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SRAP分子标记及其应用概述 被引量：37
1
作者 李巧燕 林瑞庆 朱兴全 《热带医学杂志》 CAS 2006年第4期467-469,F0004,共4页
序列相关扩增多态性(SRAP)是近年来发展起来的一种新型分子标记系统,它具有简便、中等产量、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点,最大的特点是它针对的是基因的阅读框区域(ORFs)。SRAP标记中,引物的设计是关键,它是基于两个引... 序列相关扩增多态性(SRAP)是近年来发展起来的一种新型分子标记系统,它具有简便、中等产量、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点,最大的特点是它针对的是基因的阅读框区域(ORFs)。SRAP标记中,引物的设计是关键,它是基于两个引物的扩增,上游引物长17bp,对外显子进行特异扩增,下游引物长18bp,特异扩增的是内含子及启动子区域,由于个体不同以及物种之间的内含子、启动子之间间隔长度不同而产生多态性。两个引物均由5P端14～15bp的核心序列,和3’端3个选择性碱基组成,其中核心序列又由长为10～11bp的无特异性的填充序列以及CCGG(正向引物中),或AATT(反向引物中)组成。且正向和反向引物中的填充序列必须不同。扩增的过程采用复性变温法,前5个循环复性温度为35℃,后30～35个循环则为50℃,扩增后的DNA片段可用聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离,EB、银染或放射自显影检测。目前SRAP已开始在植物种质资源鉴定评价、种缘进化关系、遗传图谱构建、基因定位、重要性状标记以及比较基因组学方面得到成功应用。 展开更多
关键词 SHAP 分子标记 ORFs PCR
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关于若干化探数据处理方法的讨论 被引量：39
2
作者 纪宏金 林瑞庆 周永昶 《地质与勘探》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期56-59,共4页
化探数据处理中的系统误差校正和异常识别方法很多 ,移动标准化法、分区标准化法和衬度系数法是其中的几种方法 ,主要对这几种方法做了简单的介绍并对其效果进行了对比 ,最后着重讨论了C型变换法的优点。
关键词 地球化学找矿 系统误差校正 数据处理 异常识别 标准化变换
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猪弓形虫病特异PCR诊断方法的建立 被引量：28
3
作者 谢德华 朱兴全 +6 位作者 崔焕粦 丘初集 范万红 廖申权 翟敏莉 林瑞庆 翁亚彪 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期289-293,共5页
以核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列作为弓形虫种特异的遗传标记,建立了猪弓形虫病特异PCR诊断方法。应用人工感染的方法建立了猪弓形虫病动物模型,摸索出猪弓形虫病PCR检测的最佳条件。敏感性和特异性试验结果显示,该PCR方法最低... 以核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列作为弓形虫种特异的遗传标记,建立了猪弓形虫病特异PCR诊断方法。应用人工感染的方法建立了猪弓形虫病动物模型,摸索出猪弓形虫病PCR检测的最佳条件。敏感性和特异性试验结果显示,该PCR方法最低能检测到10 个弓形虫速殖子的DNA,且与相关的8种原虫和线虫均无交叉反应,证明该PCR方法具有高度的敏感性和特异性。动物感染试验结果证明,在试验猪出现明显临床症状时(感染后第5 d),对取材的8 个组织样品用该PCR方法检测,有6个组织样品为阳性,其中检出率最高的组织为肺门淋巴结。 展开更多
关键词 弓形虫 特异PCR 猪 诊断
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异尖线虫病概述 被引量：23
4
作者 曹湛 刘劲松 +2 位作者 何芳 林瑞庆 朱兴全 《热带医学杂志》 CAS 2004年第4期494-497,共4页
异尖线虫病是由异尖线虫科某些种的活的第三期幼虫感染而引起的疾病,可引起人的急腹症、过敏性症状等。异尖线虫病呈世界性分布,已成为重要的食源性人兽共患寄生虫病,严重威胁人类的健康,是我国禁止入境的二类寄生虫病。本文综述了该病... 异尖线虫病是由异尖线虫科某些种的活的第三期幼虫感染而引起的疾病,可引起人的急腹症、过敏性症状等。异尖线虫病呈世界性分布,已成为重要的食源性人兽共患寄生虫病,严重威胁人类的健康,是我国禁止入境的二类寄生虫病。本文综述了该病的病原学、流行病学、病理变化、症状、诊断及其治疗和预防。 展开更多
