目的探讨鼻咽癌(NPC)肿瘤干细胞对抗顺铂诱导氧化应激损伤的机制。方法利用CCK-8法测定顺铂对NPC细胞CNE-2与NPC肿瘤干细胞CNE-2S的半数抑制浓度。观察不同浓度(0.1、0.5、1.0μmol·L-1)顺铂作用后,细胞内活性氧(ROS)、总谷胱甘肽(...目的探讨鼻咽癌(NPC)肿瘤干细胞对抗顺铂诱导氧化应激损伤的机制。方法利用CCK-8法测定顺铂对NPC细胞CNE-2与NPC肿瘤干细胞CNE-2S的半数抑制浓度。观察不同浓度(0.1、0.5、1.0μmol·L-1)顺铂作用后,细胞内活性氧(ROS)、总谷胱甘肽(GSH)的含量及总超氧化物歧化酶(SOD)的活性改变。实时定量RT-PCR测定1μmol·L-1顺铂作用于2组细胞48 h后,谷胱甘肽合成酶(GSS)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM)、SOD1和SOD2 m RNA的表达情况,免疫印迹法检测SOD2蛋白的表达情况。利用小干扰RNA技术沉默SOD2,并与1μmol·L-1顺铂共处理2组细胞,用台盼蓝染色观察细胞的存活情况。结果顺铂对CNE-2S的半数抑制浓度显著高于CNE-2(μmol·L-1:9.8±1.1 vs 2.4±0.6,P<0.05)。在不同浓度的顺铂处理后,2组细胞内ROS水平升高,但CNE-2S在处理前后的ROS水平均低于CNE-2(P<0.05)。1μmol·L-1顺铂刺激后,CNE-2S与CNE-2细胞中GSH含量均上升,但2组细胞间无明显差异(P>0.05);2组细胞中SOD活性均上升,且CNE-2S显著高于CNE-2(P<0.05)。顺铂处理前后,2组细胞的GSS、GCLC、GCLM和SOD1的m RNA水平无明显差异,但CNE-2S中SOD2的m RNA及蛋白表达水平高于CNE-2(P<0.05)。沉默SOD2与顺铂共处理2组细胞,能有效抑制其存活率。结论 NPC肿瘤干细胞CNE-2S高表达SOD2后,抗氧化应激能力增强,从而导致对顺铂的耐药。展开更多
文摘目的探讨鼻咽癌(NPC)肿瘤干细胞对抗顺铂诱导氧化应激损伤的机制。方法利用CCK-8法测定顺铂对NPC细胞CNE-2与NPC肿瘤干细胞CNE-2S的半数抑制浓度。观察不同浓度(0.1、0.5、1.0μmol·L-1)顺铂作用后,细胞内活性氧(ROS)、总谷胱甘肽(GSH)的含量及总超氧化物歧化酶(SOD)的活性改变。实时定量RT-PCR测定1μmol·L-1顺铂作用于2组细胞48 h后,谷胱甘肽合成酶(GSS)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM)、SOD1和SOD2 m RNA的表达情况,免疫印迹法检测SOD2蛋白的表达情况。利用小干扰RNA技术沉默SOD2,并与1μmol·L-1顺铂共处理2组细胞,用台盼蓝染色观察细胞的存活情况。结果顺铂对CNE-2S的半数抑制浓度显著高于CNE-2(μmol·L-1:9.8±1.1 vs 2.4±0.6,P<0.05)。在不同浓度的顺铂处理后,2组细胞内ROS水平升高,但CNE-2S在处理前后的ROS水平均低于CNE-2(P<0.05)。1μmol·L-1顺铂刺激后,CNE-2S与CNE-2细胞中GSH含量均上升,但2组细胞间无明显差异(P>0.05);2组细胞中SOD活性均上升,且CNE-2S显著高于CNE-2(P<0.05)。顺铂处理前后,2组细胞的GSS、GCLC、GCLM和SOD1的m RNA水平无明显差异,但CNE-2S中SOD2的m RNA及蛋白表达水平高于CNE-2(P<0.05)。沉默SOD2与顺铂共处理2组细胞,能有效抑制其存活率。结论 NPC肿瘤干细胞CNE-2S高表达SOD2后,抗氧化应激能力增强,从而导致对顺铂的耐药。
