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茶树CsDREB-A2转录因子基因的克隆与非生物胁迫响应分析 被引量:8
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作者 韩妙华 滕瑞敏 +3 位作者 李辉 刘昊 林士 庄静 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2647-2657,共11页
干旱应答元件结合蛋白(DREB)类转录因子在植物逆境信号转导途径中具有重要的调控作用。为了解AP2/ERF转录因子在茶树逆境胁迫的分子调控机理,本研究从茶树龙井43叶片的cDNA中克隆得到一个编码CsDREB-A2转录因子的基因;对CsDREB-A2基因... 干旱应答元件结合蛋白(DREB)类转录因子在植物逆境信号转导途径中具有重要的调控作用。为了解AP2/ERF转录因子在茶树逆境胁迫的分子调控机理,本研究从茶树龙井43叶片的cDNA中克隆得到一个编码CsDREB-A2转录因子的基因;对CsDREB-A2基因及其编码蛋白序列特征进行分析,并利用实时荧光定量PCR法检测该基因在茶树不同非生物胁迫处理下的表达水平。结果表明,CsDREB-A2基因开放阅读框为1056 bp,编码351个氨基酸,其编码氨基酸序列具有AP2保守结构域,包含典型的YRG元件和WLG基序。AP2结构域第14、第19位氨基酸分别为缬氨酸和谷氨酸。拟南芥AP2/ERF家族转录因子的进化分析表明,该转录因子属于DREB亚族的A2组。CsDREB-A2相对分子质量为39080 Da,理论等电点为5.32,属于亲水性蛋白,主要由α-螺旋和随机卷曲组成,无序化特征明显且存在一个LM无序区域;可能定位于细胞核,不存在信号肽和跨膜结构,属于非分泌蛋白。CsDREB-A2基因在高温(38℃)和干旱(200 g·L^-1 PEG)胁迫下均能快速诱导表达,并显著高于对照,分别在处理4、2 h达到最大值,为对照的20.70和42.90倍,植物在渗透胁迫下,可能通过ABA信号途径调节该基因对干旱的耐受性。高盐(200 mmol·L^-1 NaCl)胁迫下CsDREB-A2基因的表达受抑制,推测其可能存在负调控结构域降低该基因在盐胁迫下的表达量。本试验结果为研究DREB类转录因子在茶树抗逆胁迫的分子调控机制提供了一定的理论参考。 展开更多
关键词 茶树 CsDREB-A2 转录因子 非生物胁迫 表达分析
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茶树CsGME1基因的克隆与逆境胁迫响应分析 被引量:4
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作者 杨雅焯 李辉 +3 位作者 林士 刘婧愉 滕瑞敏 庄静 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期232-239,共8页
该研究基于茶树转录组和基因组信息,以茶树‘龙井43’为实验材料,从其cDNA中克隆获得茶树CsGME1基因,并对其蛋白序列特征、基因表达模式及其在不同非生物胁迫下的表达水平进行实时荧光定量分析。结果显示:(1)茶树CsGME1开放阅读框长度为... 该研究基于茶树转录组和基因组信息,以茶树‘龙井43’为实验材料,从其cDNA中克隆获得茶树CsGME1基因,并对其蛋白序列特征、基因表达模式及其在不同非生物胁迫下的表达水平进行实时荧光定量分析。结果显示:(1)茶树CsGME1开放阅读框长度为1131 bp,编码376个氨基酸;该序列与多个相关物种的GME氨基酸序列一致性为94.25%,均含有NAD结合域。(2)进化树分析表明,茶树CsGME1基因与番茄SlGME1亲缘关系较近,与水稻OsGME2亲缘关系最远。(3)CsGME1蛋白属于亲水性蛋白,理论相对分子量为42046.84 Da,理论等电点为5.73,具有4个无序化区域,无序化程度较低;CsGME1蛋白二级结构由39.25%α-螺旋,13.26%延伸主链,5.84%β-转角和41.38%随机卷曲组成;三级结构分析结果显示,CsGME1包含螺旋和随机卷曲,与二级结构吻合。(4)荧光定量分析结果显示,在高温(38℃)、低温(4℃)、干旱(20%PEG)和高盐(200 mmol·L-1 NaCl)4种非生物胁迫处理下,茶树CsGME1基因均有响应,且表达存在差异,推测CsGME1参与了茶树的逆境胁迫响应过程。 展开更多
关键词 茶树 CsGME1 多序列比对 进化分析 非生物胁迫 表达分析
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兔病毒性出血症快速检测方法的建立 被引量:3
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作者 林颖峥 林士 +4 位作者 孙欣 熊炜 张强 王艳 李树清 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1280-1283,1290,共5页