关键词 异尖线虫病 诊断 防制
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广东集约化猪场结肠小袋纤毛虫感染情况调查 被引量：25
5
作者 翁亚彪 胡毅军 +2 位作者 李岩 林瑞庆 朱兴全 《热带医学杂志》 CAS 2005年第6期827-829,共3页
为了解广东省集约化猪场的结肠小袋纤毛虫的感染情况,我们于2001年7月至2003年12月,采用粪便检查法抽检了广东省20个代表性集约化猪场的种猪和肉猪共1906头的粪样。结果发现,场阳性率为100%,各场的感染率为14.2%～72.2%。其中种母猪的... 为了解广东省集约化猪场的结肠小袋纤毛虫的感染情况,我们于2001年7月至2003年12月,采用粪便检查法抽检了广东省20个代表性集约化猪场的种猪和肉猪共1906头的粪样。结果发现,场阳性率为100%,各场的感染率为14.2%～72.2%。其中种母猪的感染率为46.8%,种公猪的感染率为50.5%,育肥猪的感染率为49.8%,生长猪的感染率为34.8%,保育猪的感染率为20.1%。本文的调查结果表明,广东省集约化猪场不同生长阶段猪结肠小袋纤毛虫的感染情况均很严重,调查结果为猪场制定防制结肠小袋纤毛虫的措施提供了科学依据。 展开更多
关键词 集约化猪场 结肠小袋纤毛虫 感染率
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弓形虫ITS及5.8S序列的PCR扩增、克隆及分析 被引量：16
6
作者 翁亚彪 谢德华 +4 位作者 林瑞庆 李华文 张德林 吴绍强 朱兴全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期70-73,共4页
通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)及5 8SDNA序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析,旨在对国内不同宿主间弓形虫虫株的遗传变异情况进... 通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)及5 8SDNA序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析,旨在对国内不同宿主间弓形虫虫株的遗传变异情况进行分析和验证,为分子遗传学和分子诊断学研究提供资料。结果显示:QH绵羊株、ZS人株、SH人株、CN猪株的ITS及5 8S序列完全一致,且与GenBank上注册RH株的ITS及5 8S序列也一致;仅实验室传代保存的RH株的ITS2序列与其它4株的ITS2有2个碱基的差异。结果表明ITS可作为分子标记用于弓形虫与其它原虫的种间鉴定,但不适合用于弓形虫种内遗传变异的研究。 展开更多
关键词 弓形虫 SH 序列 RH 克隆 宿主 CN 绵羊 PCR扩增 强毒株
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利用抑制消减杂交技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因 被引量：16
7
作者 吴绍强 邹丰才 +3 位作者 翁亚彪 宋慧群 林瑞庆 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1040-1045,共6页
为了筛选线虫的性别特异性基因,为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具,本研究选择猪蛔虫(Ascarissuum)为模型,分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后,采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构... 为了筛选线虫的性别特异性基因,为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具,本研究选择猪蛔虫(Ascarissuum)为模型,分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后,采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库,并采用地高辛(DIG)标记的cDNA探针进行Southern杂交检验所构建文库的消减效率。结果表明,雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库均具有很强的性别特异性。随机从各库中各抽取25个克隆进行测序及在线BLAST分析,发现在25个雄虫ESTs中有20个已知ESTs,5个新的ESTs;25个雌虫ESTs中有11个已知ESTs,还有8个可能为新基因。猪蛔虫性别差异表达的消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究性别特异基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 抑制消减杂交技术 筛选 猪 蛔虫 性别差异基因 CDNA文库
