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隐匿性乙型肝炎患者乙肝病毒preS／S基因突变分析 被引量：8
1
作者 吴蓓颖 蔡刚 +3 位作者 林佳菲 陆秋涯 李琳 樊绮诗 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期724-728,共5页
目的隐匿性乙肝感染与严重慢性肝损伤的病毒学与免疫学机制尚未完全阐明，拟通过研究隐匿性HBVpreS／S区基因变异，初步揭示隐匿性乙肝发生及其致慢性严重肝损伤的病毒学因素。方法收集瑞金医院门诊及住院HBsAg阴性患者的血清，抽提DNA... 目的隐匿性乙肝感染与严重慢性肝损伤的病毒学与免疫学机制尚未完全阐明，拟通过研究隐匿性HBVpreS／S区基因变异，初步揭示隐匿性乙肝发生及其致慢性严重肝损伤的病毒学因素。方法收集瑞金医院门诊及住院HBsAg阴性患者的血清，抽提DNA，利用巢式PCR方法对隐匿性感染进行检测；克隆阳性标本的preS／S区全长基因并测序分析，探讨其突变类型与严重慢性肝损伤的关系。结果在全部468份HBsAg阴性血清中共检出隐匿性HBV感染69例，HBcAb单独强阳性组、HBeAb单独强阳性组、HBeAg单独阳性组、HBcAb与HBsAb同时强阳性组和5项指标全阴性组的检出率分别为16％、8．7％、36．4％、18．3％和0％。隐匿性感染患者血清HBV．DNA水平明显低于HBsAg阳性感染患者，隐匿性HBVpreS／S区缺失突变、preS2基因M1I和Q2K突变，S基因Q129N／R／P、G185R和S210R突变的频率明显高于HBsAg阳性组。伴严重肝损伤的隐匿性感染较无严重肝损伤隐匿性感染患者在性别比例及血清HBV—DNA水平方面均有明显差异。伴严重肝损伤的隐匿性感染的HBV在preS2基因MII和Q2K，S基因G185R和S210R的突变频率明显高于无严重肝损伤者，但preS缺失和s基因Q129N／R／P的突变频率低于无严重肝损伤者。以伴严重肝损伤的隐匿性感染与HBsAg阳性严重肝损伤者相比，后者HBV—DNA水平明显高于前者，但preS2基因MII和Q2K、S基因G185R和S210R突变的频率明显低于前者。结论隐匿性感染与HBsAg阳性病人之间致慢性严重肝损伤的病毒学因素存在不同；preS2区MII和Q2K以及s区G185R和S210R等突变对于隐匿性乙肝患者而言，可能是评价其是否进展为严重慢性肝损伤的有用指标。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 前S/S基因 突变分析 肝损害
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459例乳腺癌患者21基因复发风险评分的临床意义 被引量：6
2
作者 林佳菲 吴佳毅 +2 位作者 蔡刚 吴蓓颖 林琳 《检验医学》 CAS 2017年第7期590-596,共7页
目的探讨乳腺癌21基因复发风险评分的分布情况及其与临床病理特征的相关性,同时探讨21基因复发风险评分在辅助化疗选择中的意义。方法选取接受手术治疗的459例雌激素受体(ER)阳性、人类表皮生长因子受体2(HER2)阴性的乳腺癌患者。提取... 目的探讨乳腺癌21基因复发风险评分的分布情况及其与临床病理特征的相关性,同时探讨21基因复发风险评分在辅助化疗选择中的意义。方法选取接受手术治疗的459例雌激素受体(ER)阳性、人类表皮生长因子受体2(HER2)阴性的乳腺癌患者。提取患者石蜡标本RNA,采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测21基因(16个乳腺癌相关基因和5个参考基因)的表达,计算21基因复发风险评分并以此分为低危组、中危组和高危组。比较不同21基因复发风险评分亚组与常规临床病理特征的关系以及在辅助化疗选择上的区别,采用多因素Logistic回归分析评估21基因复发风险评分的影响因素。结果 459例乳腺癌患者中低危组117例(25.5%)、中危组254例(55.3%)、高危组88例(19.2%),各组组织学分级、分子分型、孕激素受体(PR)状态及Ki67表达差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示PR状态和组织学分级是21基因复发风险评分危险度分组的影响因素。低危组、中危组和高危组接受化疗的比例有明显差异(P<0.01)。结论 21基因复发风险评分能有效整合一些重要的常规临床病理指标,并提供更多的信息,可以为辅助化疗的选择提供支持。 展开更多
关键词 21基因 复发风险评分 临床病理特征 辅助化疗 乳腺癌
