者 樊好飞 黄内利 余邦良 杨柳 樊自强 邓子昕 潘洁 刘磊 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期2054-2059,共6页
为了探索眼树莲乙醇提取物和不同萃取部位的体外抗肿瘤作用,以人胃癌SGC细胞株、人肝癌BEL细胞株、慢性髓原白血病K562细胞株、宫颈癌Hela细胞株、乳腺腺癌MCF-7细胞株、肺腺癌A549细胞株为供试细胞株,用MTT法对眼树莲不同提取部位进行... 为了探索眼树莲乙醇提取物和不同萃取部位的体外抗肿瘤作用,以人胃癌SGC细胞株、人肝癌BEL细胞株、慢性髓原白血病K562细胞株、宫颈癌Hela细胞株、乳腺腺癌MCF-7细胞株、肺腺癌A549细胞株为供试细胞株,用MTT法对眼树莲不同提取部位进行体外抗肿瘤活性筛选,并观察细胞形态。结果表明:乙醇提取物(A)、石油醚部位(B)、乙酸乙酯部位(C)均对SGC细胞具有明显的抑制性,IC50值分别为71.73、55.83、51.95μg/mL,而对Hela、MCF-7、A549 3种细胞有弱的抑制性。A、B部位对BEL细胞有弱抑制性,C部位对BEL细胞具有一定的抑制性,IC50值为72.62μg/mL。B、C部位对K562细胞具有明显的抑制性,IC50值分别为53.34、55.99μg/mL。正丁醇部位(D)对SGC、BEL、K562、Hela、MCF-7、A549这6种细胞均没有抗肿瘤抑制性。B、C均可使相应的肿瘤细胞株的细胞形态发生变化,引起细胞株的坏死,并呈现明显的剂量-时间-效应关系,为进一步研究眼树莲的抗肿瘤作用奠定基础。 展开更多
关键词 眼树莲 提取物 抗肿瘤活性 细胞抑制率 MTT
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吃掉自己:细胞自噬的历史与展望 被引量:3
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作者 刘晗 戚昀 《科学》 2017年第1期12-14,共3页
2016年度的诺贝尔生理学或医学奖颁发给日本的分子生物学家大隅良典,以表彰他在“细胞自噬机制发现”方面做出的贡献。自噬参与生物体的众多生理机能,是细胞质量控制的重要组成部分,也是人类很多疾病发生发展的重要风险因子。
关键词 自噬 诺贝尔生理学或医学奖 大隅良典
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囊泡转运复合物Retromer和SNX蛋白家族在发育和疾病中的作用 被引量:2
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作者 宋砚泽 沈成豪 +3 位作者 李雪 苏立波 吴一卉 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2016年第1期36-51,共16页
逆向囊泡转运复合物Retromer主要负责介导货物蛋白从内体向反式高尔基体或细胞表面逆向转运,是细胞内囊泡转运分选系统的重要成员.Retromer复合物主要含有两个亚复合体:货物选择复合体VPS26-VPS29-VPS35和膜结合复合体SNX-BAR.本文着重... 逆向囊泡转运复合物Retromer主要负责介导货物蛋白从内体向反式高尔基体或细胞表面逆向转运,是细胞内囊泡转运分选系统的重要成员.Retromer复合物主要含有两个亚复合体:货物选择复合体VPS26-VPS29-VPS35和膜结合复合体SNX-BAR.本文着重综述了Retromer复合物和SNX蛋白家族参与囊泡转运过程的分子机制以及它们在发育中对Wnt信号的调控作用;并讨论了Retromer复合物在细胞极性形成、细胞凋亡、神经元信号传递中的重要作用;以及该复合物与帕金森和阿尔茨海默病等退行性疾病之间的关系. 展开更多
关键词 RETROMER 囊泡转运复合物 SNX蛋白家族 发育 退行性疾病
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果蝇新型碱性磷酸酶相关基因CG6236的敲除及表型分析 被引量:1
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作者 缪海锋 方可欣 +3 位作者 黄爽爽 金龙金 吴一卉 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期424-431,共8页