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弓首蛔虫线粒体cox1基因的多态性研究 被引量：14
8
作者 李明伟 林瑞庆 +4 位作者 邹丰才 宋慧群 曹湛 何芳 朱兴全 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期386-390,共5页
应用PCR SSCP技术和DNA 序列分析对犬弓首蛔虫(Toxocara canis)线粒体DNA(mtDNA)中的细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)进行了分析研究,并与弓首属的猫弓首蛔虫、马来西亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫及弓蛔属的狮弓蛔虫进行了... 应用PCR SSCP技术和DNA 序列分析对犬弓首蛔虫(Toxocara canis)线粒体DNA(mtDNA)中的细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)进行了分析研究,并与弓首属的猫弓首蛔虫、马来西亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫及弓蛔属的狮弓蛔虫进行了种间比较。结果显示,犬弓首蛔虫种群内的pcox1 序列差异为2.72%,与马来西亚弓首蛔虫种群间的序列差异为11.38%,与猫弓首蛔虫种群间的序列差异为11. 20%,与牛弓首蛔虫种群间的序列差异为10.40%,与狮弓蛔虫种群间的序列差异为11.48%;马来西亚弓首蛔虫种群内的pcox1 序列差异为0.57%,与猫弓首蛔虫的序列差异为8.23%,与牛弓首蛔虫的序列差异为8.70%,与狮弓蛔虫的序列差异为10.60%。研究证实,犬弓首蛔虫不同地方虫株的pcox1 有一定差异,与同属其他种类及狮弓蛔虫的差异较大;马来西亚弓首蛔虫确为一独立种。 展开更多
关键词 弓首蛔虫 线粒体DNA cox1基因 PCR—SSCP
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中国4个弓形虫虫株GRA6基因的比较分析 被引量：20
9
作者 谢德华 翁亚彪 +4 位作者 李华文 郑唤钦 林瑞庆 张德林 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1495-1500,共6页
通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的致密颗粒抗原(GRA6)基因进行PCR-RFLP分析,首次对中国弓形虫虫株进行了基因分型研究,旨在了解中国弓形虫基因型的分布情况,从而为... 通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的致密颗粒抗原(GRA6)基因进行PCR-RFLP分析,首次对中国弓形虫虫株进行了基因分型研究,旨在了解中国弓形虫基因型的分布情况,从而为进一步的分子遗传学研究以及弓形虫病的防制提供资料。PCR-RFLP分析显示两种带型:RH、SH、CN3株弓形虫为一种带型,QH和ZS2株弓形虫为另一种电泳带型。GRA6序列分析结果显示:RH、SH、CN3株弓形虫的GRA6基因序列上的MseΙ酶切位点与国外报道的RH株一致,同属于基因型Ι,为强毒株;QH和ZS2株弓形虫的MseΙ酶切位点与国外报道的弱毒株BEVERLEY株和ME49株一致,同属于基因型Ⅱ,与PCR-RFLP分析结果一致。除MseΙ酶切位点外,中国的几个虫株GRA6序列与GenBankTM注册的RH株及BEVERLEY和ME49两个弱毒株有个别碱基的差异。结果证明中国人源弓形虫包含了Ι、Ⅱ两种基因型,而动物源性弓形虫则因宿主和来源地不同亦有Ι、Ⅱ两个基因型。 展开更多
关键词 虫株 比较分析 RFLP分析 酶切位点 分析结果 基因型 遗传学研究 PCR MSe 致密颗粒 国际标准 基因分型 分布情况 弓形虫病 基因序列 强毒株 弱毒株 H株 带型 中国人 来源地 动物源 宿主 RH 显示 国外 绵羊 抗原 猪