兔病毒性出血症是兔的1种传播性极强、致死率极高的重要传染病,针对性地加强该病原的进出境监测将对动物疫病防控具有重要的意义。本研究使用软件分析设计RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR的引物和TaqMan探针,建立了兔病毒性出血症RT-PCR和... 兔病毒性出血症是兔的1种传播性极强、致死率极高的重要传染病,针对性地加强该病原的进出境监测将对动物疫病防控具有重要的意义。本研究使用软件分析设计RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR的引物和TaqMan探针,建立了兔病毒性出血症RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR方法,并测定其特异性和敏感性。试验结果显示,只有阳性参照样品的DNA出现扩增,其他对照样品均未见扩增产物,证实这些检测方法具有良好的特异性。对阳性样品DNA进行10倍梯度稀释,再分别用新建的2种方法进行试验,结果显示兔病毒性出血症RT-PCR检测的DNA下限量为100pg,实时荧光定量RT-PCR的DNA下限量为100fg,2种方法都具有较高的敏感性。新建的RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR方法互补应用,有助于缩短检疫周期、提高检测效率,为出入境口岸部门加强入境试验兔或其他不同用途兔的疫病检测提供技术保障。 展开更多
关键词 兔病毒性出血症 引物 TAQMAN探针 RT-PCR 实时荧光定量RT-PCR
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茶树CsMDHAR基因的克隆与非生物胁迫响应分析 被引量:2
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作者 林士 李辉 +4 位作者 刘昊 滕瑞敏 刘婧愉 王爽 庄静 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期495-505,共11页
基于茶树转录组数据,以龙井43茶树cDNA为模板,克隆得到开放阅读框(ORF)长度为1 305 bp,编码434个氨基酸的茶树单脱氢抗坏血酸还原酶基因,命名为CsMDHAR。蛋白序列特征和基因表达模式分析表明,CsMDHAR蛋白含有FAD结合功能域,属于FAD依赖... 基于茶树转录组数据,以龙井43茶树cDNA为模板,克隆得到开放阅读框(ORF)长度为1 305 bp,编码434个氨基酸的茶树单脱氢抗坏血酸还原酶基因,命名为CsMDHAR。蛋白序列特征和基因表达模式分析表明,CsMDHAR蛋白含有FAD结合功能域,属于FAD依赖的吡啶核苷酸-硫基氧化还原酶(Pyr-redox-2)家族。该蛋白有两个无序化区域,而且包含有32个磷酸化位点,理论相对分子量为47.21 kDa,pI为5.99,属于亲水性蛋白;CsMDHAR蛋白二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主。通过PlantCARE和PLACE对启动子上游调控元件进行分析预测,结果显示,CsMDHAR基因启动子上游1 000 bp中含有多个与光、激素以及植物抗逆有关的顺式作用元件。利用荧光定量PCR方法检测龙井43和迎霜的CsMDHAR、CsAO和CsAPX在4种不同非生物胁迫下的表达水平,结果表明,在低温(4℃)胁迫下,两个茶树品种的CsMDHAR、CsAO和CsAPX的表达均受抑制,且品种间的差异较小;在高温(38℃)和干旱(200 g·L^-1 PEG)胁迫下龙井43中的CsMDHAR表达均上调,分别在8 h和2 h时达到最大值,为对照的1.49倍和1.85倍;盐(200 mmol·L^-1 NaCl)胁迫下,CsAO和CsAPX在两种茶树品种中的表达量变化趋势相似,但变化幅度不同,可能与品种间不同的抗逆性有关。 展开更多
关键词 茶树 CsMDHAR 抗坏血酸 非生物胁迫 启动子元件分析 表达分析
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兔黏液瘤病快速检测方法的建立 被引量:2
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作者 林颖峥 林士 +5 位作者 宋青 郭雨雁 包雯骏 熊炜 李树清 魏晓锋 《中国动物检疫》 CAS 2015年第8期72-75,共4页
兔黏液瘤病是由兔黏液瘤病毒引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为了加强口岸对进境野生及实验用兔中兔黏液瘤病的筛查和流行病学调查,本研究建立了PCR和Real-time PCR快速高通量检测兔黏液瘤病的方法,证实两种检测方法具有良好... 兔黏液瘤病是由兔黏液瘤病毒引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为了加强口岸对进境野生及实验用兔中兔黏液瘤病的筛查和流行病学调查,本研究建立了PCR和Real-time PCR快速高通量检测兔黏液瘤病的方法,证实两种检测方法具有良好的特异性和灵敏性,适用于兔黏液瘤病的快速检测。 展开更多