碱性磷酸酶广泛存在于人体各器官中,其水平异常与一系列疾病有关,但其在发育中的具体作用机制尚不明确。该文以果蝇为模式生物,研究一个新型碱性磷酸酶样蛋白基因CG6236在发育中的功能。利用P-因子介导的不精确剪切获得CG6236缺失突变... 碱性磷酸酶广泛存在于人体各器官中,其水平异常与一系列疾病有关,但其在发育中的具体作用机制尚不明确。该文以果蝇为模式生物,研究一个新型碱性磷酸酶样蛋白基因CG6236在发育中的功能。利用P-因子介导的不精确剪切获得CG6236缺失突变体果蝇品系,发现CG6236纯合突变体半致死,存活的幼虫及成蝇腹部出现黑色素瘤样表型。在细胞中表达CG6236融合蛋白,发现其定位于细胞质中。另外,缺失或过表达CG6236均不影响Wingless和Hedgehog信号通路。综上,该研究首次获得CG6236基因缺失突变和转基因果蝇品系,并观察了缺失CG6236果蝇的表型,为进一步阐明基因CG6236的功能及作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 CG6236 碱性磷酸酶 基因缺失 黑色素瘤 果蝇
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细胞囊泡运输系统与人类健康——2013年诺贝尔生理学或医学奖简介 被引量:1
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作者 李雪 《自然杂志》 北大核心 2013年第6期416-421,共6页
人类对健康的孜孜以求推动了生命科学领域的不断创新和发展,从20世纪80年代兰迪·W·谢克曼(Randy W.Schekman)和詹姆斯·E·罗斯曼(James E.Rothman)分别对酵母细胞进行研究,通过生物电镜观察到囊泡运输系统并给出定义... 人类对健康的孜孜以求推动了生命科学领域的不断创新和发展,从20世纪80年代兰迪·W·谢克曼(Randy W.Schekman)和詹姆斯·E·罗斯曼(James E.Rothman)分别对酵母细胞进行研究,通过生物电镜观察到囊泡运输系统并给出定义,到托马斯·C·苏德霍夫(Thomas C.S(u|¨)dhof)在神经细胞突触传导中证实了囊泡运输系统的时空调控性,囊泡运输系统作为细胞的基本组成,受到了越来越深入的研究。囊泡运输系统经由精密的调控广泛地参与诸多生命活动过程,与多种生命现象相关,囊泡运输系统障碍可能导致多种人类疾病,深入透彻地理解这些生物学现象和作用机制,对于攻克人类疾病,保障人类健康具有十分深远的意义。 展开更多
关键词 囊泡运输系统 内膜系统 蛋白选运 蛋白分泌 诺贝尔生理学或医学奖
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去泛素化酶nonstop调控果蝇眼睛锥细胞发育的研究
7
作者 石伟杰 沈成豪 +4 位作者 谌玉婷 叶晓蕾 冯颖 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第8期907-917,共11页
去泛素化酶是一类参与蛋白质稳定性调控的酶,广泛存在于真核生物细胞中,主要功能是水解底物蛋白质上的泛素链。去泛素化酶参与多种重要的生命活动,包括细胞周期调控、细胞信号转导、蛋白质降解、DNA修复及基因表达等,其异常表达与多种... 去泛素化酶是一类参与蛋白质稳定性调控的酶,广泛存在于真核生物细胞中,主要功能是水解底物蛋白质上的泛素链。去泛素化酶参与多种重要的生命活动,包括细胞周期调控、细胞信号转导、蛋白质降解、DNA修复及基因表达等,其异常表达与多种疾病的发生密切相关。该文以果蝇为研究对象,探讨去泛素化酶nonstop(not)对果蝇眼睛锥细胞发育分化的调控作用。结果表明,在not功能缺失的果蝇三龄幼虫眼睛成虫盘中,Cut蛋白质水平发生了显著下调;同时,在果蝇蛹期眼睛的分析结果显示,not功能缺失可导致锥细胞和初级色素细胞的分化异常。进一步研究发现,not功能缺失还可导致R1/R6光感受器细胞分化异常及转录因子D-Pax2表达水平异常。然而,not功能缺失并不影响转录因子Lozenge(Lz)的蛋白质水平及EGFR(epidermal growth factor receptor)和Notch信号通路的活性。综上所述,该文结果表明,not可能通过调控D-Pax2的表达水平与R1/R6光感受器细胞的分化影响锥细胞和初级色素细胞的分化。 展开更多
关键词 去泛素化酶 NONSTOP 锥细胞 果蝇眼睛发育
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果蝇Golgin-84在发育中的表达和功能研究
8
作者 侯国丽 +1 位作者 吴一卉 刁爱坡 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期622-629,共8页