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我国片形吸虫(Fasciola)线粒体细胞色素c氧化酶亚基基因(cox1)部分序列的多态性 被引量：15
10
作者 董世娟 黄维义 +4 位作者 林瑞庆 钱德兴 吴绍强 宋慧群 朱兴全 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期378-381,共4页
用33P对引物进行标记,对来自国内不同地区不同宿主的片形吸虫(Fasciola)的线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基基因(pcox1)部分序列进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(SSCP)分析,结果76个虫体均成功地扩增出约450bp的基因片段;SSCP分析显示,... 用33P对引物进行标记,对来自国内不同地区不同宿主的片形吸虫(Fasciola)的线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基基因(pcox1)部分序列进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(SSCP)分析,结果76个虫体均成功地扩增出约450bp的基因片段;SSCP分析显示,不同地区或同一地区的不同样品在pcox1的SSCP带型上存在多态性;代表性样品的测序结果表明,其碱基序列存在差异。试验结果显示,我国片形吸虫pcox1序列种内变异不明显,种间变异显著,表明cox1序列可以作为片形吸虫分类鉴定中一个可靠的遗传标记。 展开更多
关键词 片形吸虫 cox1 PCR-SSCP 多态性
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棕熊蛔虫ITS rDNA的PCR扩增与序列分析 被引量：16
11
作者 彭仕明 黄勉 +5 位作者 陈武 唐剑栋 蔡勤辉 梁玉珍 林瑞庆 朱兴全 《中国兽医寄生虫病》 CAS 2008年第3期1-5,共5页
目的以核糖体DNA（rDNA）的第一与第二内转录间隔区序列（ITS-1及ITS-2）鉴定从广州动物园棕熊分离的蛔虫种类。方法应用PCR方法以保守引物NC5和NC2扩增蛔虫样本的ITS及5．8SrDNA序列，将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-TEsay载体，... 目的以核糖体DNA（rDNA）的第一与第二内转录间隔区序列（ITS-1及ITS-2）鉴定从广州动物园棕熊分离的蛔虫种类。方法应用PCR方法以保守引物NC5和NC2扩增蛔虫样本的ITS及5．8SrDNA序列，将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-TEsay载体，用菌落PCR及酶切鉴定阳性菌落，对阳性菌落进行测序，并与Gen．Bank“公布的人蛔虫（Ascaris lumbricoides）、猪蛔虫（Ascariis suum）、浣熊贝利斯蛔虫（Baylisascaris procyonh）及狮弓蛔虫（Toxascaris leonina）ITS序列比较。结果从棕熊分离的2个蛔虫样本的ITS及5．8SrDNA总长为859—861bp，种内相似性为99．7％，与GenBank^TM公布的人蛔虫、猪蛔虫、浣熊贝利斯蛔虫及狮弓蛔虫的相似性分别为84．6％、84．5％、89．3％及72．3％，序列差异明显。结论棕熊蛔虫不同于上述种类蛔虫，可能为Baylisacaris transfuga. 展开更多
关键词 棕熊 蛔虫 内转录间隔区(ITS) PCR扩增 序列比较
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鸡异刺线虫ITS rDNA的PCR扩增、克隆及序列分析 被引量：15
12
作者 吕召宏 徐广庭 +2 位作者 林瑞庆 宋慧群 朱兴全 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第8期41-44,共4页
应用PCR方法用保守引物NC5及NC2,扩增了从广州地区鸡体分离的鸡异刺线虫rDNA的第一、第二内转录间隔区(ITS-1,ITS-2)及5.8S基因。将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-TEasy载体,用菌落PCR及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落进行测序。试验... 应用PCR方法用保守引物NC5及NC2,扩增了从广州地区鸡体分离的鸡异刺线虫rDNA的第一、第二内转录间隔区(ITS-1,ITS-2)及5.8S基因。将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-TEasy载体,用菌落PCR及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落进行测序。试验结果表明,ITS-1长为428bp,ITS-2长为386bp。通过与网上发表的来自澳大利亚的鸡异刺线虫基因序列比较结果表明,广州鸡体内的异刺线虫和澳大利亚鸡异刺线虫的ITS-2序列是完全一样的,ITS-1序列有微小差异,广州鸡的2个不同虫体样本的ITS序列完全一致。本项研究结果为鸡异刺线虫的进一步分子生物学研究奠定了基础,并为寄生虫分子系统学研究提供了资料。 展开更多
