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特异腐质霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质 被引量:7
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作者 郑海英 黄平 +3 位作者 蔡少丽 柯崇榕 黄建忠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期145-153,共9页
【目的】在毕赤酵母中表达特异腐质霉Humicola insolens的中性内切葡聚糖酶Ⅱ,并对其性质加以研究。【方法】利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)NC3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因(egⅡ)的cDNA。将其插入表... 【目的】在毕赤酵母中表达特异腐质霉Humicola insolens的中性内切葡聚糖酶Ⅱ,并对其性质加以研究。【方法】利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)NC3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因(egⅡ)的cDNA。将其插入表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后电击转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115。【结果】SDS-PAGE和酶活的检测结果均表明:egⅡ基因在毕赤酵母中成功表达。重组酶的部分酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为70°C,且在65°C以下具有较好的热稳定性。最适反应pH为6.5,在pH 6.0?7.0之间有较好的稳定性。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达外源中性内切葡聚糖酶,为其今后在工业应用奠定了基础。 展开更多
关键词 中性内切葡聚糖酶Ⅱ 特异腐质霉 毕赤酵母
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中性纤维素酶外切葡聚糖酶CBHⅡ的异源表达 被引量:2
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作者 蔡少丽 +6 位作者 黄平 郑海英 柯崇榕 杨章萍 蔡水淋 艺平 黄建忠 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期88-91,共4页
利用聚合酶链式反应(PCR)技术,从本实验室保存的1株特异腐质霉EIM-50上克隆到中性纤维素酶外切葡聚糖酶基因(CBHⅡ)全长序列,大小约为1 586 bp。将其克隆到pPIC9K上,成功构建重组质粒pPIC9K-CBHⅡ,并经电转化引入毕赤酵母(Pichia pastor... 利用聚合酶链式反应(PCR)技术,从本实验室保存的1株特异腐质霉EIM-50上克隆到中性纤维素酶外切葡聚糖酶基因(CBHⅡ)全长序列,大小约为1 586 bp。将其克隆到pPIC9K上,成功构建重组质粒pPIC9K-CBHⅡ,并经电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。SDS-PAGE银染结果表明,该重组质粒在毕赤酵母中获得了异源表达。gel pro Analyser软件分析其表达蛋白的表观分子量约为62.548ku。用BandScan软件分析其蛋白表达量为2.3%,即0.738μg/mL(mg/L)。 展开更多
关键词 特异腐质霉 中性外切葡聚糖酶 毕赤酵母 异源表达
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木聚糖酶高产菌株EIM-30的鉴定及其产酶条件的优化 被引量:1
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作者 杨章萍 蔡少丽 +7 位作者 柯崇榕 黄平 刘小琳 余清梅 庄秀红 黄建忠 《工业微生物》 CAS CSCD 2012年第3期33-38,共6页
通过对木聚糖酶高产菌株EIM-30基于形态学和18SrDNA序列的系统发育进化分析,鉴定为里氏木霉Trichoder撇reesei。在单因子实验确定EIM-30产木聚糖酶的最适碳源和氮源的基础上,通过Plackett—Burman实验对影响其产酶的相关因素进行评估... 通过对木聚糖酶高产菌株EIM-30基于形态学和18SrDNA序列的系统发育进化分析,鉴定为里氏木霉Trichoder撇reesei。在单因子实验确定EIM-30产木聚糖酶的最适碳源和氮源的基础上,通过Plackett—Burman实验对影响其产酶的相关因素进行评估并筛选出3个显著效应因子,然后应用最陡爬坡实验和响应面分析确定最适产酶培养基配方为:酵母浸膏1.50%,蛋白胨1.00%,NaC10.50%,PPG-20000.10%,MgS041.20%,CaC20.18%,(NH4)2S040.45%,甘油4.18%,乳糖3.05%,K2唧041.59%。优化后TrichodermareeseiEIM-30的液体发酵产木聚糖酶的活力可达9.857×105V/mL,较优化前提高1.98倍。 展开更多
关键词 木聚糖酶 里氏木霉 分子进化系统 液体发酵 Plackett—Burman设计 响应面分析
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