高尔基体形态和结构的维持与真核细胞内的物质运输和细胞正常功能密切相关,高尔基体蛋白Golgin-84对维持高尔基体形态发挥了重要作用,但其在发育中的功能尚不清楚。为了研究Golgin-84在果蝇发育中的作用,成功制备并纯化了抗果蝇Golgin-8... 高尔基体形态和结构的维持与真核细胞内的物质运输和细胞正常功能密切相关,高尔基体蛋白Golgin-84对维持高尔基体形态发挥了重要作用,但其在发育中的功能尚不清楚。为了研究Golgin-84在果蝇发育中的作用,成功制备并纯化了抗果蝇Golgin-84的多克隆抗体并成功构建了UAS-golgin-84-V5过表达和golgin-84 RNAi转基因果蝇,并对golgin-84在果蝇发育中的作用作了初步分析。蛋白免疫印迹和免疫荧光染色实验表明:制备的Golgin-84抗体能特异性识别重组和内源Golgin-84蛋白;Golgin-84与高尔基体蛋白GM130共定位;Golgin-84在果蝇不同发育阶段的各组织中广泛表达,在睾丸中表达较高。另外发现,选择性地在果蝇翅膀中抑制Golgin-84表达使得翅脉发育异常;过表达Golgin-84导致果蝇翅膀生长图式出现缺陷。该实验成功制备了果蝇Golgin-84抗体,获得了golgin-84转基因果蝇,并对golgin-84的功能作了初步的分析,为进一步阐明Golgin-84的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 Golgin-84 黑腹果蝇 抗体制备 过表达
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E3泛素连接酶基因CG4911敲除和功能的初步研究
9
作者 叶晓蕾 樊晓兰 +3 位作者 王爽爽 张岩 金龙金 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期439-446,共8页
蛋白质的泛素化是一种重要的翻译后修饰过程,参与调控细胞周期、基因转录、信号转导、炎症反应和干细胞的维持等过程。泛素连接酶E3(ubiqutin ligase)是泛素化过程中关键酶。但许多E3基因在发育中的功能和作用机制还不明确。该研究以黑... 蛋白质的泛素化是一种重要的翻译后修饰过程,参与调控细胞周期、基因转录、信号转导、炎症反应和干细胞的维持等过程。泛素连接酶E3(ubiqutin ligase)是泛素化过程中关键酶。但许多E3基因在发育中的功能和作用机制还不明确。该研究以黑腹果蝇为模式动物,研究泛素连接酶家族一个重要基因CG4911的功能及分子机制。获得CG4911基因敲除果蝇,CG4911敲除果蝇纯合子可活。原位杂交结果显示,CG4911在胚胎发育早期表达。通过构建CG4911-pUAST-3HA重组子转染Hela细胞,确定CG4911定位于细胞质中,其表达并无修饰作用,并且过表达基因CG4911可导致背板发育缺陷。该研究首次获得了CG4911基因敲除果蝇和CG4911转基因果蝇,并初步探索了F-box基因CG4911的功能,为进一步阐明泛素连接酶的功能及分子机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 泛素连接酶基因 RNA干扰 原位杂交 果蝇
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果蝇组蛋白去乙酰化酶HDAC1和HDAC3选择性调控形态发生素靶基因转录
10
作者 曹俊 李民 +2 位作者 石伟杰 黄勤竹 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第6期772-779,共8页
在真核细胞中,组蛋白的乙酰化状态对于基因转录的正常进行具有重要的调控作用。组蛋白的乙酰化修饰由组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferases,HATs)执行,这种修饰是动态的、可逆的,负责去乙酰化修饰的酶是组蛋白去乙酰化酶(histon... 在真核细胞中,组蛋白的乙酰化状态对于基因转录的正常进行具有重要的调控作用。组蛋白的乙酰化修饰由组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferases,HATs)执行,这种修饰是动态的、可逆的,负责去乙酰化修饰的酶是组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs),推测HDACs可能通过影响组蛋白的乙酰化状态在基因的转录过程中发挥调控作用。该文以组蛋白去乙酰化酶HDAC1和HDAC3为对象,研究了它们在果蝇翅膀发育过程中对Wg(Wingless)、Hh(Hedgehog)以及Dpp(Decapentaplegic)信号通路下游靶基因转录的调控作用。