关键词 鸡异刺线虫 内转录间隔区 RDNA PCR 序列分析
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猪食道口线虫ITS-1和ITS-2rDNA的PCR-SSCP分析 被引量：13
13
作者 林瑞庆 张新高 +4 位作者 胡友兰 李国清 翁亚彪 宋慧群 朱兴全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期323-326,331,共5页
以采自我国不同地区猪体的食道口线虫虫株为研究对象,PCR扩增出ITS-1和ITS-2序列片段,然后采用单链构象多态性(SSCP)方法分析PCR产物,对不同地区食道口线虫进行分子鉴定。所有样品经SSCP分析显示两种带型,第一种为有齿食道口线虫带型,... 以采自我国不同地区猪体的食道口线虫虫株为研究对象,PCR扩增出ITS-1和ITS-2序列片段,然后采用单链构象多态性(SSCP)方法分析PCR产物,对不同地区食道口线虫进行分子鉴定。所有样品经SSCP分析显示两种带型,第一种为有齿食道口线虫带型,另一种为未定种食道口线虫带型。代表性样品的测序结果表明,未定种食道口线虫带型的样品为四棘食道口线虫。本研究在国际上首次报道了中国猪四棘食道口线虫的ITS序列,并建立了区分有齿食道口线虫和四棘食道口线虫的PCR-SSCP方法,从而为食道口线虫的分子生物学的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 食道口线虫 ITS-1 ITS-2 单链构象多态性(SSCP) 猪
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有齿食道口线虫ITS及5.8S DNA片段的PCR扩增、克隆及序列分析 被引量：14
14
作者 林瑞庆 陈丽莎 +5 位作者 翁亚彪 吴绍强 邹丰才 李明伟 宋慧群 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期639-642,共4页
运用 PCR 方法以保守引物 NC5 及 NC2 扩增了从广东阳江地区猪体分离的食道口线虫 rDNA 的内转录间隔区(ITS)及 5.8S 序列。将 PCR 扩增出的片段纯化后克隆至 pGEM-T Easy 载体,用 PCR 技术及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落质粒 DNA 进行... 运用 PCR 方法以保守引物 NC5 及 NC2 扩增了从广东阳江地区猪体分离的食道口线虫 rDNA 的内转录间隔区(ITS)及 5.8S 序列。将 PCR 扩增出的片段纯化后克隆至 pGEM-T Easy 载体,用 PCR 技术及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落质粒 DNA 进行测序。结果表明,扩增的片段大小为 828 bp,包含部分的 18S、28S 及全部的 ITS-1(362 bp)、5.8S(153 bp)及 ITS-2(217 bp)序列。序列比较表明,该食道口线虫为有齿食道口线虫。本研究在国际上首次报道了中国猪有齿食道口线虫的 ITS 及 5.8S 序列,为食道口线虫的分子生物学的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 阳性 菌落 PCR扩增 克隆 阳江地区 首次 DNA片段 食道口线虫 中国猪 猪体
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湖南长沙及湘西泡状带绦虫分离株线粒体cox1基因的克隆及序列分析 被引量：17
15
作者 刘国华 戴荣四 +4 位作者 赵光辉 林瑞庆 刘伟 刘毅 朱兴全 《热带医学杂志》 CAS 2009年第2期117-120,共4页