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移植患者BK病毒监测的临床意义 被引量：6
3
作者 吴蓓颖 蔡刚 +2 位作者 林佳菲 范臻佳 樊绮诗 《检验医学》 CAS 2014年第5期493-497,共5页
目的通过对患者血或尿BK病毒(BKV)载量的监测,探讨性别、年龄、人巨细胞病毒(HCMV)及免疫抑制剂浓度等对患者BKV载量的影响,以及BKV载量对患者疾病的影响。方法用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测移植患者血浆及尿液的BKV载量。分析血... 目的通过对患者血或尿BK病毒(BKV)载量的监测,探讨性别、年龄、人巨细胞病毒(HCMV)及免疫抑制剂浓度等对患者BKV载量的影响,以及BKV载量对患者疾病的影响。方法用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测移植患者血浆及尿液的BKV载量。分析血浆HCMV浓度及免疫抑制剂浓度对患者BKV载量的影响以及BKV载量高低对患者肾功能的影响。结果 1 985例移植和非移植肾病患者中BKV阳性242例(12.1%),其中血浆阳性211例(10.6%),尿液阳性118例(5.9%)。骨髓移植患者、肾移植患者及非移植肾病患者的BKV阳性率差异有统计学意义(P<0.01),几乎所有移植患者检测到BKV阳性都发生在移植后的前3个月中。HCMV的感染与否与患者的BKV载量差异无统计学意义(P=0.272 9)。骨髓移植及肾移植患者血浆的免疫抑制剂浓度和环孢霉素A(CsA)浓度(>150 ng/mL)对患者BKV载量的影响差异有统计学意义(P<0.01);他克莫司浓度(FK506)(>8.0 ng/mL)与BKV载量差异无统计学意义(P=0.278 5)。BKV阳性患者与BKV阴性患者比较,肾功能中的肌酐(CREA)水平差异有统计学意义(P=0.020 7)。结论 BKV的复制与性别、年龄、是否有HCMV合并感染无关,而与血浆免疫抑制剂的浓度有关。通过对BKV载量的连续监测,调节患者免疫抑制剂的浓度,可以减少由BKV带来的二次损伤。 展开更多
关键词 BK病毒 移植 免疫抑制剂
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活动性系统性红斑狼疮患者外周血IL-17^+Foxp3^+调节性T细胞升高的意义 被引量：6
4
作者 范臻佳 薛明慧 +2 位作者 金丽兰 林佳菲 蔡刚 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期174-179,共6页
目的多项研究已观察到Foxp3^+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)具有Th17细胞可塑性,但其病理与生理意义并未阐明。本研究拟观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血Foxp3^+Treg IL-17的分泌水平,并探讨其... 目的多项研究已观察到Foxp3^+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)具有Th17细胞可塑性,但其病理与生理意义并未阐明。本研究拟观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血Foxp3^+Treg IL-17的分泌水平,并探讨其在SLE病理过程中的意义。方法研究共纳入32例SLE患者(包括14例活动性患者和18例非活动性患者)和13位年龄性别匹配的健康志愿者,通过流式细胞术分析受试者外周血IL-17在Treg及效应性T细胞中的表达及IL-17^+Foxp3^+Treg的表型特点,分析该细胞与疾病活动度等临床指标的关系。分离5例健康志愿者外周血CD4^+CD25^+T细胞,采用炎症因子处理,检测激素处理前后IL-17的表达水平。结果活动性SLE患者外周血IL-17^+Foxp3^+Treg的水平明显高于非活动性患者及健康对照者。活动性患者该亚群细胞Foxp3和CD45RA的表达水平下降,而IL-2、颗粒酶B、PD-1和GITR(糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体)的表达水平则明显升高。高IL-6等炎症因子水平能明显促进Treg表达IL-17。结论活动性SLE患者外周血高水平IL-17^+Foxp3^+Treg细胞可能与其体内高炎症水平有关,该群细胞表现出明显的效应性T细胞转化,提示其可能丢失部分免疫调节功能。 展开更多
关键词 调节性T细胞 白细胞介素17 炎症因子 免疫表型 T细胞可塑性