结果发现,HDAC1功能缺失可导致Dpp下游靶基因Omb(optomotor-blind)和Hh下游靶基因Ptc(patched)的表达上调。Real-time quantitative PCR(RT-q PCR)结果显示,在HDAC1基因敲除的果蝇中,Ptc、Ci(cubitus interruptus)以及Omb的转录水平增加。HDAC3缺失导致Sal(spalt)的表达上调。RT-q PCR结果证实了HDAC3基因敲除果蝇的Sal转录增加,同时发现Vg(vestigial)的转录下降。而过表达HDAC1或HDAC3对下游靶基因的表达则没有影响。综上所述,该研究表明,HDAC1和HDAC3可以选择性地调控形态发生素下游靶基因的转录。 展开更多
关键词 果蝇 HDAC1 HDAC3 形态发生素 基因转录
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车身钣金空腔密封胶烘烤特性研究 被引量:1
11
作者 孙大为 +3 位作者 夏天 雷小俊 宋兴瑶 孙明昊 《汽车实用技术》 2021年第19期125-127,共3页
车身密封胶烘烤后的变化路径是密封胶的一个重要特性。针对密封胶在钣金空腔内烘烤后的变化,通过对涂胶位置和涂胶宽度的研究,发现涂胶宽度达到一定数值后对密封性能有反作用的影响,此时通过适当减小涂胶量能够增加密封性能。
关键词 车身密封胶宽度 烘烤 密封 反作用
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组蛋白去乙酰化酶3参与调控Hippo信号通路
12
作者 张伉 冯颖 +1 位作者 戚昀 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期395-404,共10页
Hippo信号通路在器官大小、组织再生和肿瘤发生发展等方面发挥重要作用,且它在进化上高度保守。Hippo信号通路的失调和多种癌症密切相关。果蝇中Hippo信号通路上游的级联激酶通过磷酸化效应因子Yki,进而调控Yki和转录因子Sd的结合以及... Hippo信号通路在器官大小、组织再生和肿瘤发生发展等方面发挥重要作用,且它在进化上高度保守。Hippo信号通路的失调和多种癌症密切相关。果蝇中Hippo信号通路上游的级联激酶通过磷酸化效应因子Yki,进而调控Yki和转录因子Sd的结合以及下游靶基因的表达。为了寻找Hippo信号通路新的调控因子,我们以过表达Yki造成果蝇眼睛过度增生的表型为基础,进行修饰因子筛选。通过筛选,我们发现组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)参与调控Hippo信号通路,敲除HDAC3特异性地抑制由过表达Yki引起的组织增生,导致果蝇眼睛变小。之后我们通过免疫荧光染色发现HDAC3的缺失激活了Hippo信号通路,进而影响器官发育。进一步地,我们利用遗传学实验和双萤光素酶报告系统分析探究到HDAC3作用于Sd上游,在体外条件下HDAC3的失活能够显著抑制Sd-Yki转录复合体的转录活性。这为探索Hippo信号通路新的调控机制奠定基础,也为HDAC3抑制剂的抗肿瘤治疗提供新的理论支持。 展开更多
关键词 HIPPO Yki 修饰因子筛选 组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3) 抑制因子
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甲胎蛋白基因的DNase Ⅰ敏感性和超敏感区与基因表达的关系
13
作者 李文裕 《实验生物学报》 CSCD 1989年第2期205-211,共7页
我们用大鼠AFP基因cDNA pRAF 87和5'端基因克隆片段为探针,分别探测了AFP基因活跃表达的胚肝组织、具表达潜能的成年肝组织以及不表达的肾组织AFP基因转录区和调控区的DNase Ⅰ敏感性和超敏感区。结果表明;胚肝组织和成年肝组织AFP... 我们用大鼠AFP基因cDNA pRAF 87和5'端基因克隆片段为探针,分别探测了AFP基因活跃表达的胚肝组织、具表达潜能的成年肝组织以及不表达的肾组织AFP基因转录区和调控区的DNase Ⅰ敏感性和超敏感区。结果表明;胚肝组织和成年肝组织AFP基因在转录区和5'端调控区都显示出较高的DNase Ⅰ敏感性,而肾组织则不敏感。胚肝组织AFP基因存在三个DNase Ⅰ超敏感区:基因转录起始区,离转录起始区上游约-3 kb左右区域,另一超敏感区位于基因内部4.1 kb EcoR Ⅰ片段内。成年肝组织在转录起始区也存在一超敏感区,在基因内部4.1 kb EcoR Ⅰ片段显示较高的DNase Ⅰ敏感性。推测AFP基因上游-3 kb区域(1.5 kb HindⅢ片段区)DNase Ⅰ超敏感区可能与增强基因转录活性相关,而转录起始区超敏感区可能是维持细胞组织专一性表达所必需,基因转录区域内部DNase Ⅰ超敏感区可能与AFP基因维持具活跃表达或潜能表达的染色质空间结构相关。 展开更多