目的研究湖南省长沙及湘西泡状带绦虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用pcox1序列重构泡状带绦虫与其他带科绦虫的种群遗传关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增泡状带绦虫虫株的pcox1,... 目的研究湖南省长沙及湘西泡状带绦虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用pcox1序列重构泡状带绦虫与其他带科绦虫的种群遗传关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增泡状带绦虫虫株的pcox1,应用ClustalX1.81程序对序列进行比对,然后用Phylip3.67程序MP法和Mage4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle5.2程序构建最大似然树;同时利用DNAstar5.0中的Megalign程序进行同源性分析,并与GenBankTM中已知泡状带绦虫相应基因序列进行比较分析。结果所获得的pcox1序列长度一致,均为343bp,与GenBankTM公布的带科绦虫序列进行比较分析表明,湖南长沙分离株1和湘西分离株5与已知泡状带绦虫相应基因的相似性分别为99.4%和99.7%,与其它带科绦虫的相似性均小于90.0%;湖南长沙1和湘西分离株5与已知泡状带绦虫相应基因遗传距离分别为0.006和0.003,与其他带科绦虫的遗传距离均大于0.100。种系发育树表明,2个分离株与已知泡状带绦虫位于同一分枝,Bootstrap值在97%以上。结论由于泡状带绦虫pcox1序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的标记,研究结果为进一步研究泡状带绦虫的群体遗传结构奠定了基础。 展开更多
关键词 泡状带绦虫 线粒体DNA cox1基因 种系发育关系
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鸡蛔虫ITS rDNA的PCR扩增克隆及序列分析 被引量：15
16
作者 林瑞庆 蔡天城 +2 位作者 吴桂英 宋慧群 朱兴全 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期24-25,共2页
关键词 PCR扩增克隆 鸡蛔虫 ITS 序列分析 RDNA 内转录间隔区 生物进化过程 感染强度
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功能基因组学研究概述 被引量：10
17
作者 朱兴全 林瑞庆 宋慧群 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期29-34,共6页
关键词 功能基因组学 人类基因组计划 模式生物 基因组测序 基因功能 基因组表达 蛋白质组学 基因组多样性 基因诱变 基因剔除 转基因 表达谱基因芯片
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中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增、克隆及分析 被引量：14
18
作者 宋慧群 张德林 +3 位作者 廖申权 翁亚彪 林瑞庆 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期2114-2118,共5页
【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的9个弓形虫虫株(ZS1人株、PY猪株、GY猪株、ZC猪株、NT猪株、ZS人株、SH人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529bp重复序列的变异进行研究,从而为进一步的分子诊断和分子... 【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的9个弓形虫虫株(ZS1人株、PY猪株、GY猪株、ZC猪株、NT猪株、ZS人株、SH人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529bp重复序列的变异进行研究,从而为进一步的分子诊断和分子遗传学研究以及弓形虫病的防制奠定基础。【方法】抽提基因组DNA后,用PCR方法对10个虫株的529bp重复序列进行扩增;扩增产物经纯化后克隆于pGEM-TEasy质粒载体,再经菌落PCR及酶切鉴定阳性克隆,然后对阳性克隆进行测序及序列分析。【结果】10个弓形虫虫株的529bp重复序列都不完全相同,它们之间的核苷酸序列变异范围为0.8%～2.9%。变异主要位于第32～55位碱基之间,这些碱基变异与虫株的宿主来源、地域来源及毒力之间没有相关性。【结论】529bp重复序列可作为遗传标记,用于弓形虫与其它寄生虫的种间鉴定,但不适合用于研究弓形虫的种内遗传变异。 展开更多
关键词 弓形虫 PCR 529bp重复序列 序列分析 遗传变异