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上海地区地中海贫血基因突变类型的研究
5
作者 顾燕英 吴蓓颖 +2 位作者 陆一一 顾鸣敏 林佳菲 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2024年第4期385-392,共8页
目的检测上海地区疑似地中海贫血(简称"地贫")患者珠蛋白基因的序列变化,分析常见及罕见地贫突变类型及频率,为遗传咨询提供参考。方法以2016年6月至2019年12月间在上海交通大学医学院附属瑞金医院儿科、血液科和妇产科就诊的... 目的检测上海地区疑似地中海贫血(简称"地贫")患者珠蛋白基因的序列变化,分析常见及罕见地贫突变类型及频率,为遗传咨询提供参考。方法以2016年6月至2019年12月间在上海交通大学医学院附属瑞金医院儿科、血液科和妇产科就诊的4644例疑似为地贫的患者作为研究对象。采用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)和反向斑点杂交法(RDB)对患者进行常见地贫基因检测。对血液型表型与常见地贫基因检测不符、疑似携带罕见突变的样本,采用Gap-PCR及Sanger测序法进行检测。结果在4644例标本中,共检出常见地贫基因突变2194例(47.24%),包括α-地贫701例(15.09%),β-地贫1448例(31.18%),α-复合β-地贫45例(0.97%)。检出罕见珠蛋白基因突变46例,包括α-珠蛋白基因突变17例,β-珠蛋白基因突变29例,其中α-珠蛋白基因突变CD77(CCC>ACC)(HBA2:c.232C>A),β-珠蛋白基因突变NG_000007.3:g.70567_71015del449、Codon102(-A)(HBB:c.308_308delA)和IVS-Ⅱ-636(A>G)(HBB:c.316-215A>G)为新发现的基因突变类型。结论上述研究中上海地区常见地贫基因的检出率为47.24%,检出罕见突变46例,地贫基因突变类型多样,可为更准确的基因诊断及遗传咨询提供参考。 展开更多
关键词 地中海贫血 实验室检测 基因突变 罕见型
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肿瘤坏死因子受体相关因子4促表皮生长因子受体激酶活性及对肺癌的促进作用
6
作者 聂小蒙 董丹凤 +2 位作者 林佳菲 吴蓓颖 蔡刚 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期968-978,共11页
目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)促进表皮生长因子受体(EGFR)异常激活的作用及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2015年1月至2017年5月于海军军医大学第一附属医院行肺腺癌切除患者的肿瘤组织,免疫组化检测肺癌... 目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)促进表皮生长因子受体(EGFR)异常激活的作用及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2015年1月至2017年5月于海军军医大学第一附属医院行肺腺癌切除患者的肿瘤组织,免疫组化检测肺癌组织中TRAF4和Ki-67的表达,实时荧光定量PCR检测Cyclin D和Vimentin mRNA的表达。通过异基因移植模型研究TRAF4对肺癌A549细胞的肿瘤生长能力的影响,采用细胞计数试剂盒8和BrdU实验检测TRAF4或EGFR对肿瘤增殖能力的影响,Transwell实验检测肿瘤细胞转移及侵袭能力。构建不同的TRAF4和EGFR结构域缺失表达载体转染细胞,通过免疫共沉淀实验研究TRAF4和EGFR相互作用方式。结果非小细胞肺癌(NSCLC)组织中TRAF4的表达与Ki-67、Cyclin D和Vimentin的表达呈正相关(r 2分别为0.438、0.695和0.736,均P<0.01)。NSCLC患者肿瘤组织免疫组化检测结果显示,高表达TRAF4的组织同时高表达Ki-67。TRAF4高表达(TRAF4阳性率>30%)患者较TRAF4低表达患者(TRAF4阳性率≤30%)的无进展生存时间缩短(中位无进展生存时间分别为12和19个月,P=0.034)。Traf4^(-/-)细胞较Traf4^(+/+)细胞增殖能力减弱,形成肿瘤体积小(P<0.05)。