关键词 甲胎蛋白基因 DNASE I 基因表达
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人血小板衍生生长因子A链(PDGF-A)反义RNA表达克隆的构建
14
作者 李文裕 《细胞生物学杂志》 CSCD 1990年第1期33-37,共5页
利用DNA重组技术,我们将PDGF-A第一个外显子DNA片段和PDGF-A cDNA反向克隆到pSV_2 neo中,构建成两种PDGF-A反义RNA表达克隆。该两种PDGP-A反义RNA表达克隆可用于PDGF-A功能的研究以及肿瘤细胞生长阻断的探索。
关键词 PDGF-A 反义RNA 表达克隆
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异源PDGF-A链表达对CHO细胞生长和转化的作用
15
作者 叶秀珍 金健健 +4 位作者 王亚先 周金秋 幕晓军 李文裕 《实验生物学报》 CSCD 1989年第4期455-465,共11页
用DNA磷酸钙盐沉淀方法把含人PDGF(血小板衍生生长因子)A链cDNA的表达质粒pSV_2neo-A转染CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞),然后经G 418(400-800 μg/ml)筛选分离20个转染细胞株。选出其中At_1和Aot7细胞株所进行的实验结果表明,这些细胞的形... 用DNA磷酸钙盐沉淀方法把含人PDGF(血小板衍生生长因子)A链cDNA的表达质粒pSV_2neo-A转染CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞),然后经G 418(400-800 μg/ml)筛选分离20个转染细胞株。选出其中At_1和Aot7细胞株所进行的实验结果表明,这些细胞的形态和生长行为均发生明显的变化,PDGF-A链mRNA的表达水平比CHO细胞明显增高,胞质有强阳性的PDGF荧光反应,显示有PDGF样蛋白的合成。这些细胞不但生长速率加快,有高密度持续生长的特性,而且能在软琼脂培基上形成大集落和在裸鼠体内接种形成纤维肉瘤,提示外源PDGF-A链基因的表达有使CHO细胞生长失控和发生细胞恶性转化的作用。 展开更多
关键词 PDGF-A链 基因转移 CHO细胞
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光控超小型CRISPR/Cas经AAV载体递送实现对人基因组的高效编辑 被引量:1
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作者 钰莹 魏劲松 +1 位作者 赵冰 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期198-207,216,共11页
CRISRP/Cas系统是目前广为使用的基因编辑工具,而腺相关病毒(AAV)也是目前最安全有效的基因治疗递送载体。为了实现AAV载体介导的CRISRP/Cas基因编辑,各种可装载于AAV载体的基因编辑工具也先后被报道。尽管如此,AAV载体介导的时空特异... CRISRP/Cas系统是目前广为使用的基因编辑工具,而腺相关病毒(AAV)也是目前最安全有效的基因治疗递送载体。为了实现AAV载体介导的CRISRP/Cas基因编辑,各种可装载于AAV载体的基因编辑工具也先后被报道。尽管如此,AAV载体介导的时空特异性基因编辑仍较难实现。为此我们结合光遗传学,将蓝光诱导表达系统、超小型CRISPR/Un1Cas12f1基因编辑系统以及AAV载体递送系统进行有机整合,开发出光控诱导表达的超小型基因编辑系统(AAV-PA-Cas12f1),并将其通过AAV递送至人源细胞HEK293T中。在无光条件下其表达背景极低,而经过蓝光诱导实现了对人基因组的高效基因编辑:以Intergene2为例,利用PCR产物-TA克隆结合单克隆测序分析得到该系统的实际编辑效率高达56%,编辑类型为碱基缺失或兼具碱基缺失与插入。此工具的开发为实现体内精准基因编辑奠定了基础,为解析更多生物学机制及探索疾病治疗策略提供了技术平台。 展开更多
关键词 腺相关病毒 Un1Cas12f1 光控蛋白 时空特异性基因编辑 精准基因治疗
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