关键词 兔黏液瘤病 PCR Real—time PCR TAQMAN探针
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外源24-表油菜素内酯对茶树光合特性的影响 被引量:2
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作者 万绮雯 杨妮 +4 位作者 李逸民 韩妙华 林士 滕瑞敏 庄静 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期58-70,共13页
以中茶108为试验材料,研究喷施不同浓度(0.10、0.30、0.50 mg·L-1)24-表油菜素内酯(EBR)对茶树叶片叶绿素含量、气孔开度、光合气体交换参数及其相关基因表达的影响。结果表明,处理后第一天,叶面喷施0.10、0.30 mg·L-1 EBR显... 以中茶108为试验材料,研究喷施不同浓度(0.10、0.30、0.50 mg·L-1)24-表油菜素内酯(EBR)对茶树叶片叶绿素含量、气孔开度、光合气体交换参数及其相关基因表达的影响。结果表明,处理后第一天,叶面喷施0.10、0.30 mg·L-1 EBR显著增加了茶树叶片叶绿素含量,与对照相比,分别增加了38.89%、22.22%。处理后第三天和第五天,0.10、0.30 mg·L-1 EBR处理的茶树叶片气孔开度显著升高。处理后第一天和第五天,喷施EBR显著提高了茶树叶片的净光合速率。同时,EBR处理能显著上调BR合成酶基因、碳同化关键酶基因、叶绿素合成关键酶基因的表达。综上,外源EBR通过调控相关基因表达调节茶树叶片叶绿素含量、气孔开度,进而提高茶树叶片的光合作用能力。 展开更多
关键词 茶树 24-表油菜素内酯 叶绿素 光合特性 基因表达
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野兔热快速检测方法的建立 被引量:1
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作者 林颖峥 林士 +4 位作者 张冠楠 李树清 熊炜 郭雨雁 严亚贤 《中国动物检疫》 CAS 2017年第10期94-97,共4页
野兔热是由土拉弗朗西斯菌引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为加强口岸对进境野生及实验用兔中野兔热的筛查和流行病学调查,基于土拉弗朗西斯菌保守基因序列,建立了PCR和实时PCR检测野兔热的方法。将建立的方法应用于临床样品... 野兔热是由土拉弗朗西斯菌引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为加强口岸对进境野生及实验用兔中野兔热的筛查和流行病学调查,基于土拉弗朗西斯菌保守基因序列,建立了PCR和实时PCR检测野兔热的方法。将建立的方法应用于临床样品检测发现经PCR检测,仅有土拉弗朗西斯菌DNA出现条带单一的特异性基因扩增,经实时PCR检测,土拉弗朗西斯菌DNA在10~12个循环处出现显著扩增,对照病毒样品未见扩增;PCR检测土拉弗朗西斯菌DNA模板的下限量为100~10 pg,而实时PCR检测的下限量为100~10 fg。检测结果证实两种检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适合应用于野兔热的快速检测。 展开更多
关键词 野兔热 PCR REAL-TIMEPCR TAQMAN探针
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有关力学计量仪器检定的探讨
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作者 林士 林永超 《中国科技期刊数据库 工业A》 2019年第3期4-4,共1页
计量学是力学中的一个重要的分支,特别是随着社会发展程度不断加深,计量学得到了更加广泛的发展和应用,已经逐渐的成为了一个庞大的学科。在力学计量的设计应用过程中,关键在于保障力学计量的统一性,既要保障力学计量方法的统一性,也要... 计量学是力学中的一个重要的分支,特别是随着社会发展程度不断加深,计量学得到了更加广泛的发展和应用,已经逐渐的成为了一个庞大的学科。在力学计量的设计应用过程中,关键在于保障力学计量的统一性,既要保障力学计量方法的统一性,也要保障计量标准的统一性,从而提升计量的准确度。因此,本文对力学计量仪器检定进行了分析,希望能够为我国力学计量仪器检定工作水平的提升提供参考。 展开更多
关键词 力学计量 仪器 检定
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