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Ⅰ群禽腺病毒血清4型广东株的分离鉴定及分子特性 被引量：15
19
作者 罗洋洋 招丽婵 +2 位作者 李群辉 林瑞庆 翁亚彪 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期27-33,共7页
【目的】对广东地区疑似心包积液–肝炎综合征患病鸡进行腺病毒分离鉴定并研究其分子特征。【方法】采集的病料样品,通过鸡胚有限稀释法经SPF鸡胚传代分离纯化病毒,进行致病性试验,并对病毒的hexon、fiber-2、ORF19和ORF29基因进行PCR扩... 【目的】对广东地区疑似心包积液–肝炎综合征患病鸡进行腺病毒分离鉴定并研究其分子特征。【方法】采集的病料样品,通过鸡胚有限稀释法经SPF鸡胚传代分离纯化病毒,进行致病性试验,并对病毒的hexon、fiber-2、ORF19和ORF29基因进行PCR扩增,分析其分子特征。【结果】hexon基因序列分析显示此次分离的毒株为Ⅰ群禽腺病毒血清4型(命名为WM-XC株),SPF鸡接种分离毒株后,致死率达90%,死亡鸡只出现明显的心包积液、肝炎等变化,肝脏病理切片可观察到明显的嗜酸性包涵体,显示分离毒株具有致病性。fiber-2基因序列同经典毒株ON1和KR5相应序列的相似性达96.1%和97.0%,与2015年以来国内分离的毒株序列相似性则达到100%;ORF29序列与2013年国内分离到的毒株JSJ13和JN13的相应序列相比存在33个碱基的缺失;WM-XC分离株与2015年以来国内分离毒株序列相同,但相比经典株ON1和KR-5,缺失ORF19序列。【结论】此次从广东地区分离到的血清4型Ⅰ群腺病毒,和近年国内其他地区分离的流行毒株一样,其fiber-2、ORF19和ORF29基因序列与经典毒株差异明显。 展开更多
关键词 禽腺病毒 分离鉴定 分子特性 hexon基因 fiber-2基因 致病性
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弓首蛔虫和狮弓蛔虫线粒体nad1基因部分序列多态性研究 被引量：10
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作者 李明伟 林瑞庆 +4 位作者 邹丰才 何芳 邓艳 宋慧群 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1915-1920,共6页
【目的】对弓首属犬弓首蛔虫、猫弓首蛔虫、马来西亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫和狮弓属狮弓蛔虫线粒体DNA(mtDNA)中烟酰胺脱氢酶亚基I(nad1)基因部分序列(pnad1)进行比较研究,分析它们之间的序列差异和种群遗传关系。【方法】先用同位素(γ3... 【目的】对弓首属犬弓首蛔虫、猫弓首蛔虫、马来西亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫和狮弓属狮弓蛔虫线粒体DNA(mtDNA)中烟酰胺脱氢酶亚基I(nad1)基因部分序列(pnad1)进行比较研究,分析它们之间的序列差异和种群遗传关系。【方法】先用同位素(γ33P)标记上下游引物,通过PCR方法扩增出单个虫体线粒体pnad1片段,然后采用单链构象多态性(SSCP)分析技术对pnad1片段进行多态性研究,最后挑选出代表性样品进行测序,并利用基因分析软件DNAStar(版本5.01)对序列进行分析比较。【结果】犬弓首蛔虫种内pnad1基因序列差异为0.3%～1.9%,与猫弓首蛔虫、马来亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫和狮弓蛔虫的种间序列差异分别为11.0%～14.1%、10.7%～12.4%、12.6%～13.7%和17.5%～18.2%。猫弓首蛔虫种内pnad1基因序列差异为2.8%,与马来西亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫和狮弓蛔虫的种间序列差异分别是12.0%～13.0%、15.1%和18.6%～21.2%。马来西亚弓首蛔虫种内pnad1基因序列差异为0～0.3%,与牛弓首蛔虫和狮弓蛔虫的种间序列差异分别是12.4%～12.8%和18.6%～19.0%。【结论】犬弓首蛔虫、猫弓首蛔虫和马来西亚弓首蛔虫不同地方虫株的pnad1序列都有一定差异(0～2.8%)。但种间pnad1的序列差异(10.7%～21.2%)明显高于种内的序列差异,说明nad1基因可以作为弓首蛔虫和狮弓蛔虫分子分类及种群遗传关系研究的遗传标记。 展开更多
关键词 弓首蛔虫 狮弓蛔虫 线粒体DNA nad1基因 PCR 单链构象多态性分析 序列分析
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