对形成的肿瘤组织进行Ki-67染色,Cyclin D和Vimentin mRNA表达水平检测,结果显示,Traf4^(-/-)细胞形成的肿瘤组织中Ki-67表达水平[(45.6±8.7)%]低于Traf4^(+/+)细胞形成的肿瘤组织[(62.3±10.3)%,P=0.015],Cyclin D mRNA表达水平(1.01±0.15)和Vimentin mRNA表达水平(1.01±0.12)均低于后者(分别为3.41±0.32和3.12±0.18,均P<0.05)。Western blot结果显示,随着细胞内TRAF4表达水平升高,无论是野生型还是活化突变型细胞,EGFR的磷酸化水平均明显升高。基因敲除EGFR后,A549细胞相对增殖、迁移和侵袭能力减弱(均P<0.01)。免疫共沉淀实验显示,TRAF4通过TRAF结构域与EGFR的近膜区肽段结合,TRAF4过表达条件下,EGFR分子之间的相互结合增� 展开更多
关键词 肺肿瘤 表皮生长因子受体 肿瘤坏死因子受体相关因子4 自身磷酸化
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生存素检测在膀胱癌实验诊断中的意义 被引量：3
7
作者 徐锋 曹文俊 +3 位作者 吴华成 王枕亚 林佳菲 樊绮诗 《诊断学理论与实践》 2005年第3期206-208,共3页
目的:检测膀胱癌患者血液和尿液细胞中生存素(survivin)基因的表达并评价其临床意义。方法:取40例膀胱移行细胞癌患者(TCC组)、19例其他泌尿系统疾病患者(对照组)和20名健康成人(正常人组)的外周血和新鲜尿液,以实时逆转录-聚合酶链反应... 目的:检测膀胱癌患者血液和尿液细胞中生存素(survivin)基因的表达并评价其临床意义。方法:取40例膀胱移行细胞癌患者(TCC组)、19例其他泌尿系统疾病患者(对照组)和20名健康成人(正常人组)的外周血和新鲜尿液,以实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血有核细胞及尿液脱落细胞中生存素基因的表达,并检测甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的表达作为对照。结果:TCC组患者外周血生存素25例阳性(62.5%),对照组和正常人组均为阴性;尿脱落细胞检测结果示TCC组28例阳性(70.0%),对照组仅2例阳性(10.5%),而正常人组均为阴性。TCC组阳性率与其他2组差异有显著性(P<0.01),而在不同病理分级的TCC患者的阳性率无统计学差异(P>0.05)。合并分析血液和尿液中的生存素检测结果对TCC的总检出率达87.5%,对TCC组Ⅱ级和Ⅲ级的检出率(96.6%)显著高于Ⅰ级(63.6%)(P<0.05)。结论:生存素基因在膀胱癌患者血液和尿液细胞中重新表达,运用实时RT-PCR法测定血液和尿液细胞中生存素表达具有较好的肿瘤特异性,可作为一种新的检测膀胱癌的无创性方法。 展开更多
关键词 生存素 移行细胞癌 膀胱 实时RT—PCR 外周血 尿液
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21基因复发风险评分在乳腺黏液癌中的临床应用价值 被引量：1
8
作者 林佳菲 陈小松 +2 位作者 吴蓓颖 蔡刚 林琳 《检验医学》 CAS 2021年第7期714-718,共5页
目的探讨21基因复发风险评分在乳腺黏液癌(MBC)中的临床应用价值。方法选取接受手术治疗的96例雌激素受体(ER)阳性、人类表皮生长因子受体2(HER-2)阴性的MBC患者,收集所有患者的临床资料。提取所有患者肿瘤组织石蜡包埋标本中的RNA,采... 目的探讨21基因复发风险评分在乳腺黏液癌(MBC)中的临床应用价值。方法选取接受手术治疗的96例雌激素受体(ER)阳性、人类表皮生长因子受体2(HER-2)阴性的MBC患者,收集所有患者的临床资料。提取所有患者肿瘤组织石蜡包埋标本中的RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测21基因的表达,计算21基因复发风险评分,根据评分结果将所有患者分为低危组(<18分)、中危组(18~30分)和高危组(>30分)。采用多因素Logistic回归分析评估21基因复发风险评分的独立影响因素。采用Kaplan-Meier生存曲线评估无病生存期(DFS)。结果96例MBC患者中低危组23例(24.0%)、中危组63例(65.6%)、高危组10例(10.4%)。低危组、中危组及高危组之间孕激素受体(PR)表达、分子分型及肿块大小差异均有统计学意义(P<0.05),年龄、绝经时间、stage分期、Ki67表达差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,PR低表达是MBC患者21基因复发风险评分为高危的独立危险因素[比值比(OR)=7.271,95%可信区间(CI)为0.728~3.240]。化疗的选择与Ki67表达、分子分型、PR表达及21基因复发风险评分有关(P<0.05),与年龄、肿块大小、绝经时间、手术方式、stage分期无关(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,21基因复发风险评分及Ki67表达是选择化疗的独立影响因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,低危组、中危组及高危组之间DFS差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在MBC患者中,21基因复发风险评分与PR表达密切相关,是辅助化疗选择的独立影响因素,但不能预测患者DFS的长短。 展开更多
关键词 21基因复发风险评分 乳腺黏液癌 临床病理特征 辅助化疗
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PTEN及其突变体可诱导慢病毒表达系统的构建
9
作者 林佳菲 顾志冬 +3 位作者 倪培华 刘湘帆 方旭前 樊绮诗 《诊断学理论与实践》 2013年第2期189-193,共5页
目的:构建可诱导表达野生型或突变型第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的慢病毒表达体系,为进一步研究PTEN与肿瘤间的关系提供理想的实验工具。方法:提取甲状腺癌、肺癌及其癌旁组织的RNA,经反转录后扩增PTEN片段,将其... 目的:构建可诱导表达野生型或突变型第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的慢病毒表达体系,为进一步研究PTEN与肿瘤间的关系提供理想的实验工具。方法:提取甲状腺癌、肺癌及其癌旁组织的RNA,经反转录后扩增PTEN片段,将其连接入慢病毒载体,与病毒包装质粒共转染人胚肾T细胞(293T)细胞,获得病毒。将其感染MDA-MB-231细胞,用嘌呤霉素筛选,获得稳定表达的细胞株。采用蛋白印迹法检测稳定转染的细胞株中PTEN基因的表达情况,用软琼脂克隆形成实验检测细胞株的克隆形成能力。结果:在甲状腺癌和肺癌中发现PTEN突变体;蛋白印迹检测结果证实野生型和突变型PTEN的慢病毒表达体系构建成功。突变型PTEN的克隆形成能力强于野生型PTEN。结论:发现了PTEN突变体,并成功构建了野生型和突变型PTEN基因的可诱导慢病毒表达体系,突变型PTEN不但有抑癌作用,还有致癌作用。 展开更多
关键词 第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因 突变型 慢病毒表达载体 机制
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HVEM过表达树突状细胞对自身免疫性心肌炎的作用
10
作者 蔡刚 汪怀周 +2 位作者 吴蓓颖 林佳菲 沈茜 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1017-1022,共6页
目的 探讨单纯疱疹病毒进入介导子（herpes virus entry mediator,HVEM）基因修饰的树突状细胞（dendritic cells,DC）能否防治肌凝蛋白诱导的小鼠心肌炎模型,并分析其机制.方法 以肌凝蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠制备实验性自身免疫性心肌... 目的 探讨单纯疱疹病毒进入介导子（herpes virus entry mediator,HVEM）基因修饰的树突状细胞（dendritic cells,DC）能否防治肌凝蛋白诱导的小鼠心肌炎模型,并分析其机制.方法 以肌凝蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠制备实验性自身免疫性心肌炎（EAM）动物模型,通过小鼠尾静脉输注肌凝蛋白冲击的HVEM基因修饰的DC,观察其对心肌炎的免疫保护作用,并探讨其可能机制.结果 HVEM基因修饰的DC能够抑制自身免疫应答造成的小鼠心肌损伤,其机制主要是通过分泌IL-10,并诱导产IL-10调节性T细胞（Tr1）抑制自身反应性T细胞的活化.结论 HVEM基因修饰的DC能抑制EAM的发生,并且HVEM介导的信号网络可能在不同的细胞中产生不同的作用. 展开更多
关键词 实验性自身免疫性心肌炎 单纯疱疹病毒进入介导子 免疫调节 树突状细胞
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